上皮生長(zhǎng)因子受體與非小細(xì)胞肺癌腫瘤免疫及轉(zhuǎn)移的相關(guān)關(guān)系

1、上皮生長(zhǎng)因子受體與非小細(xì)胞肺癌腫瘤免疫及轉(zhuǎn)移的相關(guān)關(guān)系*摘 要 目的與方法： 采用鏈霉菌抗生物素蛋白過(guò)氧化物酶連結(jié)法(LSAB)免疫組化和象定量分析技術(shù)檢測(cè)50例非小細(xì)胞型肺癌 (其中伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者32例， 不伴轉(zhuǎn)移者18例)上皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)的表達(dá)。 結(jié)果：EGFR表達(dá)與腫瘤間質(zhì)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)(TIL)呈負(fù)相關(guān)(P0.01)，EGFR高表達(dá)時(shí)，TIL浸潤(rùn)少，肺癌的轉(zhuǎn)移率高(83%)。EGFR的表達(dá)與肺癌的組織類(lèi)型明顯相關(guān)(P0.05)，但與肺癌的分化程度與轉(zhuǎn)移無(wú)相關(guān)。結(jié)論：腫瘤細(xì)胞內(nèi)EGFR的表達(dá)程度與體內(nèi)腫瘤免疫機(jī)能密切相關(guān)，二者共同影響肺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化和轉(zhuǎn)移。主題詞癌， 非

2、小細(xì)胞肺； 上皮；生長(zhǎng)物質(zhì)；淋巴細(xì)胞，腫瘤浸潤(rùn) Correlations of EGFR to neoplasm immunity and non-small cell lung cancer metastasesZHONG Xue-Yun , XIAO Liu-Zhen, LIAO Jian-HuiDepartment of Pathology, Medical College,Jinan University ,Guangzhou (510632)Abstract AIM and METHODS: The expression of epidermal growth factor rece

3、ptor (EGFR) in 50 cases of non-small cells lung cancer cells (32 had node metastases and others without ) was examined by means of labeled streptoaviodin-brotin complex (LSAB) immunohistochemical technic, image analysis. RESULTS: Correlations were found between EGFR expression and histological types

4、 (P0.05), but the expression of EGFR in lung cancer had no correlation with its differeniation, and had significant negative correlation with tumour infiltrating lymphocytes (TIL) (P0.01), while EGFR expression was high the node metastatic percentage was 83% TIL was much less. CONCLUSION: The expres

5、sion of EGFR was closely correlated with immuno-system in vivo, they both had effects on growth, differentiation , and metastasis of cancer cells.MeSHCarcionma, non-small cell lung; Epithelium; Growth substances; Lymphocytes, tumor-infiltrating上皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor receptor, EGFR)是由原癌基因c-

6、erb B-1編碼的跨膜糖蛋白的受體。EGFR胞內(nèi)片段具有蛋白酪氨酸激酶活性，能使細(xì)胞內(nèi)微環(huán)境發(fā)生變化，導(dǎo)致核內(nèi)原癌基因c-fos、c-myc表達(dá)來(lái)刺激細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖1, 2。腫瘤轉(zhuǎn)移與EGFR表達(dá)相關(guān)35。為了探討EGFR表達(dá)與腫瘤免疫以及腫瘤轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系,用鏈霉菌抗生物素蛋白過(guò)氧化物酶連結(jié)法(labeled streptoaviodin-brotin comlex, LSAB)免疫組化和象定量分析技術(shù)，對(duì)伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和不伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的50例非小細(xì)胞肺癌進(jìn)行EGFR的表達(dá)檢測(cè)，同時(shí)檢測(cè)這些非小細(xì)胞肺癌標(biāo)本的腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞(tumour infiltrating lymphocytes,

