分子實(shí)驗(yàn)常用試劑、緩沖液配制（Word）

1、分子實(shí)驗(yàn)常用試劑、緩沖液的配制方法1、1M Tris-HCl 組份濃度 1 M Tris-HCl （pH7.4，7.6，8.0） 配制量 1L 配置方法 1. 稱(chēng)量121.1gTris置于1L燒杯中。 2. 加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?3. 按下表量加入濃鹽酸調(diào)節(jié)所需要的pH值。 pH值 濃HCl 7.4 約70mL 7.6 約60mL 8.0 約42mL 4. 將溶解定容至1L。 5. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。 注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因?yàn)門(mén)ris溶液的pH值隨溫度的變化差很大，溫度每升高1，溶液的pH值大約降低0.03個(gè)單位。 2、1.5 M Tris-H

2、Cl 組份濃度 1.5 M Tris-HCl （pH8.8） 配制量 1L 配置方法 1.稱(chēng)取181.7gTris置于1L燒杯中。 2. 加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?3. 用濃鹽酸調(diào)pH值至8.8。 4. 將溶液定容至1L。 5. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。 注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因?yàn)門(mén)ris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高1，溶液的pH值大約降低0.03個(gè)單位。 3、10×TE Buffer 組份濃度 100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA （pH 7.4，7.6，8.0） 配制量 1L 配置方法 1. 量取下列溶液，置于

3、1L燒杯中。 1 M Tris-HCl Buffer（pH7.4，7.6，8.0） 100mL 500 mM EDTA（pH8.0） 20mL 2. 向燒杯中加入約800mL的去離子水，均勻混合。 3. 將溶液定至1L后，高溫高壓滅菌。 4. 室溫保存。4、3 M 醋酸鈉 組份濃度 3 M 醋酸鈉 （pH5.2） 配制量 100mL 配置方法 1. 稱(chēng)取40.8gNaOAc3H2O置于100200mL燒杯中，加入約40mL的去離子水?dāng)嚢枞芙狻?2. 加入冰乙酸調(diào)節(jié)pH值至5.2。 3. 加入去離子水將溶液定容至100mL。 4. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。5、PBS Buffer 組份濃度 1

4、37 mM NaCl，2.7mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4 配制量 1L 配置方法 1. 稱(chēng)量下列試劑，置于1L燒杯中。 NaCl 8 g KCl 0.2g 2 / 41 Na2HPO4 1.42 g KH2PO4 0.27g 2. 向燒杯中加入約800 mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?3. 滴加HCl將pH值調(diào)節(jié)至7.4，然后加入去離子水將溶液定容至1L。 4. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。 注意：上述PBS Buffer中無(wú)二價(jià)陽(yáng)離子，如需要，可在配方中補(bǔ)充1mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。6、10 M醋酸銨 組份濃度 10 M醋酸銨 配制量 1

5、00mL 配置方法 1. 稱(chēng)量77.1g醋酸銨置于100200 mL燒杯中，加入約30 mL的去離子水?dāng)嚢枞芙狻?2.加去離子水將溶液定容至100mL。 3.使用0.22m濾膜過(guò)濾除菌。 4.密封瓶口于室溫保存。 注意：醋酸銨受熱易分解，所以不能高溫高壓滅菌。7、Tris- HCl平衡苯酚 配置方法 1. 使用原料：大多數(shù)市售液化苯酚是清亮無(wú)色的，無(wú)需重蒸餾便可用于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。但有些液化苯酚呈粉紅色或黃色，應(yīng)避免使用。同時(shí)也應(yīng)避免使用結(jié)晶苯酚，結(jié)晶苯酚必須在160對(duì)其進(jìn)行重蒸餾除去諸如醌等氧化產(chǎn)物，這些氧化產(chǎn)物可引起磷酸二酯鍵的斷裂或?qū)е翿NA和DNA的交聯(lián)等。因此，苯酚的質(zhì)量對(duì)DNA、R

