裸鼠荷瘤方法及注意事項(共13頁)

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上關(guān)于腫瘤細(xì)胞株的選擇，確實是一個很麻煩的問題，各類文獻(xiàn)中提到過的細(xì)胞株有很多，但是一般而言，我覺得，對于我們做裸鼠腫瘤模型，細(xì)胞株的選擇應(yīng)該考慮一下幾個方面：1. 國際公認(rèn)度，雖然SFDA的指導(dǎo)原則上表示只要是建株細(xì)胞株均可以，但是一般來說，還是應(yīng)該盡量考慮國際上比較公認(rèn)的細(xì)胞株。2. 體內(nèi)生長情況，很多細(xì)胞株，在文獻(xiàn)中有很高的出鏡率，但是實際上，基本都是從體外開始有名，所以很多人就硬生生的往體內(nèi)套，結(jié)果就是吃力不討好，比如樓主提到的A549，還有MCF-7，都是很有名氣的細(xì)胞株，但是在體內(nèi)卻不是一個好的試驗對象，成瘤率低，生長慢，均一度差。現(xiàn)在國內(nèi)的很多研發(fā)單位，特

2、別是一些公司的領(lǐng)導(dǎo)們，缺乏這方面的認(rèn)識，動不動就把這些著名的細(xì)胞株掛在嘴邊，硬壓著一線的研究人員去花功夫做這些細(xì)胞株，作的不好，就懷疑大家的水平如何如何的，奶奶的，對此非常生氣！3. 藥物的敏感性，這一點常常被大家忽視，大部分的裸鼠腫瘤模型都是為抗腫瘤藥物的篩選以及研究服務(wù)的，但是常常大家只考慮了這個細(xì)胞株是不是好做，但是沒有考慮到細(xì)胞株本身對于藥物的敏感性，比如Lovo細(xì)胞，國際公認(rèn)度也還可以，體內(nèi)生長情況也很棒，但是對于藥物的敏感性不佳，大部分的常規(guī)化療藥物到了它這里，抑瘤率都會下降，顯而易見，對于抗腫瘤藥物的篩選來說，它不是一個好的選擇。另外說一點，體內(nèi)與體外的關(guān)系，現(xiàn)在做體內(nèi)的人，常常

3、被體外的人牽著鼻子走，體外做出來什么什么細(xì)胞株敏感，體內(nèi)的人就得吭哧吭哧的去做這個，但是卻死活做不好，其實，現(xiàn)在我和一些老前輩們的觀點是，體內(nèi)和體外應(yīng)該協(xié)調(diào)好細(xì)胞株的選擇問題，體外的人手上有大把的細(xì)胞株可以選擇，如果，體內(nèi)的人不去和他們協(xié)調(diào)，那么將永遠(yuǎn)被牽著鼻子走，受累還不討好，應(yīng)該大家坐下來，一起選擇2030種細(xì)胞株作為常規(guī)的篩選細(xì)胞株，這就足夠了，細(xì)胞株選擇的時候考慮好方向（胃癌、肝癌、肺癌什么的）、靶點（EGF、vEGF等等），不能漫無邊際的抓著哪個體內(nèi)就的做哪個，誰也沒有這個本事啊。以下給出一些細(xì)胞株供大家參考：頭頸部腫瘤沒有特別好的細(xì)胞株，Hep2（喉癌）、CNE（鼻咽癌）湊活，比較

4、慢，但是可以接受。肺癌不要和我提什么A549，不好伺候，NCI-H460（大細(xì)胞肺癌）還不錯，生長速度快，成瘤率好，但是技術(shù)不好的話，均一度會差一些，水平過關(guān)的話，開始試驗的時候SD應(yīng)該為平均值的1/3，對藥物很敏感，特別是紫杉醇，非常敏感。SPC-A-1（肺腺癌），馬馬虎虎過得去，速度不是很快，但是也還能接受。胃癌MNK-45，日本細(xì)胞株，公認(rèn)度也可以，比較好。BGC-823，很好的公認(rèn)度，生長有些慢。食道癌Eca-109，我們找不到其他的東西，只能用它，一般般，有點不好伺候。前列腺癌PC-3、DU-145，都是不錯的細(xì)胞株，用它們沒錯的。結(jié)腸癌HT-29吧，生長還可以，Lovo對藥物的敏感

5、性差了點。肝癌這個是比較頭痛的一個領(lǐng)域，Bel-7402，SMMC7721只能說湊活，還有國內(nèi)自己建株的QGY生長特性不錯，但是公認(rèn)度差了點。白血病我自己都沒有做出來過，嘿嘿，K562和HL60都不好整。表皮癌A431，這家伙，棒極了，在我手上，每次試驗只需要淘汰一兩只，剩下的SD小于平均值的1/4，我很喜歡它，主要是EGFR高表達(dá)，做這方面的藥物，少不了它！乳腺癌不要用MCF-7,MDA-MB-435、MDA-MB-468、Bcap-37都不錯，其中Bcap-37也是EGFR高表達(dá)。卵巢癌SK-ov-3不錯的。宮頸癌比較麻煩，Hela細(xì)胞株自身的生長特性就不佳，另外安全性方面也很不好，女生勿

6、近，我們以前做過一個C33A，還可以，對藥物很敏感，生長比較慢，成瘤率也偏差，用的人也不多，但是沒有辦法阿。想起來的就這些，剩下的大家補充吧。二、1.裸鼠的狀態(tài)裸鼠的年齡，比如5-7比9容易成瘤，因為這時免疫系統(tǒng)不夠強；或者如果裸鼠由于試驗系統(tǒng)染菌而長毛或感染，則成瘤率可能會受影響2.細(xì)胞接種量動物腫瘤一般接種2600萬/只就100%成瘤，而人癌則需要1000萬以上才能較高的成瘤3.細(xì)胞狀態(tài)腫瘤細(xì)胞的活力，生長狀態(tài)，是否對數(shù)生長期，有無污染也對成瘤影響很大三、接種量 要查文獻(xiàn)來確定接種量，在找不到任何相關(guān)資料的情況下，最高就用到1*107/0.2ml/site,再高也沒有意義了。如果

