園林植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1、GDOU-B-11-112廣東海洋大學(xué)學(xué)生實(shí)驗(yàn)報(bào)告書（學(xué)生用表）實(shí)驗(yàn)名稱實(shí)驗(yàn)一課程名稱園林工程管理課程號學(xué)院(系)農(nóng)學(xué)院專業(yè)園林班級1102 學(xué)生姓名馬經(jīng)國學(xué)號2實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)林果樓實(shí)驗(yàn)日期2013 1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?2 實(shí)驗(yàn)原理 3 設(shè)計(jì)要求a.為減少污染，組培室最好設(shè)緩沖走道。b.培養(yǎng)室應(yīng)建在房屋南面，南，東或西應(yīng)有大窗盡量利用自然光。c.培養(yǎng)室房間宜小，門也宜小，最好為滑門，以保溫節(jié)能；接種室房間也宜小，備有準(zhǔn)備小間，以更換衣帽等，超凈臺較寬，門應(yīng)稍大，雙扇滑門，內(nèi)裝紫外線燈。4 把自己居住的房子改造成一個(gè)小型組培實(shí)驗(yàn)室。要求畫出原房子及改造后的實(shí)驗(yàn)室平面圖，并標(biāo)出各房間功能（化學(xué)實(shí)驗(yàn)室、無菌接種

2、室、培養(yǎng)室等。成績指導(dǎo)教師豐 鋒日期注:請用A4紙書寫，不夠另附紙。第1頁，共1頁GDOU-B-11-112廣東海洋大學(xué)學(xué)生實(shí)驗(yàn)報(bào)告書（學(xué)生用表）實(shí)驗(yàn)名稱實(shí)驗(yàn)二、培養(yǎng)基母液的配制課程名稱園林植物組織培養(yǎng)課程號學(xué)院(系)農(nóng)學(xué)院專業(yè)園林班級1102 學(xué)生姓名馬經(jīng)國學(xué)號2實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)興農(nóng)樓318實(shí)驗(yàn)日期2013/3/ 1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆张囵B(yǎng)基母液的配制方法。2 實(shí)驗(yàn)原理配制培養(yǎng)基時(shí)，為使用方便和用量準(zhǔn)確，根據(jù)培養(yǎng)基配方各試劑用量，擴(kuò)大若干倍后再準(zhǔn)確稱量，分別先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用時(shí)按比例吸取母液即可。基本培養(yǎng)基一般分為大量元素母液、微量元素母液、鐵鹽母液和有機(jī)化合物母液，植物生長調(diào)節(jié)劑母

3、液單獨(dú)配制。3 實(shí)驗(yàn)步驟確定配方和擴(kuò)大倍數(shù) 清潔容器 稱量藥品 分別溶解 混合定容 貼標(biāo)簽（注明藥品名稱、質(zhì)量、擴(kuò)大倍數(shù)、定容體積、配制人、配制日期等）。4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析表1 MS培養(yǎng)基大量元素母液電導(dǎo)率（單位：ms/cm）母液編號1234第1組第2組第3組第4組第5組第6組平均值 結(jié)果分析：成績指導(dǎo)教師豐 鋒日期注:請用A4紙書寫，不夠另附紙。第頁，共頁5 根據(jù)表2中各母液濃度，計(jì)算配制不同體積的MS十,-D 1 mg/L6-BA 0.5 mg/L培養(yǎng)基所需吸取的母液或所稱取的藥品量，并將結(jié)果填入下表：表2 MS母液濃度及擴(kuò)大倍數(shù)表母液名稱配方規(guī)定量母液濃度/擴(kuò)大倍數(shù)定容體積（ml）母液吸

4、取量（ml）或質(zhì)量（g）1 L0.5 L0.2 L1號10×500CaCl2·2H2O44010×500KH2PO417010×500FeSO4·7H2O100×500微量元素100×1000有機(jī)成分100×1000肌醇100100×10002,4-D10.5 mg/ml10006 - BA0.51.0 mg/ml1000NAA0.1 mg/ml1000IBA1.0 mg/ml1000GA30.5 mg/ml1000Ad1.0 mg/ml1000KT0.5 mg/ml1000蔗糖30 g/L瓊脂4.5 g