6、NA的提取極為重要，我們推薦使用高質(zhì)量的苯酚進(jìn)行分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。 2. 操作注意：苯酚腐蝕性極強(qiáng)，并可引起嚴(yán)重灼傷，操作時(shí)應(yīng)戴手套及防護(hù)鏡等。所有操作均應(yīng)在通風(fēng)櫥中進(jìn)行，與苯酚接觸過(guò)的皮膚部位應(yīng)用大量水清洗，并用肥皂和水洗滌，忌用乙醇。 3. 苯酚平衡：因?yàn)樵谒嵝詐H條件下DNA分配于有機(jī)相，因此使用苯酚前必須對(duì)苯酚進(jìn)行平衡使其pH值達(dá)到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下： 液化苯酚應(yīng)貯存于-20，此時(shí)的苯酚呈現(xiàn)結(jié)晶狀態(tài)。從冰柜中取出的苯酚首先在室溫下放置使其達(dá)到室溫，然后在68水浴中使苯酚充分溶解。 加入羥基喹啉（8-Quinolinol）至終濃度0.1。該化合物是一種還原劑、RNA酶的不完全

7、抑制劑及金屬離子的弱螯合劑，同時(shí)因其呈黃色。有助于方便識(shí)別有機(jī)相。 加入等體積的1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力攪拌器攪拌15分鐘，靜置使其充分分層后，除去上層水相。 重復(fù)操作步驟。 加入等體積的0.1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力攪拌器攪拌15分鐘，靜置使其充分分層后，除去上層水相。 重復(fù)操作步驟，稍微殘留部分上層水相。 使用pH試紙確認(rèn)有機(jī)相的pH值大于7.8。 將苯酚置于棕色玻璃瓶中4避光保存。 8、苯酚/氯仿/異戊醇 配置方法 1. 說(shuō)明：從核酸樣品中除去蛋白質(zhì)時(shí)常常使用苯/酚/氯仿/異戊醇（25：24：1）。氯仿可使蛋白（25 ：24 ：1） 質(zhì)變性并有助

8、于液相與有機(jī)相的分離，而異戊醇則有助于消除抽提過(guò)程中出現(xiàn)的氣泡。 2. 配置方法：將Tris-HCl平衡苯酚與等體積的氯仿/異戊醇（24：1）均勻混合后，移入棕色玻璃瓶中4保存。 9、10（W/V）SDS 組份濃度 10（W/V）SDS 配制量 100mL 配置方法 1.稱(chēng)量10g高純度的SDS置于100200mL燒杯中，加入約80mL的去離子水，68加熱溶解。 2. 滴加數(shù)滴濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.2。 3. 將溶液定容至100mL后，室溫保存。10、2 N NaOH 組份濃度 2N NaOH 配制量 100mL 配置方法1.量取80mL去離子水置于100200mL塑料燒杯中（NaOH溶解過(guò)程

9、中大量放熱，有可能使玻璃燒杯炸裂）。 2. 稱(chēng)取8g NaOH小心地逐漸加入到燒杯中，邊加邊攪拌。 3. 待NaOH完全溶解后，用去離子水將溶液體積定容至100mL。 4. 將溶液轉(zhuǎn)移至塑料容器中后，室溫保存。11、2.5 N HCl 組份濃度 2.5 N HCl 配制量 100mL 配置方法 1. 在78.4mL的去離子水中加入21.6mL的濃鹽酸（11.6N），均勻混合。 2. 室溫保存。12、5 M NaCl 組份濃度 5 M NaCl 配制量 1L 配置方法 1. 稱(chēng)取292.2g NaCl置于1L燒杯中，加入約800mL的去離子水后攪拌溶解。 2. 加去離子水將溶液定容至1L后，適量

10、分成小份。 3. 高溫高壓滅菌后，4保存。13、20（W/V）Glucose 組份濃度 20（W/V）Glucose 配制量 100mL 配置方法 1. 稱(chēng)取20g Glucose置于100200mL燒杯中，加入約80mL的去離子水后，攪拌溶解。 2. 加去離子水將溶液定容至100mL。 3. 高溫高壓滅菌后，4保存。14、Solution I 組份濃度 25 mM Tris-HCl（pH8.0），10mM EDTA，50mM Glucose （質(zhì)粒提取用） 配制量 1L 配置方法 1. 量取下列溶液，置于1L燒杯中。 1M Tris-HCl（pH8.0） 25mL 0.5 M EDTA（pH