7、你的細(xì)胞很小，1*107/0.1ml也可以操作，不至于很粘稠，那么最好是1*107/0.1ml/site。查文獻(xiàn)看他們的構(gòu)建條件是什么樣的，比如培養(yǎng)條件，接種量，接種位置什么的，是不是一定要用雌性鼠等等。      有的瘤株也有可能很容易成瘤，而且生長速度很快。建議用幾只動物試試不同的接種濃度，萬一能夠長出來，而且還長得很快，那你就要根據(jù)情況選擇一個合適的濃度了。基本上一般認(rèn)為比較合適的接種濃度有這么幾個特征：1. 接種后10到15天左右可以開始試驗。2. 開始試驗時可以用于試驗的動物數(shù)不少于6070%，而且SD不

8、大于平均值的1/3左右。3. 開始試驗三、四周后腫瘤重量大于1g，并且沒有潰爛。當(dāng)然，這些條件都是錦上添花的東西，如果以1*107/site都勉勉強強長出腫瘤，那么就不必過多的去考慮它了。 接種部位 接種部位:腋窩中部外側(cè)皮下為好。皮下腫瘤模型中，想要成瘤率高就接種在腋下。接種時由裸鼠體側(cè)腰部稍靠上的部位進(jìn)針，要保證與接種點的距離小于針頭的長度，向頭部方穿行，絕對不能刺破皮膚或者刺破肌肉層，當(dāng)針頭到達(dá)接種位點時注射，退出針頭，這樣操作的目的并不完全是避免漏液，其實熟練后，不需要皮下穿行也不會漏液，主要是避免污染，進(jìn)針點還有少量污染的可能性的，針頭在皮下穿行一段后，

9、接種點離進(jìn)針點較遠(yuǎn)，最大限度減少污染的可能。如果是用于正式實驗，那么一只老鼠就只能接種一個位點，不可以接種多個位點用于保證可用的模型數(shù)。因為在有些情況下，一個老鼠身上有多于一個腫瘤的情況下，會有相互影響的可能，無論這幾個腫瘤相距有多遠(yuǎn)。要是想多打幾個部位做做預(yù)試驗，倒也不是不可以，但是我覺得，基本上沒有什么必要。  皮膚不用繃得太緊，平展就可以了，另外接種的時候進(jìn)針點很靠下，針頭在皮下走一段再注射，速度不要太快。注射前針頭稍微動一動，能動就說明在皮下，否則可能在皮內(nèi)或者肌肉內(nèi)。一般來說都是有鼓包的但是要是你接種位置太深入腋窩，你是看不到鼓包的。主要靠針頭稍微動一動來判斷。&

10、#160;是否應(yīng)用免疫抑制劑 裸鼠皮下種瘤后，可以通過應(yīng)用免疫抑制劑，比如環(huán)磷酰胺（2mg每只，打兩天）來加速瘤體的生長，當(dāng)然我知道裸鼠是T免疫缺陷動物，但是人家說的CTX可以進(jìn)一步抑制裸鼠的體液免疫和NK細(xì)胞殺傷的保護作用，可以加快瘤子的生長，這樣造模的周期很短，也可以進(jìn)行人為的控制，不知道這個觀點是不是有道理，實踐中是不是真有人這么做呢？ 樓上說的文獻(xiàn)中也有報道，而且還有預(yù)先用放射照射抑制動物免疫功能再接種的方法，但是一般常規(guī)應(yīng)用中大多數(shù)時候不推薦這么做。另外還有一個問題應(yīng)該被考慮到，大家現(xiàn)在都在琢磨著怎么讓腫瘤出瘤的更快，造模周期更短，但是如果人為的把腫瘤生長加速，其

11、實對實驗并不好。因為造模周期短，很可能生長速度也會被加快，腫瘤可能很快就潰爛了，這樣就不得不被迫中止實驗，而用藥卻沒有用到足夠的時間，藥效還沒有發(fā)揮出來就結(jié)束了，這樣是很不利的。所以一般情況下，應(yīng)該盡量的復(fù)合這個瘤株本身的生長特性，不應(yīng)該過多地去加以人為的干擾。  是否用手術(shù)標(biāo)本荷瘤 如果是藥效試驗，不建議用手術(shù)標(biāo)本，因為SFDA的臨床前研究指導(dǎo)原則上明確指出要用建株的腫瘤株進(jìn)行試驗，因為用手術(shù)標(biāo)本的試驗可重復(fù)性太差，你這個標(biāo)本萬一沒有保存好，斷掉了，你自己都很難重復(fù)出上次的試驗結(jié)果。國外的文獻(xiàn)上看到的卻很少有人用手術(shù)標(biāo)本構(gòu)建模型進(jìn)行試驗。取材的部位：腫瘤生長活躍

12、，狀態(tài)良好，結(jié)締組織比較少的地方。運送途徑：無菌、冰浴保溫，無菌培養(yǎng)液浸泡，時間不能超過1個小時。最好一個小時內(nèi)就能夠接種到動物體內(nèi)。接種部位：腋下。另外，手術(shù)標(biāo)本還有一個風(fēng)險：你不能保證取得的標(biāo)本一定能夠順利地成瘤并且用于試驗。 注意事項 A裸鼠的周齡,B腫瘤細(xì)胞:何種腫瘤,接種細(xì)胞的數(shù)量(用對數(shù)生長期的,活力高的)記數(shù)要準(zhǔn)確,C接種方式:注意不要漏液,否則會損失細(xì)胞數(shù)量D飼養(yǎng)環(huán)境:要求是SPF條件  具體操作 1.能不能成瘤，首先要考慮你的腫瘤細(xì)胞系能否成瘤，其次關(guān)鍵是你的腫瘤細(xì)胞數(shù)，一般腫瘤細(xì)胞存活力還是蠻高的，所以你重點要考慮細(xì)胞數(shù)的問

13、題，但最高不要超過1*107。 2.接種時間，最好在1小時之內(nèi)完成。但在我實際操作過程中，裸鼠的數(shù)量又多，1小時之內(nèi)根本做不完的，所以你可以預(yù)先將細(xì)胞放在冰盒里暫為保存。效果還是不錯的。 3.成瘤時間，每個腫瘤細(xì)胞不太一樣，細(xì)胞數(shù)合適，一般一周左右應(yīng)該能出來了；另外，如果你是打皮下，你要考慮是否有打到深層組織，比如肌肉，那即使成瘤了，也不大好摸出來。  腹腔注射 1、腹腔注射進(jìn)針的位置在腹中線與小鼠兩后肢上沿連交叉以下的位置。 2、腹腔注射很少會打到腸管，因為腸子在碰到硬物時會縮起來，當(dāng)然前提是你的進(jìn)針不是特別深，如果你的整個針頭都扎