5、/L成績指導(dǎo)教師豐 鋒日期注:請用A4紙書寫，不夠另附紙。第頁，共頁GDOU-B-11-112廣東海洋大學(xué)學(xué)生實(shí)驗(yàn)報(bào)告書（學(xué)生用表）實(shí)驗(yàn)名稱實(shí)驗(yàn)三、MS培養(yǎng)基的配制與滅菌課程名稱園林植物組織培養(yǎng)課程號學(xué)院(系)農(nóng)學(xué)院專業(yè)園林班級 學(xué)生姓名學(xué)號實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)興農(nóng)樓318實(shí)驗(yàn)日期 1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?學(xué)習(xí)并掌握MS培養(yǎng)基的配制和滅菌過程。2 實(shí)驗(yàn)原理培養(yǎng)基是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養(yǎng)料，一般含碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機(jī)鹽（包括微量元素）以及維生素和水等,通常采用母液法配制。培養(yǎng)基含有植物生長所必需的各類營養(yǎng)物質(zhì)，也是各種細(xì)菌、真菌滋生繁殖的極好場所，因此必需對培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌處理，確保無

6、菌操作的順利進(jìn)行。3 實(shí)驗(yàn)步驟3.1 培養(yǎng)基的配制A 確定配方:MS+2，4-D 0.5 mg/L、MS+2，4-D 1 mg/L、MS+2，4-D 2 mg/LB 配制數(shù)量：每組1升，分裝30瓶，1人5-6瓶。C 稱量瓊脂，加水到培養(yǎng)基最終容積的2/3-3/4, 加熱煮沸溶解。 D 吸取母液：根據(jù)配方要求，按順序用量筒或移液管吸取大量元素、微量元素、鐵鹽、維生素、植物激素等各種母液，放在干凈的燒杯中。E 定容調(diào)pH值：把母液、蔗糖，倒入煮好的瓊脂中定容，混勻，用0.1 N NaOH或HCl調(diào)pH，一般為5.6-5.8.F 分裝：把培養(yǎng)基分到所選用的培養(yǎng)容器中（1 cm左右高，一般每瓶3035

7、 ml），然后蓋瓶蓋并擰緊。3.2 培養(yǎng)基的滅菌（高壓濕熱滅菌）高壓滅菌鍋先加水，放入培養(yǎng)基，通電，0.050.07 MPa（0.50.7 kg/cm2）時(shí)排氣到0， 0.11 MPa （1.1 kg/cm2、121）計(jì)時(shí)，維持在0.11-0.12 MPa（1.11.2 kg/cm2）之間20 min. 排氣到0后取出培養(yǎng)基，冷卻備用。4 培養(yǎng)基配制滅菌過程中的注意事項(xiàng)成績指導(dǎo)教師豐 鋒日期注:請用A4紙書寫，不夠另附紙。第頁，共頁GDOU-B-11-112廣東海洋大學(xué)學(xué)生實(shí)驗(yàn)報(bào)告書（學(xué)生用表）實(shí)驗(yàn)名稱實(shí)驗(yàn)四、外植體滅菌及愈傷組織誘導(dǎo)課程名稱園林植物組織培養(yǎng)課程號學(xué)院(系)農(nóng)學(xué)院專業(yè)園林班級

8、學(xué)生姓名學(xué)號實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)興農(nóng)樓318實(shí)驗(yàn)日期 1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握外植體滅菌、無菌操作技術(shù)及愈傷組織誘導(dǎo)的方法。2 實(shí)驗(yàn)原理 植物組織培養(yǎng)是應(yīng)用無菌操作的方法培養(yǎng)離體的植物器官或組織，甚至單個(gè)細(xì)胞的過程。如果組織培養(yǎng)使用的植物材料是帶菌的，在接種前就必須選擇合適的消毒劑對植物外植體進(jìn)行表面消毒，獲得無菌材料去進(jìn)行組織培養(yǎng)，這是取得組織培養(yǎng)成功的最基本的前提和重要保證。由于植物細(xì)胞具有全能性，外植體在合適的培養(yǎng)基上，通過脫分化，形成一種能迅速增殖的無特定結(jié)構(gòu)和功能的細(xì)胞團(tuán)愈傷組織。而植物生長調(diào)節(jié)劑如，4-D等是誘導(dǎo)外植體形成愈傷組織的重要影響因素。3 實(shí)驗(yàn)材料 甘蔗、胡蘿卜、非洲茉莉等4 實(shí)驗(yàn)用具 培

9、養(yǎng)基、無菌碟、無菌杯、無菌水、接種刀、鑷子、酒精、升汞等4 實(shí)驗(yàn)步驟4.1 超凈工作臺清潔：用75酒精仔細(xì)擦拭超凈工作臺臺面，開啟超凈工作臺。4.2 選擇健壯無病蟲的甘蔗和胡蘿卜 甘蔗：小心去除外葉，找到并保留頂芽最后一節(jié)（保留直徑>1.0 cm），無菌條件下細(xì)心去除外葉（保留直徑0.8 cm 左右），避免心葉帶菌，切成 1.0 mm左右薄片。胡蘿卜：流水清潔材料，將肉質(zhì)根橫切成約3.0 cm厚的切片，轉(zhuǎn)入無菌瓶，用75%酒精浸0秒，移入添加滴吐溫-20 (Tween - 20)的0.15%氯化汞溶液滅菌515 min，無菌水漂洗45次，每次23分鐘，縱切1分為4，再橫切成約11.5 m