11、8.0） 20mL 20Glucose（1.11M） 45mL dH2O 910mL 2. 高溫高壓滅菌后，4保存。 3. 使用前每50 mL的Soliution I中加入2mL的RNase A（20mg/mL）。15、Solution II 組份濃度 250mM NaOH，1（W/V）SDS （質(zhì)粒提取用） 配制量 500mL 配置方法 1. 量取下列溶液置于500mL燒杯中。 10SDS 50mL 2N NaOH 50mL 2. 加滅菌水定容至500mL，充分混勻。 3. 室溫保存。此溶液保存時(shí)間最好不要超過(guò)一個(gè)月。 注意：SDS易產(chǎn)生氣泡，不要?jiǎng)×覕嚢琛?16、Solution III

12、組份濃度 3M KOAc，5M CH3COOH （質(zhì)粒提取用） 配制量 500mL 配置方法 1. 量取下列溶液置于500mL燒杯中。 KOAc 147g CH3COOH 57.5mL 2. 加入300mL去離子水后攪拌溶解。 3. 加去離子水將溶液定容至500mL。 4. 高溫高壓滅菌后，4保存。17、0.5M EDTA 組份濃度 0.5 M EDTA (pH8.0) 配制量 1L 配置方法 1. 稱(chēng)取186.1g Na2EDTA2H2O，置于1L燒杯中。 2. 加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢琛?3. 用NaOH調(diào)節(jié)pH值值8.0（約20g NaOH）。 注意：pH值至8.0時(shí)，EDT

13、A才能完全溶解。 4. 加去離子水將溶液定容至1L。 5. 適量分成小份后，高溫高壓滅菌。 6. 室溫保存。18、1 M DTT 組份濃度 1 M DTT 配制量 20mL 配置方法 1. 稱(chēng)取3.09g DTT，加入到50mL塑料離心管內(nèi)。 2. 加20mL的0.01 M 的NaOAc（pH5.2），溶解后使用0.22m濾器過(guò)濾除菌。 3. 適量分成小份后，-20保存。19、10mM ATP 組份濃度 10mM ATP 配制量 20mL 配置方法 1. 稱(chēng)取121mg Na2ATP3H2O，加入到50mL塑料離心管內(nèi)。 2. 加20mL的25mM Tris-HCl（pH8.0），攪拌溶解。

14、3. 適量分成小份，-20保存。分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)常用培養(yǎng)基的配制方法1、Ampicillin 組份濃度 100mg/ml Ampicillin （100mg/ml） 配制量 50mL 配置方法 1. 稱(chēng)量5g Ampicillin置于50mL離心管中。 2. 加入40mL滅菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。 3. 用0.22m濾膜過(guò)濾除菌。 4. 小份分裝（1mL/份）后，-20保存。2、IPTG 組份濃度 24mg/mL IPTG （24mg/mL） 配制量 50mL 配置方法 1. 稱(chēng)量1.2g IPTG置于50mL離心管中。 2. 加入40mL滅菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。

15、3. 用0.22m濾膜過(guò)濾除菌。 4. 小份分裝（1mL/份）后，-20保存。3、X- Gal 組份濃度 20mg/mL X- Gal （20mg/mL） 配制量 50mL 配置方法 1. 稱(chēng)取1g X-Gal置于50mL離心管中。 2. 加入40mL DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后，定容至50mL。 3. 小份分裝（1mL/份）后，-20保存。 4、LB培養(yǎng)基 組份濃度 1（W/V）Tryptone，0.5（W/V）Yeast Extract，1（W/V）NaCl 配制量 1L 配置方法 1. 稱(chēng)量下列試劑，置于1L燒杯中 Tryptone 10g Yeast Extract 5g