14、入了腹腔，那么腸子是無處可躲了。 3、腹腔注射進(jìn)針后，你可以將針頭左右擺動一下，如果是正確的，這時會有一種很自由無障礙的感覺，進(jìn)針角度撐握在小于45度，針頭進(jìn)入長度不超過3厘米左右。 用大、小白鼠做實驗時，以左手抓住動物，使腹部向上，右手將注射針頭于左（或右）下腹部刺入皮下，使針頭向前推 0.51.0cm，再以45度角穿過腹肌，固定針頭，緩緩注入藥液（圖2-5），為避免傷及內(nèi)臟，可使動物處于頭低位，使內(nèi)臟移向上腹。若實驗動物為家兔，進(jìn)針部位為下腹部的腹白線離開1cm處腫瘤倍增時間 腫瘤動物實驗?zāi)Ｐ湍[瘤的倍增時間（doubling time），應(yīng)

15、該是在瘤體積100800之間計算，但是一組動物有10只，每周測量2次瘤體積，如果我想計算從200倍增到400的時間的話，10只動物不會在我測量體積的時候正好到200或400，那么，在計算的時候，具體應(yīng)該怎么做？ Geddes 等29將結(jié)節(jié)倍增時間的計算公式表示為：DT =（ln 2 t）/ln（V2/V1），V1、V2分別是前后兩次測量的體積， t是兩次測量的時間間隔 你的問題有歧義，我覺得可以有幾下幾種理解： 1.測量的時候，對于某個老鼠來說，第一次可能測出來的體積是189.26（不是正好200），第二次是415

16、.31（不是正好400），對于其他的動物都有這樣的問題，  2.對于十只老鼠來說，測量的時候，可能1號老鼠是189.26，2號是312.57，3號是110.89.，這也是一種理解，我的意見是：測量一段比較長的時間，每只老鼠可以獨立計算倍增時間，然后計算平均值，SD等，用統(tǒng)計學(xué)處理的手段。 個體差異      同一批種幾十只老鼠，有的就長不出來，有的長得很大，使評價藥效很困難。排除接種懸液未搖勻的可能后，還有什么原因可能造成這一點？可能是是個體差異了。其中，老鼠年齡是一個很大的因素。本人就遇到過2個月的老鼠

17、接種腫瘤以后，有的長有的不長的情況。如果控制好試驗條件，動物也比較均一的話，一般腫瘤生長都會很好的控制在一定范圍的 腫瘤模型新藥申報 zym做的腫瘤模型實驗是用于新藥申報用,現(xiàn)在有一些問題還不能校準(zhǔn),我做的是人癌模型,實驗動物為裸鼠. 1. 新藥報批中,有明確的要求說腫瘤來源必須是體內(nèi)傳代3次以上嗎? 2. 實驗結(jié)束后,對于取出腫瘤塊的質(zhì)量有沒有明確的規(guī)定呢?還是跟其他種鼠一樣,要求平均瘤重不小于1g或者不大于20%的瘤快質(zhì)量不小于400mg, 3. 實驗評價指標(biāo)相對腫瘤增殖率T/C(%),指的是瘤體積比還是瘤質(zhì)量

18、比? 4. 實驗申報材料是否需要附屬實驗動物裸鼠的照片?若需要附屬的話,照片沒有沒有什么要求怎么照的，是鼠活的時候的照片還是實驗結(jié)束后處死鼠后在擺好位置照? 5. 申報材料中附圖要求是腫瘤的生長曲線還是不同時間測量的T/C值對時間所做的曲線?還是兩個都要有呢? 6. 實驗分組分5組,空白溶劑對照組,藥物高中低三個劑量組,陽性藥物有效濃度對照組. 這樣可以嗎?要是不可以,還需要怎么分呢? 7. 實驗材料中是否需要包含該實驗動物血液相關(guān)指標(biāo)的數(shù)值呢?比如:白細(xì)胞數(shù)量,骨髓的影響等等 8. 

19、一次實驗有效后,是不是也需要重復(fù)實驗三次?那三次的數(shù)據(jù)都需要包含在數(shù)據(jù)中嗎? swordzjsh具體問題回答如下： 1.沒有問題，新老原則均明確要求體內(nèi)三代以上，并且不能超過1520代（人腫瘤）。 2. 新原則已經(jīng)沒有瘤重的指標(biāo)，只考察瘤體積，也沒有對試驗結(jié)束后的腫瘤大小有明確要求，但是老的指導(dǎo)原則有這方面的要求。 3. 新的原則是指瘤體積，老的指瘤重，實際上在數(shù)據(jù)處理的時候一般瘤體積和瘤重的數(shù)據(jù)都會加入，分別計算相應(yīng)的T/C。 4. 需要，常見的有兩種：一種是處死后擺放并拍攝整鼠照片，還有一種是剝?nèi)∧[瘤后拍攝腫瘤

20、的照片，還是那句話，最好都有，至少資料中放一個，另外一份備好，答辯的時候可以隨時展示。另外，以前不允許數(shù)碼拍攝，要求光學(xué)照相機，以防電腦編輯，不知道現(xiàn)在還有沒有類似的要求。 5.有的人要看腫瘤生長曲線，有的人要看T/C的曲線，不過一般放生長曲線的多一些，記住，生長曲線現(xiàn)在要求RTV，相對腫瘤體積。以前報批的時候就可以放RTV曲線了，現(xiàn)在更是RTV的天下。 6.一般來說，正式試驗基本上就是這么設(shè)計了，但是你最好有這些劑量、療程、給藥途徑等的設(shè)計依據(jù)，比如權(quán)威文獻(xiàn)、你們的預(yù)試驗等材料備問。當(dāng)然，如果你的藥物有些特別的地方，那么要根據(jù)他的具體特點設(shè)計試驗。 7.