7、 TIL)，探討EGFR與人類(lèi)肺癌轉(zhuǎn)移的關(guān)系及其相關(guān)機(jī)制。材料與方法一、 材料：50例手術(shù)切除人肺癌組織標(biāo)本來(lái)自暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院。按照WHO分類(lèi)判斷其組織類(lèi)型，鱗癌22例，腺癌28例。其中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者32例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者18例，伴有轉(zhuǎn)移的病例按TNM分期，輕度(N1)22例，中重度(N2)10例。標(biāo)本用福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋切片。二、主要試劑： 一抗鼠抗人EGFR胞質(zhì)單抗系Sigma公司產(chǎn)品，B細(xì)胞抗體與 T細(xì)胞抗體均是武漢生物制品研究所產(chǎn)品，LSAB試劑盒(K681)為DAKO公司產(chǎn)品。三、免疫組化染色方法及結(jié)果判斷：常規(guī)切片脫蠟水化，按試劑盒說(shuō)明書(shū)采用LSAB方法。

8、DAB染色，蘇木素復(fù)染。用正常血清取代一抗作陰性對(duì)照。選用EGFR表達(dá)強(qiáng)陽(yáng)性標(biāo)本做陽(yáng)性對(duì)照。EGFR陽(yáng)性細(xì)胞的陽(yáng)性顆粒均呈棕黃色顆粒，定位于胞漿(1)。腫瘤間質(zhì)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)的T、 B淋巴細(xì)胞染色陽(yáng)性者呈棕黃色，分布于胞漿和胞膜上(2)。Fig 1Immunoreaction for EGFR in lung cancer1001肺癌EGFR免疫組化染色Fig 2 Immunoreaction for T-cell in lung cancer1002肺癌組織中的T淋巴細(xì)胞免疫染色四、象定量分析：免疫組化定量分析用Tigtr 920G象分析系統(tǒng)(重慶大學(xué)ICT研究所)，在系統(tǒng)光路中使用45049

9、0 nm,帶通光學(xué)濾片，每例標(biāo)本隨機(jī)檢測(cè)5個(gè)高倍視野，細(xì)胞象通過(guò)電視攝像系統(tǒng)掃描，在監(jiān)視器熒屏上測(cè)定細(xì)胞EGFR陽(yáng)性表達(dá)的平均光密度(AOD)和積分光密度(IOD)，用光密度表示EGFR的相對(duì)含量。每例檢測(cè)的各項(xiàng)參數(shù)輸入微機(jī)匯總，統(tǒng)計(jì)各組各項(xiàng)參數(shù)的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差，進(jìn)行t檢驗(yàn)判斷顯著性。結(jié)果一、EGFR表達(dá)與肺癌的分型，轉(zhuǎn)移的關(guān)系：在50例石蠟肺癌標(biāo)本中共有120個(gè)樣本數(shù)，EGFR陽(yáng)性表達(dá)均定位于胞漿，陽(yáng)性細(xì)胞在瘤組織內(nèi)散在分布，正常肺組織未見(jiàn)陽(yáng)性表達(dá)。象定量分析肺鱗癌與肺腺癌EGFR陽(yáng)性表達(dá)的分布面積和相對(duì)含量的變化有顯著差異(表1)，但與肺癌的分化，轉(zhuǎn)移無(wú)明顯相關(guān)(表2，3)。表1 EGFR

10、表達(dá)量與肺癌組織類(lèi)型關(guān)系Tab 1 The relation between histological types and contents of EGFR expression in lung cancer (,n=120)GroupContents of EGFR expressionSquamous cell carcinoma0.27960.1849Adenocarcinoma0.04600.0610*P0.05, vs squamous cell carcinoma表2 EGFR表達(dá)量與肺癌的轉(zhuǎn)移關(guān)系Tab 2The relation between metastases and c

11、ontents of EGFRexpression in lung cancer (,n=120)GroupContents of EGFR expressionSquamous cell carcinomaMetastasis0.22890.1553No metastasis0.31330.1976*AdenocarcinomaMetastasis0.04760.0640No metastasis0.03530.0352*P0.05 , vs metastasis表3 EGFR表達(dá)量與肺癌分化的關(guān)系Tab 3The relation between differentiation and c