16、NaCl 10g 2. 加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?3. 滴加5N NaOH（約0.2mL），調(diào)節(jié)pH值至7.0。 4. 高溫高壓滅菌后，4保存。5、LB/Amp培養(yǎng)基 組份濃度 1（W/V） Tryptone 0.5（W/V） Yeast Extract 1（W/V） NaCl 0.1mg/mL Ampicillin 配制量 1L 配置方法 1. 稱(chēng)量下列試劑，置于1L燒杯中 Tryptone 10g Yeast Extract 5g NaCl 10g 2. 加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?3. 滴加5N NaOH（約0.2mL），調(diào)節(jié)pH值至7.0。 4. 加去

17、離子水將培養(yǎng)基定容至1L。 5. 高溫高壓滅菌后，冷卻至室溫。 6. 加入1mL Ampicillin（100mg/mL）后均勻混合。 7. 4保存。 6、TB培養(yǎng)基 組份濃度 1.2（W/V） Tryptone 2.4（W/V） Yeast Extract 0.4（V/V） Glycerol 17mM KH2PO4 72mM K2HPO4 配制量 1L 配置方法 1. 配制磷酸鹽緩沖液（0.17M KH2PO4，0.72M K2HPO4）100mL。 2.稱(chēng)取下列試劑，置于1L燒杯中。 Tryptone 12g Yeast Extract 24g Glycerol 4mL 3. 加入約800

18、mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?4. 加去離子水將培養(yǎng)基定容至1L后，高溫高壓滅菌。 5. 待溶液冷卻至60以下時(shí)，加入100mL的上述滅菌磷酸鹽緩沖液。 6. 4保存。7、TB/Apm培養(yǎng)基 組份濃度 1.2（W/V） Tryptone 2.4（W/V） Yeast Extract 0.4（V/V） Glycerol 17mM KH2PO4 72mM K2HPO4 0.1mg/mL Ampicillin 配制量 1L 配置方法1. 配制磷酸鹽緩沖液（0.17M KH2PO4，0.72M K2HPO4）100mL。溶解2.31g KH2PO4和2.54g K2HPO4于90mL的去離子水中，攪

19、拌溶解后，加去離子水定容至100mL，高溫高壓滅菌。 2. 稱(chēng)取下列試劑，置于1L燒杯中。 Tryptone 12g Yeast Extract 24g Glycerol 4mL 3. 加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?4. 加去離子水將培養(yǎng)基定容至1L后，高溫高壓滅菌。 5. 待溶液冷卻至60以下時(shí)，加入100mL的上述滅菌磷酸鹽緩沖液和1mL Ampicillin（100mg/mL）。 6. 均勻混合后4保存。8、SOB培養(yǎng)基 組份濃度 2（W/V） Tryptone 0.5（W/V） Yeast Extract 0.05（W /V） NaCl 2.5mM KCl 10mM Mg

20、Cl2 配制量 1L 配置方法1. 配制250mM KCl溶液。 在90mL的去離子水中溶解1.86g KCl后，定容至100mL。 2. 配制2M MgCl2溶液。在90mL的去離子水中溶解19g MgCl2后，定容至100mL，高溫高壓滅菌。3. 稱(chēng)取下列試劑，置于1L燒杯中。 Tryptone 20g Yeast Extract 5g NaCl 0.5g 4. 加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻? 量取10mL 250 mM KCl溶液，加入到燒杯中。 6. 滴加5N NaOH溶液（約0.2mL），調(diào)節(jié)pH值至7.0。 7. 加入去離子水將培養(yǎng)基定容至1L。 8. 高溫高壓滅菌后

21、，4保存。 9. 使用前加入5mL滅菌的2M MgCl2溶液。9、SOC培養(yǎng)基 組份濃度 2（W/V） Tryptone 0.5（W/V） Yeast Extract 0.05（W /V） NaCl 2.5mM KCl 10mM MgCl2 20mM 葡萄糖 配制量 100mL 配置方法1. 配制1M葡萄糖溶液。將18g葡萄糖溶于90mL去離子水中，充分溶解后定容至100mL，用0.22m濾膜過(guò)濾除菌。 2. 向100mL SOB培養(yǎng)基中加入除菌的1M葡萄糖溶液2mL，均勻混合。3. 4保存。10、2×YT培養(yǎng)基 組份濃度 1.6（W/V）Tryptone， 1（W/V）Yeast