21、0;這個是錦上添花的指標(biāo)，對于藥效試驗來說，沒有明確要求，但是一定要有體重和死亡的數(shù)據(jù)。 8. 老原則要求重復(fù)兩次，一共三次試驗，新原則前幾稿要求重復(fù)一次，一共三次試驗，但是最新一稿我沒有看到對于重復(fù)試驗的要求，但是作為藥理研究的基本常識，重復(fù)試驗是一定需要的，作為正式試驗的重復(fù)試驗應(yīng)該把數(shù)據(jù)和結(jié)果分析都列入報告中，重復(fù)試驗之間是同等重要的。 zym: 針對您的回答,我仍有幾點不解 1.實驗結(jié)束后瘤的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)問題,您說新原則沒有指標(biāo),那么老原則(就是現(xiàn)在還遵循的原則)具體是多少呢,能不能說明一下啊? 2. T/C標(biāo)準(zhǔn)按照體積

22、計算的時候,按照的是哪個時間點的體積呢,還是說整個測量過程的體積都要算? 3.還有一個比較基本的問題,不要笑話我了，呵呵,那個RTV是怎樣算出來的?是用藥組數(shù)據(jù)減去空白組數(shù)據(jù)嗎?還是其他算法? 4.正式實驗中,每組的動物數(shù)量是多少?6只,還是10-12只? 5.對給藥時間有沒有什么具體要求呢,就是說有沒有上限,比如不可以超過一個月啊什么的? swordzjsh 1. 老原則的標(biāo)準(zhǔn)就是你寫出來的那個。 2. 整個測量過程的體積都要算，可以用T/C對時間點作圖的那種。實際上，不知道你有沒有老的指導(dǎo)原則，上面有一個表，那

23、個表里面匯總了一些試驗的基本信息，那個表里面要填增殖率，一般是選效果最好的那一天的數(shù)據(jù)填上去。 3. RTV = Vt / V0。其中V0為分籠給藥時(即d0)測量所得腫瘤體積，Vt為每一次測量時的腫瘤體積。RTV是針對每一只小鼠計算的。 4. 對于裸鼠來說，5到10 只，要根據(jù)你的藥物的性質(zhì)來定，如果SD較大，建議多設(shè)幾只，容易做出統(tǒng)計差異。如果SD較小，不少于6只，因為要求試驗過程中動物死亡率不超過20%，6只動物死了一只還可以接受，要是5只動物死了一只就是20%了。 5. 沒有具

24、體的要求，一般在3到5周，常見為三周，并且保證腫瘤長到足夠的大小。如果有特別的原因可以變化試驗周期，但是一般都是加長而不會縮短。 實驗分組與標(biāo)記 baobaogao: 我的實驗是觀察藥物對lewis肺癌的生長的影響。 1、實驗分為五組（模型組、陽性對照組（CTX）藥物大、中、小劑量組）。我不清楚需不需要設(shè)置陰性對照組（就是不造模組，）2、C57小鼠怎樣標(biāo)記，有剪趾、穿耳孔的方法。但是具體的操作沒有說明，能否介紹一下。 swordzjsh 1.不需要設(shè)normal組，因為腫瘤的生長和評價非常明顯，不會有干擾的可能。 2.

25、60;我一般是剪耳號，一只小鼠兩只耳朵，每只耳朵可以剪上側(cè)和下側(cè)兩個位點，你可以自己指定組合，比如我們是這樣的：左上為一號，左下為二號，右上為三號，右下為四號，左側(cè)上下為五號，右側(cè)上下為六號，左上右上為七號，左下右下為八號. 細(xì)胞懸浮液體 roger150 ,在做腫瘤模型用細(xì)胞接種時,細(xì)胞懸浮在什么液體里面.有沒用matrigel同細(xì)胞混勻后再接種的? Swordzjsh:一般來說，可以懸浮在相應(yīng)的無血清培養(yǎng)基、PBS、saline中，接種效果以上三種次第降低。用matrigel是一種促進(jìn)腫瘤形成生長的手段，如果本身腫瘤生長不是特別困難不建議用它，但是一

26、些比如A549之類的細(xì)胞株，接種后五六十天還只有600700mm3的腫瘤，就可以考慮使用matrigel。使用matrigel的時候要注意低溫操作，因為室溫下mareigel就有可能固化。一般是在冰浴中操作。 白血病腫瘤,皮下注射or靜脈注射？ abaiabai 我的理解是，靜脈注射反應(yīng)的是疾病全身播散的作用，皮下注射便于觀察瘤塊大小，衡量用藥效果，應(yīng)該結(jié)合自己試驗的目的選擇注射方法 我最近剛剛實驗比較了一下靜脈注射和皮下接種白血病細(xì)胞株，從理論上說靜脈接種似乎皮下接種更接近白血病的生物行為特點，但是根據(jù)我的實驗和以前的文獻(xiàn)，靜脈接種小鼠的平均生存期很短

27、，我的不超過10天，我還試驗性的進(jìn)行了化療，結(jié)果幾乎全死了，而皮下接種者結(jié)果穩(wěn)定。所以選皮下還是靜脈，應(yīng)該根據(jù)自己的試驗?zāi)康膩矶?，長期的實驗好像不太適合用靜脈注射的方法。 swordzjsh 皮下或者靜脈注射都可以，看你的細(xì)胞株了，也有用腹腔注射的。  小鼠的捉拿 從籠盒內(nèi)將小鼠尾部捉住并提起，放在籠蓋（或表面粗糙的物體）上，輕輕向后拉鼠尾，在小鼠向前掙脫時，用左手拇指和食指抓住兩耳和頸部皮膚，無名指、小指和手掌心夾住背部皮膚和尾部，并調(diào)整好動物在手中的姿勢。這類捉拿方法多用于灌胃以及肌肉、腹腔和皮下注射等。如若進(jìn)行心臟采血、解剖、外科手術(shù)等實

28、驗時，就必須要固定小鼠。使小鼠呈仰臥位（必要時先進(jìn)行麻醉），用橡皮筋將小鼠固定在小鼠實驗板上。如若不麻醉，則將小鼠放人保定架里，固定好保定架的封口。 小鼠性情較溫順，一般不會咬人，比較容易抓取固定。通常用右手提起小鼠尾巴將其放在鼠籠蓋或其它粗糙表面上，在小鼠向前掙扎爬行時，用左手拇指和食指捏住其雙耳及頸部皮膚，將小鼠置于左手掌心、無名指和小指夾其背部皮膚和尾部，即可將小鼠完全固定。在一些特殊的實驗中，如進(jìn)行尾靜脈注射時，可使用特殊的固定裝置進(jìn)行固定,如尾靜脈注射架或粗的玻璃試管。如要進(jìn)行手術(shù)或心臟采血應(yīng)先行麻醉再操作,如進(jìn)行解剖實驗則必須先行無痛處死后再進(jìn)行。 實驗動物的編