12、ontents of EGFRexpression in lung cancer (,n=120) GroupContents of EGFR expressionSquamous cell carcinomaWell differentiation0.34960.1582Mid differentiation0.28190.2063Low differentiation0.20940.1080*AdenocarcinomaWell differentiation0.05200.0706Mid differentiation0.03470.0346Low differentiation0.03

13、040.0203*P0.05, vs well differentiation二、EGFR與腫瘤免疫的關(guān)系：EGFR表達(dá)和TIL浸潤(rùn)呈明顯的負(fù)相關(guān)，EGFR表達(dá)越強(qiáng)，TIL浸潤(rùn)越少，EGFR表達(dá)越弱，TIL中重度浸潤(rùn)越多。EGFR陰性或輕度表達(dá)的標(biāo)本中，TIL中重度浸潤(rùn)的百分率為73%(19/26)，而EGFR中重度表達(dá)的樣本中，TIL中重度浸潤(rùn)的百分率只有25%(6/24)。它們之間的差別具有非常顯著的意義。在浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞中，T淋巴細(xì)胞占80%，B淋巴細(xì)胞占10%。這一結(jié)果提示，EGFR在影響腫瘤細(xì)胞發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中，可能通過(guò)某種程度的免疫抑制作用，促進(jìn)腫瘤的惡性特性。三、EGFR、TIL

14、及肺癌轉(zhuǎn)移的關(guān)系：EGFR、TIL與肺癌轉(zhuǎn)移雖無(wú)單因素的明顯相關(guān)，但是，在EGFR中重度表達(dá)病例中，TIL浸潤(rùn)越少，其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率越高，為83%(15/18)，TIL浸潤(rùn)越多，其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率越低，為33%(2/6)，二者之間的差別顯著, (P0.05)，這一結(jié)果提示，EGFR過(guò)表達(dá)對(duì)TIL有著重要的影響作用，它們協(xié)同起來(lái)共同影響著腫瘤的轉(zhuǎn)移及其生物學(xué)特性。四、肺癌組織類(lèi)型、TIL與轉(zhuǎn)移的關(guān)系：在22例肺鱗癌中有11例伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)移率為50%，28例肺腺癌中21例伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)移率為75%，TIL中重度浸潤(rùn)，鱗癌68%(15/22)，腺癌為35%(10/28)，兩者之間有顯著差異，P0.

15、05。討論生長(zhǎng)因子的信號(hào)傳遞與癌基因作用是目前國(guó)內(nèi)外癌癥分子生物學(xué)研究的活躍領(lǐng)域之一。但是，細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、癌變的調(diào)控是一個(gè)十分復(fù)雜的過(guò)程，尤其是在多細(xì)胞生物中，細(xì)胞失去單細(xì)胞生物那種生長(zhǎng)的獨(dú)立性，置身于組織嚴(yán)密、互相制約的多種細(xì)胞群體的“社會(huì)”中。細(xì)胞生長(zhǎng)分裂受到相鄰組織甚至生物整體的調(diào)控。大量的實(shí)驗(yàn)及臨床資料表明，機(jī)體的免疫系統(tǒng)在控制腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程亦具有重要的作用。TIL被認(rèn)為是代表了機(jī)體對(duì)腫瘤的特異性免疫反應(yīng)。生長(zhǎng)因子受體、TIL是不是在某種程度上具有協(xié)同或拮抗作用，以促進(jìn)或阻止腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移過(guò)程，目前知之甚少。但從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果看來(lái)，TIL浸潤(rùn)程度與腫瘤轉(zhuǎn)移有明顯相關(guān)。近年來(lái)