10、m 厚的小塊。非洲茉莉：選擇生長健壯的頂芽或側(cè)芽，流水沖洗，去除葉片，保留5 mm左右葉柄，75酒精滅菌30秒，0.15 HgCl2滅菌15 min，無菌水漂洗45次，每次23 min，適當(dāng)切除葉柄、莖斷等與HgCl2接觸的傷口部位12 mm，接種。4.3 接種 每瓶培養(yǎng)基接46塊材料，把材料置于培養(yǎng)室內(nèi)暗培養(yǎng)，同時(shí)在實(shí)驗(yàn)記錄表上注明接種日期、材料名稱、接種數(shù)量（瓶）、培養(yǎng)基名稱等。4.4清潔超凈工作臺臺面、清洗容器。4.5 3天觀察一次材料生長或污染情況，統(tǒng)計(jì)污染率及其愈傷組織誘導(dǎo)率。5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析 實(shí)驗(yàn)結(jié)果見下表： 名稱配方接種數(shù)污染數(shù)污染率（）愈傷組織誘導(dǎo)率（）甘蔗MS+2,4-D胡

11、蘿卜MS+2,4-D非洲茉莉MS+2,4-D合計(jì)成績指導(dǎo)教師豐 鋒日期注:請用A4紙書寫，不夠另附紙。第頁，共頁GDOU-B-11-112廣東海洋大學(xué)學(xué)生實(shí)驗(yàn)報(bào)告書（學(xué)生用表）實(shí)驗(yàn)名稱實(shí)驗(yàn)五、愈傷組織的器官分化課程名稱園林植物組織培養(yǎng)課程號學(xué)院(系)農(nóng)學(xué)院專業(yè)園林班級 學(xué)生姓名學(xué)號實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)興農(nóng)樓318實(shí)驗(yàn)日期 1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握運(yùn)用植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)調(diào)控愈傷組織分化的方法。2 實(shí)驗(yàn)原理 離體的植物組織在生長調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)下，可“脫分化”形成均一的無組織結(jié)構(gòu)的細(xì)胞團(tuán)，即愈傷組織。這種愈傷組織在一定條件下，又能“再分化”出根和芽等器官。 3 實(shí)驗(yàn)材料 實(shí)驗(yàn)四誘導(dǎo)的甘蔗（或胡蘿卜）愈傷組織4 實(shí)驗(yàn)用具 無

12、菌碟、接種刀、鑷子、酒精、升汞等5 實(shí)驗(yàn)步驟 5.1 培養(yǎng)基的配制：MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 0.5 mg/L；MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 1.0 mg/L ；MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 1.0 mg/L+KT 0.5 mg/L。4.2 無菌條件下將愈傷組織，轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基中，置于26、在2 000 Ix、每天14 h光照下培養(yǎng)，3天觀察一次愈傷組織的形態(tài)變化，3-4周后統(tǒng)計(jì)分化率。6 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析成績指導(dǎo)教師豐 鋒日期注:請用A4紙書寫，不夠另附紙。第頁，共頁GDOU-B-11-112廣東海洋大學(xué)學(xué)生實(shí)驗(yàn)報(bào)告書（學(xué)生用表）實(shí)驗(yàn)名稱實(shí)驗(yàn)六、再生植株的移植課程名稱園林植物組織培養(yǎng)課程號學(xué)院(系)農(nóng)學(xué)院專業(yè)園林班級 學(xué)生姓名學(xué)號實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)興農(nóng)樓318實(shí)驗(yàn)日期 1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握再生植株的移栽技術(shù)。2 實(shí)驗(yàn)原理 試管苗要從培養(yǎng)基（恒溫、高濕、弱光）中移栽到土壤（變溫、低濕、強(qiáng)光）里，這是從“異養(yǎng)”到“自養(yǎng)”的轉(zhuǎn)變，這個(gè)轉(zhuǎn)變要有個(gè)逐漸煅煉和適應(yīng)的過程，才能保證有較高的移栽成活率。3 實(shí)驗(yàn)材料 試管苗、珍珠巖、椰糠、泥炭、營養(yǎng)缽（營養(yǎng)袋）、沙、泥土等4 實(shí)驗(yàn)步驟 準(zhǔn)備培養(yǎng)土：將珍珠巖、椰糠（沙）、菜園土按2：2：6混勻（可加10左右腐熟有機(jī)肥），裝入營養(yǎng)缽（或營養(yǎng)袋），先裝2/33/4左右，再用沙裝滿，置于培養(yǎng)盤中。 澆水或Hoag