29、號 編號的方法很多，根據(jù)動物的種類數(shù)量和觀察時間長短等因素來選擇合適的標(biāo)記方法。 (一) 掛牌法：將號碼烙壓在圓形或方形金屬牌上(最好用鋁或不銹鋼的,它可長期使用不生銹),或?qū)⑻柎a按實驗分組編號烙在栓動物頸部的皮帶上，將此頸圈固定在動物頸部。該法適用于狗等大型動物。(二)  (二)打號法：用刺數(shù)鉗(又稱耳號鉗)將號碼打在動物耳朵上。打號前用蘸有酒精的棉球擦凈耳朵，用耳號鉗刺上號碼，然后在烙印部位用棉球蘸上溶在食醋里的黑墨水擦抹。該法適用于耳朵比較大的兔、狗等動物。 (三)針刺法：用七號或八號針頭蘸取少量碳素墨水，在耳部、前后肢以及尾部等處刺入皮下，在受刺

30、部位留有一黑色標(biāo)記。該法適用于大小鼠、豚鼠等。在實驗動物數(shù)量少的情況下，也可用于兔、狗等動物。 (四)化學(xué)藥品涂染動物被毛法：經(jīng)常應(yīng)用的涂染化學(xué)藥品有 涂染紅色：0.5中性紅或品紅溶液。涂染黃色：3-5苦味酸溶液。 涂染黑色：煤焦油的酒精溶液。 根據(jù)實驗分組編號的需要，可用一種化學(xué)藥品涂染實驗動物動物背部被毛就可以。如果實驗動物數(shù)量較多，則可以選擇兩種染料。該方法對于實驗周期短的實驗動物較合適，時間長了染料易退掉；對于哺乳期的子畜也不適合，因母畜容易咬死子畜或把染料舔掉。 (五)剪毛法：該法適用于大、中型動物，如狗、兔等。方法是用剪毛刀在動物一

31、側(cè)或背部剪出號碼，此法編號清楚可靠，但只適于短期觀察。 (六)打孔或剪缺口法：可用打孔機在兔耳一定位置打一小孔來表示一定的號碼。如用剪子剪缺口,應(yīng)在剪后用滑石粉捻一下,以免愈合后看不出來。該法可以編至1 9999號，此種方法常在飼養(yǎng)大量動物時作為終身號采用。 實驗動物的分組  (一)分組的原則：進(jìn)行動物實驗時，經(jīng)常需要將選擇好的實驗動物按研究的需要分成若干組。動物分組應(yīng)按隨機分配的原則，使每只動物都有同等機會被分配到各個實驗組與對照組中去，以避免各組之間的差別,影響實驗結(jié)果，特別是進(jìn)行準(zhǔn)確的統(tǒng)計檢驗,必須在隨機分組的基礎(chǔ)上進(jìn)行。 每組

32、動物數(shù)量應(yīng)按實驗周期長短、實驗類型及統(tǒng)計學(xué)要求而定。如果是慢性實驗或需要定期處死動物進(jìn)行檢驗的實驗，就要求選較多的動物，以補足動物自然死亡和認(rèn)為處死所喪失的數(shù)量，確保實驗結(jié)束時有合乎統(tǒng)計學(xué)要求的動物數(shù)量存在。 (二)建立對照組：分組時應(yīng)建立對照組。1.自身對照組：是指實驗數(shù)據(jù)而言。實驗動物本身在實驗處理前、后兩個階段的各項相關(guān)數(shù)據(jù)就分別是對照組和實驗組的實驗結(jié)果，此法可排除生物間的個體差異。2.平行對照組：有正對照組和負(fù)對照組兩種。給實驗組動物某種處理，小鼠采血方法 1.割(剪)尾采血 當(dāng)所需血量很少時采用本法。固定動物并露出鼠尾。將尾部毛剪去后消毒，然后浸在45

33、左右的溫水中數(shù)分鐘，使尾部血管充盈。再將尾擦干，用銳器(刀或剪刀)割去尾尖0.3-0.5cm，讓血液自由滴入盛器或用血紅蛋白吸管吸取，采血結(jié)束，傷口消毒并壓迫止血。也可在尾部作一橫切口，割破尾動脈或靜脈，收集血液的方法同上。每鼠一般可采血10余次以上。小鼠每次可取血0.1ml，大鼠0.30.5ml。  2.鼠尾刺血法 大鼠用血量不多時(僅做白細(xì)胞計數(shù)或血紅蛋白檢查)，可采用本法。先將鼠尾用溫水擦拭，再用酒精消毒和擦拭，使鼠尾充血。用7號或8號注射針頭，刺入鼠尾靜脈，拔出針頭時即有血滴出，一次可采集1050mm3。如果長期反復(fù)取血，應(yīng)先靠近鼠尾末端穿刺，以后再逐漸向

34、近心端穿刺。  3.眼眶靜脈叢采血 采血者的左手拇食兩指從背部較緊地握住小鼠或大鼠的頸部(大鼠采血需帶上紗手套)，應(yīng)防止動物窒息。當(dāng)取血時左手拇指及食指輕輕壓迫動物的頸部兩側(cè)，使眶后靜脈叢充血。右手持續(xù)接7號針頭的1ml注射器或長頸(34cm)硬質(zhì)玻璃滴管(毛細(xì)管內(nèi)徑0.5-1.0mm)，使采血器與鼠面成45的夾角，由眼內(nèi)角刺入，針頭斜面先向眼球，刺入后再轉(zhuǎn)180度使斜面對著眼眶后界。刺入濃度，小鼠約23mm，大鼠約45mm。當(dāng)感到有阻力時即停止推進(jìn)，同時，將針退出約0.1-0.5mm，邊退邊抽。若穿刺適當(dāng)血液能自然流入毛細(xì)管中，當(dāng)?shù)玫剿璧难亢螅闯ゼ佑陬i部

35、的壓力，同時，將采血器拔出，以防止術(shù)后穿刺孔出血。 若技術(shù)熟練，用本法短期內(nèi)可重復(fù)采血均無多大困難。左右兩眼輪換更好。體重20-25g的小鼠每次可采血 0.2-0.3ml；體重200-300g大鼠每次可采血0.5-1.0ml，可適用于某些生物化學(xué)項目的檢驗。4.斷頭取血 采血者的左手拇指和食指以背部較緊地握住大(小)鼠的頸部皮膚，并作動物頭朝下傾的姿勢。右手用剪刀猛剪鼠頸，約1/2-4/5的頸部前剪斷，讓血自由滴入盛器。小鼠可采用約0.81.2ml;大鼠約5-10ml。  5.心臟采血 鼠類的心臟較小，且心率較快，心臟采血比較困難，故

