和絡(luò)舒肝膠囊對(duì)日本血吸蟲(chóng)病肝纖維化的治療作用研究

1、和絡(luò)舒肝膠囊對(duì)日本血吸蟲(chóng)病肝纖維化的治療作用研究 08-06-03 17:11:00 作者：徐標(biāo)編輯：studa20【關(guān)鍵詞】 膠囊 摘要：目的研究和絡(luò)舒肝膠囊對(duì)小鼠日本血吸蟲(chóng)病肝纖維化的治療作用及其機(jī)理, 并與吡喹酮的作用對(duì)比。方法80只小鼠隨機(jī)分為4組。其中3組小鼠感染日本血吸蟲(chóng)8周后，分別以和絡(luò)舒肝膠囊0.1粒/只/d治療8周、吡喹酮500 mg(kgd)-1治療2 d以及不作任何治療(實(shí)驗(yàn)對(duì)照組)，第4組小鼠作為正常對(duì)照組。應(yīng)用免疫組化染色及HE染色法，觀察和分析和絡(luò)舒肝膠囊及吡喹酮治療前后各組小鼠肝組織病理改變及血小板衍生生長(zhǎng)因-BB (platelet-derived growth

2、 factor, PDGF-BB)和，型膠原的表達(dá)變化。結(jié)果和絡(luò)舒肝膠囊治療后肝纖維化組織病理?yè)p傷減輕，PDGF-BB和，型膠原含量均明顯低于實(shí)驗(yàn)對(duì)照組(P0.01)和吡喹酮組(P0.01或P0.05)。結(jié)論和絡(luò)舒肝膠囊對(duì)小鼠日本血吸蟲(chóng)肝纖維化具有較好的治療作用，其遠(yuǎn)期抗肝纖維化效果優(yōu)于吡喹酮。 關(guān)鍵詞：和絡(luò)舒肝膠囊； 日本血吸蟲(chóng)??； 肝纖維化； 血小板衍生生長(zhǎng)因-BB； 膠原 Therapeutical Effects and Mechanisms of Heluoshugan Capsule on Schistosome-infected Mice with Liver Fibrosis

3、Abstract:ObjectiveTo study the therapeutical effects and mechanisms of Heluoshugan capsule on schistosome-infected mice with liver fibrosis. Compare the effects with praziquantel.MethodsEighty mice were divided into four groups: three groups were infected with Schistosoma japonicum. After eight week

4、s, one group was treated with Heluoshugan capsule 0.1capsule per mice every day for 8 weeks, one group was treated with praziquantel 500mg/(kgd) for 2 days and the other was taken as experimental control without any treatment. The fourth group was taken as normal control. Immunohistochemical technol

5、ogy and HE staining were applied to observe the content of hepatic PDGF-BB，type and type collagen in mice infected with S. japonicum before and after treatments.ResultsHeluoshugan capsule treatment significantly relieved pathologic damages in liver tissue with fibrosis, reduced the content of PDGF-B

6、B, type and type collagen compared to the experimental control (P0.01) and the group treated with praziquantel (P0.01or P0.05). ConclusionHeluoshugan capsule has better therapeutical effects on Schistosome-infected mice with liver fibrosis and the effects surpass praziquantel in the long run. Key wo

7、rds:Heluoshugan capsule; Schistosoma japonicum; Liver fibrosis; PDGF-BB; Collagen 日本血吸蟲(chóng)病的肝纖維化是導(dǎo)致門(mén)靜脈高壓、腹水和上消化道出血的主要原因,也是日本血吸蟲(chóng)病患者死亡的主要原因,目前國(guó)內(nèi)外尚無(wú)理想的抗纖維化藥物。文獻(xiàn)報(bào)道, 和絡(luò)舒肝膠囊有保護(hù)肝損傷及抗纖維化作用1，2,但未見(jiàn)其對(duì)血吸蟲(chóng)病肝纖維化作用的研究。本文研究和絡(luò)舒肝膠囊對(duì)血吸蟲(chóng)病肝纖維化小鼠肝組織中血小板衍生生長(zhǎng)因-BB (platelet-derived growth factor, PDGF-BB)和、型膠原含量表達(dá)的影響, 觀察肝組織病理變