22、Extract，0.5（W/V）NaCl 配制量 1L 配置方法 1.稱(chēng)取下列試劑，置于1L燒杯中。 Tryptone 16g Yeast Extract 10g NaCl 5g 2. 加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?3. 滴加1N KOH，調(diào)節(jié)pH值至7.0。 4. .加水離子水將培養(yǎng)基定容至1L。 5. 高溫高壓后，4保存。11、b×broth培養(yǎng)基 組份濃度 2（W/V）Tryptone， 0.5（W/V）Yeast Extract，0.5（W/V）MgSO47H2O 配制量 1L 配置方法 1.稱(chēng)取下列試劑，置于1L燒杯中。 Tryptone 20g Yeast

23、Extract 5g MgSO47H2O 5g 2. 加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?3. 滴加1N KOH，調(diào)節(jié)pH值至7.5。 4. .加水離子水將培養(yǎng)基定容至1L。 5. 高溫高壓后，4保存。12、NZCYM培養(yǎng)基 組份濃度 0.5（W/V） Yeast Extract 0.1（W/V） Casamino Acid 1（W /V） NZ胺 0.5（W /V） NaCl 0.2（W /V） MgSO47H2O 配制量 1L 配置方法 1.稱(chēng)取下列試劑，置于1L燒杯中。 Yeast Extract 5g Casamino Acid 1g NZ胺 10g NaCl 5g MgSO4

24、7H2O 2g 2. 加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?3. 滴加5N NaOH溶液（約0.2mL），調(diào)節(jié)pH值至7.0。 4. .加水離子水將培養(yǎng)基定容至1L。 5. 高溫高壓后，4保存。13、NZYM培養(yǎng)基 組份濃度 0.5（W/V） Yeast Extract 1（W /V） NZ胺 0.5（W /V） NaCl 0.2（W /V） MgSO47H2O 配置方法 NZYM培養(yǎng)基除不含Casamino Acid（酪蛋白氨基酸）外，其他成份與NZCYM培養(yǎng)基相同。14、NZM培養(yǎng)基 組份濃度 1（W /V） NZ胺 0.5（W /V） NaCl 0.2（W /V） MgSO47H2

25、O 配置方法 NZM培養(yǎng)基除不含Yeast Extract（酵母提取物）外，其他成份與NZYM培養(yǎng)基相同。15、一般固體培養(yǎng)基的 配置方法 1. 按照液體培養(yǎng)基配方準(zhǔn)備好液體培養(yǎng)基，在高溫高壓滅菌前，加入下列試劑中的一種。 配制 Agar（瓊脂：鋪制平板用） 15g/L Agar（瓊脂：配制頂層瓊脂用） 7g/L Agarose（瓊脂糖：鋪制平板用） 15 g/L Agarose（瓊脂糖：配制頂層瓊脂用） 7g/L 2. 高溫高壓滅菌后，帶上手套取出培養(yǎng)基，搖動(dòng)容器使瓊脂或瓊脂糖充分混勻（此時(shí)培養(yǎng)基溫度很高，小心燙傷）。 3. 待培養(yǎng)基冷卻至5060時(shí)，加入熱不穩(wěn)定物質(zhì)（如抗生素），搖動(dòng)容器充

26、分混勻。 4. .鋪制平板（3035mL培養(yǎng)基/90mm培養(yǎng)皿）。16、LB/Amp/X-Gal/IPTG 組份濃度 1（W /V） Tryptone 平板培養(yǎng)基 0.5（W/V） Yeast Extract 1（W/V） NaCl 0.1mg/mL Ampicillin 0.5（W /V） IPTG 0.04mg/mL X-Gal 1.5（W /V） Agar 配制量 1L 配置方法 1. 稱(chēng)取下列試劑，置于1L燒杯中。 Tryptone 10g Yeast Extract 5g NaCl 10g 2. 加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?3. 滴加5N NaOH溶液（約0.2mL），調(diào)節(jié)pH值至7.0。 4. 加水離子水將培養(yǎng)基定容至1L后，