36、少用。活體采血方法與豚鼠相同。若做開胸一次死亡采血，先將動物作深麻醉，打開胸腔，暴露心臟，用針頭刺入右心室，吸取血液。小鼠約0.5-0.6ml；大鼠約0.8-1.2ml。  6.頸動靜脈采血 先將動物仰位固定，切開頸部皮膚，分離皮下結(jié)締組織，使頸靜脈充分暴露，可用注射器吸出血液。在氣管兩側(cè)分離出頸動脈，離心端結(jié)扎，向心端剪口將血滴入試管內(nèi)。  7.腹主動脈采血 最好先將動物麻醉，仰臥固定在手術(shù)架上，從腹正中線皮膚切開腹腔，使腹主動脈清楚暴露。用注射器吸出血液，防止溶血?；蛴脽o齒鑷子剝離結(jié)締組織，夾住動脈近心端，用尖頭手術(shù)剪刀，剪斷動脈

37、，使血液噴入盛器。  8.股動(靜)脈采血 先由助手握住動物，采血者左手拉直動物下肢，使靜脈充盈。或者以搏動為指標(biāo)，右手用注射器刺入血管。體重15-20g 小鼠采血約0.2-0.8ml，大鼠約0.4-0.6ml。 實驗動物用藥量的確定及計算方法 (一)動物給藥量的確定 1. 先用少量小鼠粗略地探索中毒劑量或致死劑量,然后用小于中毒量的劑量，或取致死量的若干分之一作為應(yīng)用劑量，一般可取1/101/5。 2. 植物藥粗制劑的劑量多按生藥折算。 3. 化學(xué)藥品可參考化學(xué)結(jié)構(gòu)相似的已

38、知藥物， 特別是化學(xué)結(jié)構(gòu)和作用都相似的劑量。 4. 確定劑量后，如第一次用藥的作用不明顯，動物也沒有中毒的表現(xiàn),可以加大劑量再次實驗。如出現(xiàn)中毒現(xiàn)象，作用也明顯，則應(yīng)降低劑量再次實驗。在一般情況下，在適宜的劑量范圍內(nèi)，藥物的作用常隨劑量的加大而增強。所以有條件時，最好同時用幾個劑量作實驗，以便迅速獲得關(guān)于藥物作用的較完整的資料。如實驗結(jié)果出現(xiàn)劑量與作用強度之間毫無規(guī)律時，則更應(yīng)慎重分析。 5. 用大動物進(jìn)行實驗時，防止動物中毒死亡,開始的劑量可采用鼠類的1/151/2,以后可根據(jù)動物的反應(yīng)調(diào)整劑量。 6. 確定動物給藥劑量時

39、，要考慮給藥動物的年齡大小和體質(zhì)強弱。 一般說確定的給藥劑量是指成年動物的，如是幼齡動物，劑量應(yīng)減小。如以狗為例：6 個月以上的狗給藥劑量為1份時，36個月的給1/2份， 4589日的給1/4份，2044日的給1/8 份，1019日的給1/16份。 7. 確定動物給藥劑量時，要考慮因給藥途徑不同，所用劑量也不同。 以口服量為100時，皮下注射量為3050，肌肉注射量為2030，靜脈注射量為25。 (二)人與動物的用藥量換算方法 人與動物對同一藥物耐受性不同，一般動物的耐受性要比人大，單位體重的用藥量動物比

40、人要高。必須將人的用藥量換算成動物的用藥量。一般可按下列比例換算： 人用藥量： 1 小鼠、大鼠： 50100兔、豚鼠： 1520 狗、貓： 510 以上系按單位體重口服用藥量換算。如給藥途徑為靜脈、皮下、腹腔注射，換算比例應(yīng)適當(dāng)減小些。 實驗動物給藥途徑和方法 （一）皮下注射 注射時以左手拇指和食指提起皮膚，將連有5（1/2）號針頭的注射器刺入皮下。皮下注射部位一般狗、貓多在大腿外側(cè)，豚鼠在后大腿的內(nèi)側(cè)或小腹部；大白鼠可在側(cè)下腹部。兔在背部或耳根部注射。蛙可在脊背部淋巴腔注射。

41、0;（二）皮內(nèi)注射 皮內(nèi)注射時需將注射的局部脫去被毛，消毒后，用左手拇指和食指按住皮膚并使之繃緊，在兩指之間，用結(jié)核菌素注射器連4(1/2)細(xì)針頭，緊貼皮膚表層刺入皮內(nèi)，然后再向上挑起并再稍刺入，即可注射藥液，此時可見皮膚表面鼓起一白色小皮丘。  （三）肌肉注射   肌肉注射應(yīng)選肌肉發(fā)達(dá)，無大血管通過的部位，一般多選臀部。注射時垂直迅速刺入肌肉，回抽針?biāo)ㄈ鐭o回血，即可進(jìn)行注射。給小白鼠、大白鼠等小動物作肌肉注射時，用左手抓住鼠兩耳和頭部皮膚，右手取連有5（1/2）針頭的注射器，將針頭刺入大腿外側(cè)肌肉，將藥液注入。 （四）腹腔

42、注射  用大、小白鼠做實驗時，以左手抓住動物，使腹部向上，右手將注射針頭于左（或右）下腹部刺入皮下，使針頭向前推 0.51.0cm，再以45度角穿過腹肌，固定針頭，緩緩注入藥液，為避免傷及內(nèi)臟，可使動物處于頭低位，使內(nèi)臟移向上腹。若實驗動物為家兔，進(jìn)針部位為下腹部的腹白線離開1cm處。  （五）靜脈注射 小白鼠和大白鼠：一般采用尾靜脈注射，鼠尾靜脈有三根，左右兩側(cè)及背側(cè)各一根，左右兩側(cè)尾靜脈比較容易固定，多采用，背側(cè)一根也可采用，但位置容易固定。操作時先將動物固定在鼠筒內(nèi)或扣在燒杯中，使尾巴露出，尾部用4550的溫水浸潤半分鐘或用酒精

43、擦拭使血管擴張，并可使表皮角質(zhì)軟化，以左手拇指和食指捏住鼠尾兩側(cè)，使靜脈充盈，用中指從下面托起尾巴，以無名指和小指夾住尾巴的末梢，右手持注射器連4(1/2)號細(xì)針頭，使針頭與靜脈平行（小于30），從尾下四分之一處（約距尾尖2-3厘米）處進(jìn)針，此處皮薄易于刺入，先緩注少量藥液，如無阻力，表示針頭已進(jìn)入靜脈，可繼續(xù)注入。注射完畢后把尾部向注射側(cè)彎曲以止血。如需反復(fù)注射，應(yīng)盡可能從末端開始，以后向尾根部方向移動注射。  幾種常用的動物不同給藥途徑的注射量  （六）淋巴囊注射  蛙類常采用此法，因其皮下有數(shù)個淋巴囊，注入藥物甚易吸收。腹部淋巴