8、化，并與傳統(tǒng)殺蟲(chóng)藥吡喹酮的作用對(duì)比，以評(píng)估和探討和絡(luò)舒肝膠囊抗日本血吸蟲(chóng)病肝纖維化的作用及其機(jī)理。 1 材料與方法 1.1 實(shí)驗(yàn)藥物和絡(luò)舒肝膠囊由山東通化東寶藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn),批號(hào)001001。主要成分由香附、鱉甲、虎杖、莪術(shù)等27種中藥材組成。規(guī)格:每粒相當(dāng)于總藥材0.93g。使用前用生理鹽水配制；吡喹酮粉末由同濟(jì)醫(yī)學(xué)院寄生蟲(chóng)教研室提供。 1.2 小鼠血吸蟲(chóng)病肝纖維化模型的建立及動(dòng)物分組雌性昆明小鼠80只,2025 g,46周齡(購(gòu)自同濟(jì)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心)。將小鼠隨機(jī)均分4組,每組20只:實(shí)驗(yàn)對(duì)照組：每只小鼠人工感染日本血吸蟲(chóng)尾蚴(購(gòu)自武漢市血吸蟲(chóng)病防治研究所,下同)25條, 感染后以

9、生理鹽水灌胃8周，1 ml/(只d); 吡喹酮治療組:感染尾蚴8周后用吡喹酮灌胃治療2 d,劑量為500 mg(kgd)-1， 溶于生理鹽水，1 ml/(只d); 和絡(luò)舒肝膠囊組：感染尾蚴8周后用和絡(luò)舒肝膠囊灌胃治療8周,劑量為0.1粒/(只d),溶于生理鹽水，1 ml/(只d)；正常對(duì)照組：未感染血吸蟲(chóng)尾蚴，正常方法飼養(yǎng)16周。第16周末分別取各組小鼠肝組織作病理學(xué)檢測(cè)和免疫組化分析。 1.3 檢測(cè)項(xiàng)目、試劑及方法 1.3.1 肝組織切片HE染色光鏡檢查常規(guī)石蠟切片經(jīng)HE染色后光鏡下觀察肝組織的病理變化。肝纖維化級(jí)別標(biāo)準(zhǔn)依病情輕重分3級(jí),“+”為匯管區(qū)有輕度纖維組織增生,并向外伸展;“ +”

10、為較明顯的纖維組織增生,并包繞肝小葉或與鄰近匯管區(qū)纖維組織相互銜接;“+ ”肝組織纖維化;纖維組織沿門(mén)靜脈分支高度增生,肝組織被擠壓。 1.3.2 PDGF-BB和，型膠原的免疫組化檢測(cè) 1.3.2.1 試劑兔抗小鼠PDGF-BB抗體(美國(guó)SANTACRUZ生產(chǎn))、兔抗小鼠型及型膠原抗體、SABC試劑盒、包括正常山羊血清封閉液、生物素化山羊抗兔IgG、SABC試劑(鏈酶親和素-生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物)、抗原修復(fù)液、復(fù)合消化液、DAB顯色試劑盒等, 均購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司。 1.3.2.2 免疫組化染色方法采用鏈酶親和素-生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物法:3%H2O2室溫10 min滅活內(nèi)源性酶,蒸餾水洗2min3次, 滴加復(fù)合消化液, 室溫消化5 min, 0.01 mol/L PBS洗2 min3次, 滴加正常山羊血清封閉液,室溫孵育10 min, 甩去多余液體,分別滴加兔抗小鼠PDGF-BB兔抗小鼠 型和 型膠原,37孵育30 min,0.01 mol/L PBS洗2 min3次, 滴加生物素化山羊抗兔IgG, 37孵育20 min,0.01 mol/L PBS洗2 min3次, 滴加SABC試劑, 37孵育20 min,0.01 mol/L PBS洗5 min4次, DAB顯色,鏡下控制反應(yīng)時(shí)間,蒸餾水洗