16、，有關(guān)腫瘤免疫逃避機(jī)制的研究取得了很大的進(jìn)展，如細(xì)胞因子(r-IFN, IL-2等)的產(chǎn)生能力異常，腫瘤誘發(fā)的免疫抑制等6。有研究表明，某些生長(zhǎng)因子的作用有多功能性，如成纖維細(xì)胞對(duì)高濃度纖維母細(xì)胞生長(zhǎng)因子（FGF）呈負(fù)反應(yīng)，對(duì)低濃度FGF呈有絲分裂反應(yīng)；轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-（TGF-）在細(xì)胞增殖分化過(guò)程中也有不同的促進(jìn)或抑制作用7。一方面，許多腫瘤細(xì)胞可通過(guò)某些細(xì)胞因子的異常分泌來(lái)促進(jìn)其增殖，使腫瘤在短時(shí)間內(nèi)得以快速生長(zhǎng)，從而在一定程度上抵消了免疫系統(tǒng)對(duì)腫瘤的排斥作用; 另一方面，異常分泌的細(xì)胞因子又通過(guò)細(xì)胞信號(hào)的作用增加細(xì)胞內(nèi)DNA合成和某些蛋白質(zhì)（對(duì)免疫機(jī)能具有明顯的抑制作用）的分泌，進(jìn)而抑制機(jī)

17、體對(duì)腫瘤的免疫機(jī)能8。EGFR是目前研究最為廣泛的細(xì)胞生長(zhǎng)因子之一，它與腫瘤免疫抑制之間存在一定的相關(guān)性，Dean等9報(bào)道用抗EGFR抗體治療EGFR表達(dá)的腫瘤，發(fā)現(xiàn)腫瘤明顯縮小，機(jī)體免疫機(jī)能活化，并有腫瘤組織局部的浸潤(rùn)白細(xì)胞增多的現(xiàn)象。腫瘤轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤致患者死亡的主要原因。已有不少文獻(xiàn)報(bào)道EGFR表達(dá)與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)。在Scid小鼠皮下植入表達(dá)人EGFR的黑色素瘤，結(jié)果發(fā)現(xiàn)有自發(fā)性遠(yuǎn)隔臟器轉(zhuǎn)移。切除原腫瘤，注射特異性抗EGFR抗體的Fab段，可見(jiàn)轉(zhuǎn)移灶明顯縮小3， 4。還有研究表明，EGFR的表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移潛能密切相關(guān)，Yudon等5則發(fā)現(xiàn)EGFR的表達(dá)在高轉(zhuǎn)移的鼠肉瘤細(xì)胞株中高于低轉(zhuǎn)

18、移細(xì)胞株，將EGFR加入EGFR高表達(dá)的細(xì)胞，這些細(xì)胞穿透matrigel、與細(xì)胞外基質(zhì)成分的粘附、 4型膠原酶的分泌等都增加，當(dāng)加入抗EGFR的單抗，肺轉(zhuǎn)移率明顯降低，可見(jiàn)EGFR有助于腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力的獲得。本實(shí)驗(yàn)中EGFR高表達(dá)、TIL浸潤(rùn)少的樣本，其肺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率達(dá)83%。但目前尚未知EGFR通過(guò)何種因素來(lái)抑制TIL的浸潤(rùn)，如能發(fā)現(xiàn)并加以利用的話(huà)，可能有助于臨床上對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移的預(yù)防和治療。* 國(guó)務(wù)院僑務(wù)辦公室重點(diǎn)科研基金課題作者單位:暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室(廣州510630)參考文獻(xiàn)1樂(lè)志培. 生物信息傳遞與細(xì)胞癌變. 國(guó)外醫(yī)學(xué)腫瘤學(xué)分冊(cè)，1989，3：146.2陸士新.人食道癌的分子基礎(chǔ)研究. 中國(guó)腫瘤，1998，3：9.3Muller BM, Romerdahl CA, Trebt JM, et al. Suppression of spontaneous melanoma metastasis in scid mice with an antibody to the epidermal growth factor receptor . Cancer Res, 1991， 51: 2193.4Khazaie K , Schirrmacher V, Lichtner