44、囊和頭背淋巴囊常作為蛙類給藥途徑。一般多選用腹部淋巴囊給藥。注射時將針頭從蛙大腿上端刺入，經(jīng)大腿肌層入腹壁肌層，再進(jìn)入腹壁皮下，即進(jìn)入淋巴囊，然后注入藥液。有時也可采用胸淋巴囊給藥。方法是將針頭刺入口腔，使穿過下頜肌層入胸淋巴囊內(nèi)注入藥液，一次最大注射量為1毫升。蛙全身分布為咽、胸、背、腹側(cè)、腹、大腿和腳等七個淋巴囊。 （七）經(jīng)口給藥 在急性試驗中，經(jīng)口給藥多用灌胃法，此法劑量準(zhǔn)確，適用于小白鼠、大白鼠、家兔等動物。 小鼠、大鼠（或豚鼠）用輸血針頭或小號腰穿針頭，將其尖端斜面磨劑，用焊錫在針尖周圍焊一圓頭，注意勿堵塞針孔，即成灌胃針；亦可用燒成圓頭的硬質(zhì)玻璃毛細(xì)管

45、或特制的塑料毛細(xì)秋，作為導(dǎo)管。灌胃時將針按在注射器上，吸入藥液。左手抓住鼠背部及頸部皮膚將動物固定，右手持注射器，將灌胃針插入動物口中，沿咽后壁徐徐插入食道。動物應(yīng)固定成垂直體位，針插入時應(yīng)無阻力。若感到阻力或動物掙扎時，應(yīng)立即停止進(jìn)針或?qū)⑨槹纬?，以兔損傷或穿破食道以及誤入氣管。一般當(dāng)灌胃針插入小鼠34cm，大鼠或豚鼠4-6cm后可將藥物注入。常用的灌胃量小鼠為0.2-1ml，大鼠1-4ml，豚鼠為1-5ml。各種動物一次灌胃能耐受的最大容積小鼠為0.5-1.0ml，大鼠4-7ml，豚鼠為4-7ml，家兔為80-150ml，狗為200-500ml。 八）其它途徑給藥 

46、60;1呼吸道給藥 呈粉塵、氣體及蒸氣或霧等癥狀存在藥物或毒氣，均需要通過動物呼吸道給藥。如一般實驗時給動物乙醚作吸入麻醉，給動物吸一定量的氨氣、二氧化碳等觀察呼吸、循環(huán)等變化；給動物定期吸入一定量的SO2。鋸末煙霧等可造成慢性氣管炎動物模型等；特別在毒物學(xué)實驗中應(yīng)用更為廣泛。  2皮膚給藥 為了鑒定藥物或毒物經(jīng)皮膚的吸收作用、局部作用、致敏作用和光感作用等，均需采用經(jīng)皮膚給藥方法。如家兔和豚鼠常采用背部一定面積的皮膚脫毛后，將一定藥液涂在皮膚上，藥液經(jīng)皮膚吸收。 3脊髓腔內(nèi)給藥 此法主要用于椎管麻醉或抽取腦脊液。的灌胃針頭的頭端用錫

47、或者適宜的方法處理了針頭的銳口，自己用砂紙不可能將所有的銳口都磨掉，用這樣的針頭灌胃，損失小鼠食道的可能性比較大。 2.抓住小鼠，使其頭、頸和身體呈一直線。抓小鼠的動作很簡單，左手的小指和無名指抓住小鼠的尾巴，另外三個手指抓住小鼠的頸部即可。因為小鼠始終在活動中，若一次抓的感覺不是很順手，要放開重新抓，不要逞強進(jìn)行下一步操作。 3. 抓好小鼠就可以灌胃了，一般用1ml的注射器配灌胃針頭。灌胃針頭從小鼠的嘴角進(jìn)入，壓住舌頭，抵住上顎，輕輕向內(nèi)推進(jìn)，進(jìn)入食管后會有一個刺空感，進(jìn)入食道后就可以推注藥液了。（我認(rèn)為，所謂的灌胃，不必要灌胃針頭進(jìn)入小鼠的胃部，進(jìn)入食管后就可

48、以推藥了，這樣對小鼠食道的損傷要小點，特別是要長期灌胃給藥的情況下。）當(dāng)然，灌胃針頭也可以再往里面深入一點，防止藥液從口中流出。 4. 灌胃容積一般是0.10.2ml/10g，最大0.35ml/10g，每只小鼠的灌胃最大容積不超過0.8ml。 小鼠腹腔注射 1. 小鼠腹腔注射可以用1ml的注射器，配合4號針頭。 2. 腹腔注射時右手持注射器，左手的小指和無名指抓住小鼠的尾巴，另外三個手指抓住小鼠的頸部，使小鼠的頭部向下。這樣腹腔中的器官就會自然倒向胸部，防止注射器刺入時損傷大腸、小腸等器官。進(jìn)針的動作要輕柔，防止刺傷腹部器官

49、。 3. 尤其是對于體重較小的小鼠，腹腔注射時針頭可以在腹部皮下穿行一小段距離，最好是從腹部一側(cè)進(jìn)針，穿過腹中線后在腹部的另一側(cè)進(jìn)入腹腔，注射完藥物后，緩緩拔出針頭，并輕微旋轉(zhuǎn)針頭，防止漏液。 4. 小鼠腹腔注射的給藥容積一般為510ml/kg。 小鼠靜脈注射 操作步驟： 1. 首先要固定小鼠，最簡單的固定方法就是把小鼠放在盒子里面，讓它的尾巴伸在盒蓋的外面，用手抓住小鼠尾巴，輕輕往外拽，就可以固定好小鼠了。這種固定方法，小鼠可以在盒子里面活動，固定的也不是很牢固，但是只要你尾靜脈注射的手法很熟練，就足以用來注射了

50、。 還有的固定方法就是用一個小的圓筒，最好是金屬做的，（可以在當(dāng)?shù)氐蔫F匠鋪，或者買白鐵鋪里面定做）首先是金屬比較結(jié)實，而且可以用來固定在鐵架臺上，方便操作。圓筒的一段有個蓋子可以拿下來，蓋子中間有個小孔，可以讓小鼠的尾巴伸出來（中間的小孔可以用膠布纏一下，防止銳利的邊緣割傷小鼠尾巴）。另外一段可以用金屬網(wǎng)的結(jié)構(gòu)，網(wǎng)的形狀可以做成子彈頭的頭端形狀。網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)可以讓光線透近來，方便小鼠鉆進(jìn)圓筒里面。圓筒的長度約10cm，直徑約 34cm，可以做個系列長度和直徑的圓筒，適合不同大小的小鼠。 2. 固定好小鼠后就是注射了，一般用一次性的1ml的注射器就可以了，玻璃

51、 的1ml的注射器也可以用，針頭用4號的就可以了。 3. 注射前首先要讓小鼠的血管充盈?？梢圆捎?5%的酒精棉球擦拭的方法或者采用溫水浸泡的方法。若小鼠的血管很不清楚，推薦采用溫水浸泡的方法，水溫以不燙手為宜。溫水浸泡23分鐘后，取出小鼠尾巴，用干棉球擦拭。等一會兒，待血管充盈后，酒精棉球擦拭后就可以進(jìn)針了。若血管還不充盈，可以反復(fù)用溫水浸泡，切不可冒險注射，除非你手法很熟練，另當(dāng)別論。 4. 小鼠尾部共有四條血管，一般認(rèn)為左右的兩條靜脈比較容易注射，多采用這兩條靜脈進(jìn)針。一般要求進(jìn)針部位靠近小鼠的尾端，這樣若注射失敗的話，還可以再向上選擇進(jìn)針

52、點。但是進(jìn)針部位也不可以太靠下，因為越往下，靜脈越細(xì)，操作越難，一般以小鼠尾巴下三分之一的位置比較好。 5. 最關(guān)鍵的就是進(jìn)針了。進(jìn)針時操作者左手食指和拇指固定住小鼠的尾巴，讓小鼠的尾巴在經(jīng)過拇指后向下彎曲，進(jìn)針點靠近拇指指甲。針頭和血管呈約30°角，針尖斜面朝上，輕輕挑刺入皮膚后針頭立即和血管平行，一般情況下一次就可以進(jìn)入血管，可以將針頭刺入血管一大半，左右輕輕晃動針頭，確定針頭在血管內(nèi)，就可以推注藥液了，正常情況下，推注的過程應(yīng)該沒有明顯阻力，血管也不會鼓起。推液時動作宜輕柔，若發(fā)現(xiàn)血管鼓起，那是針頭沒有刺入血管，需立即拔出針頭。 皮下注射給藥

53、60;將藥液推入皮下結(jié)締組織，經(jīng)毛細(xì)血管、淋巴管吸收進(jìn)入血液循環(huán)的過程。作皮下注射常選項背或大腿內(nèi)側(cè)的皮膚。操作時，常規(guī)消毒注管。此法可采血0.81.2ml。 swordzjsh腫瘤造模實驗中的一點心得： 動物選擇：KM小鼠，裸鼠，C57 等均可作為，但是個人認(rèn)為KM能做出來最好，畢竟比較有普遍性，還是正常生理狀態(tài)的健康動物，比較有說服力，還便宜，裸鼠或者其他特定品種，比較適合特定的瘤株 瘤株類型： H22 S180; EAC 等 關(guān)于腫瘤細(xì)胞活力的問題：一般買回來的瘤株，需要經(jīng)過復(fù)蘇過程，很多人復(fù)蘇以后

54、就直接給動物接種了，或者傳一代以后就開始實驗了，一般這個時候腫瘤細(xì)胞活力往往是不夠的，很難在短時間內(nèi)長到規(guī)定重量，所以建議至少在動物體內(nèi)傳2代，讓腫瘤細(xì)胞活力充分體現(xiàn)以后再開始用于實驗。 關(guān)于接種部位的問題：以小鼠為例一般可以選擇腋下或者后肢，有的文章說是背部接種，但是背部血管不發(fā)達(dá)，營養(yǎng)不夠，一般不建議采用。接種一般采用皮下注射，針頭我喜歡沿皮膚水平進(jìn)入，然后挑起表皮，注射，接種后3天我開始給藥。 給藥時間：一般從開始造模起2周內(nèi)我就會處理動物了，因為腫瘤如果擴散后會導(dǎo)致動物的大量死亡，畢竟是腫瘤啊，動物大量死亡的時間也相對集中，也許前一天還好，過一晚上就死掉不少，那個時

55、候你哭都找不到墳頭，只要腫瘤差不多夠重了就處理吧。 關(guān)于進(jìn)食水的問題：別個都要死掉了，就別吝嗇了，想吃就吃，想喝就喝吧。 關(guān)于模型對照組的問題： 我已經(jīng)在別的帖子里面強調(diào)過了，這次再強調(diào)一下，接種以后一定要每天去騷擾它們一下，我有次試驗偷懶，模型組沒有管他們，結(jié)果模型組的腫瘤最后比給藥組還小，都只有綠豆大，導(dǎo)致試驗失敗，郁悶死，后來重做的時候每天堅持給模型組生理鹽水，結(jié)果腫瘤瘋長。說起來很奇怪，但是這個是事實，以后我再沒有偷懶過，每次都成功復(fù)制出了模型。 關(guān)于腫瘤重量的問題：模型組腫瘤重量應(yīng)該不低于0。5g，我不記得在哪本書上看到的了，反正是有個規(guī)定的&

56、#160;剝瘤 zhangweilcb：腋窩的腫瘤長到第12天時，腫瘤在2.0g左右，我在剝瘤子時感覺比較困難，對于一個瘤子，在剝的前半段還是比較好剝的，但越往里越難剝，主要是瘤子在腋窩深處和小鼠的右肢長到一塊，不容易區(qū)分，每次剝完后，在最里面總感覺還剩一點腫瘤在那里。而且，經(jīng)常把血管剪破，導(dǎo)致血液流出。不知該如何處理。腫瘤細(xì)胞可否接種到小鼠腋窩偏下，或是接近腹部？我想這樣在剝瘤子時會輕松些，請指教。 swordzjsh：接種的時候要精確控制接種在皮下，靠皮內(nèi)會與皮膚強烈粘連，靠肌肉會與肌肉強烈粘連，而且不要太靠腋窩里面，可以往尾部靠一些，多接幾次體會一下吧。另外也可以稍微