Nanodrop2000中文操作手冊(cè)

1、Nanodrop 2000/2000C 分光光度計(jì)V1.0 用戶手冊(cè)基因有限公司儀器應(yīng)用技術(shù)支持親愛的用戶，您好！非常感謝您選購我公司代理的儀器。我們將竭誠為您提供優(yōu)質(zhì)的售后服務(wù)及免費(fèi)的專業(yè)應(yīng)用培訓(xùn)。為了更好地進(jìn)行儀器的應(yīng)用培訓(xùn)，我們根據(jù)您所選購的儀器特點(diǎn)，將需要您配合準(zhǔn)備的工作敬告如下：1. 應(yīng)用培訓(xùn)內(nèi)容：儀器操作培訓(xùn)和軟件應(yīng)用培訓(xùn)。儀器操作培訓(xùn)包括：儀器的操作、維護(hù)和儀器使用注意事項(xiàng)。軟件應(yīng)用培訓(xùn)包括：用戶本次所購買的同儀器配套的所有軟件的軟件應(yīng)用培訓(xùn)。2. 培訓(xùn)時(shí)間：儀器正式安裝調(diào)試后，由安裝工程師現(xiàn)場(chǎng)培訓(xùn)儀器操作。3. 應(yīng)用培訓(xùn)中所需準(zhǔn)備的試劑、耗材和儀器均需由用戶提供，并在系統(tǒng)培訓(xùn)開

2、始前準(zhǔn)備好。4. 用戶簽收售后服務(wù)工作報(bào)告后，基因公司正式的系統(tǒng)培訓(xùn)內(nèi)容即完成。您以后在使用的過程中有任何疑問都可以向我們咨詢，我們非常樂意為您們解決應(yīng)用上遇到的問題。5. 在儀器的使用過程中，無論遇到您認(rèn)為多么微小或繁瑣的問題，請(qǐng)您及時(shí)和我們聯(lián)系，一個(gè)及時(shí)的通知能節(jié)約您的時(shí)間，也能幫助我們更好的了解儀器和軟件。6. 聯(lián)系我們時(shí)請(qǐng)您提供：儀器型號(hào)、軟件名稱，版本、錯(cuò)誤代碼、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、操作系統(tǒng)（98/2k/xp/NT）、維修歷史等相關(guān)資料。 本守則提的信息僅供參考，本守則包含的所有信息應(yīng)該是正確和完整的。如果對(duì)本守則中的描述有疑問，請(qǐng)參考廠家的英文操作說明。如果由于您的不正當(dāng)使用而對(duì)儀器造成損壞

3、或者導(dǎo)致儀器的性能損傷，本公司將不會(huì)對(duì)此負(fù)責(zé)。1 儀器介紹儀器描述Thermo Scientific NanoDrop 2000/2000C分光光度計(jì)可以檢測(cè)0.5-2ul的樣本，而且檢測(cè)是非常高的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。ND2000C分光光度計(jì)不僅提供了NanoDrop樣品保留專利技術(shù)的便利性，也可以使用傳統(tǒng)的比色皿來進(jìn)行樣本檢測(cè)。樣本保留系統(tǒng)應(yīng)用了表面張力來把樣本保留在兩根檢測(cè)光纖中間，這使得儀器可以檢測(cè)較高濃度的樣本而不用稀釋。應(yīng)用這個(gè)技術(shù)，全波長(zhǎng)（190840nm）NanoDrop 2000/2000C分光光度計(jì)檢測(cè)樣本的最高濃度是標(biāo)準(zhǔn)比色皿的200倍。儀器規(guī)格NanoDrop 2000/20

4、00C基座模式儀器類型： 分光光度計(jì)最小樣品量： 0.5ul波長(zhǎng)： 1mm（可以自動(dòng)調(diào)整到0.05mm）光源： 氙閃爍燈檢測(cè)器類型： 2048象素線型硅CCD陣列波長(zhǎng)范圍： 190840nm波長(zhǎng)準(zhǔn)確性： ±1 nm光譜分辨率： 1.8nm（FWHMHg 253.7nm）吸收光精確性： 0.002吸光值（1mm光程）吸收光準(zhǔn)確性： ±2（257nm波長(zhǎng)下，0.76個(gè)吸光值）吸光值范圍： 0.02300（等同于10mm光程時(shí)）檢測(cè)極限： 2ng/ul dsDNA最大檢測(cè)濃度： 15,000ng/ul（dsDNA）檢測(cè)時(shí)間： <5秒儀器占地面積; 14cm×20c

5、m重量： 2kg樣本基座材料： 303不銹鋼以及石英光纖工作電壓; 12V工作功率： 1218W（最大30W）軟件兼容性; Windows XP 和Vista（32bit）NanoDrop 2000C比色皿模式光束高度： 8.5mm加熱： 37±0.5攪拌： 150850RPM光程： 10，5，2，1mm檢測(cè)極限： 0.4ng/ul dsDNA最大檢測(cè)濃度： 750ng/ul dsDNA檢測(cè)時(shí)間： <3秒重量： 2.1 kg樣品保留基座檢測(cè)用移液器加12ul樣品到檢測(cè)基座上，對(duì)于高濃度的核酸和蛋白A280檢測(cè)，最少可以使用0.5ul的樣本。在基座上包埋一根光纖（接受光纖），把待

6、檢測(cè)樣本加到檢測(cè)基座上，第二根光纖（光源光纖）放下來與液體樣本接觸，在兩根光纖末端形成液柱。由一個(gè)脈沖氙燈作為光源并且使用一個(gè)線性CCD陣列來檢測(cè)通過液體的光信號(hào)。儀器由一個(gè)裝由Nanodrop軟件的電腦控制，所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)都以workbook（*.twbk） 文件形式保存在電腦中?；鶛z測(cè)需要的樣本量雖然基座檢測(cè)時(shí)樣本的量不是特別關(guān)鍵，但是必須保證兩根光纖之間形成完整的液柱，這樣才能保證兩根光纖之間形成樣本液橋。決定液滴表面張力的主要因素是溶液中水 分子的氫鍵結(jié)合力。通常情況下，溶液中所有的溶質(zhì)（包括：蛋白，DNA，RNA，鹽離子，去垢劑分子）都會(huì)降低表面張力，因?yàn)檫@些 分子能夠和水分子的氫鍵

7、產(chǎn)生作用。雖然一般情況下1ul的樣本就足可以檢測(cè)了，但對(duì)于那些表面張力比較小的樣本最好使用2ul樣本來檢測(cè)。現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)的經(jīng)驗(yàn)表明下列樣本的用量足夠得到準(zhǔn)確重復(fù)性高的檢測(cè)結(jié)果：核酸水溶液：1ul純蛋白：2ulBradford，BCA，Lowry或者蛋白Pierce 660nm試驗(yàn)：2ul微生物細(xì)胞懸浮液：2ul最好使用精確的移液器（02ul）和tip頭來取樣來保證取樣的準(zhǔn)確。低精確度的移液器（010ul或者更大的）很難準(zhǔn)確的加1ul樣本到檢測(cè)基座上。如果用戶對(duì)樣本的特征或者移液器精確性不太確認(rèn)，最好使用2ul樣本來做檢測(cè)。基座基本使用1 抬起樣品臂，把樣品加到檢測(cè)基座上。2 放下樣品臂，使用電腦上

8、的軟件開始吸光值檢測(cè)。在上下兩個(gè)光纖之間會(huì)自動(dòng)拉出一個(gè)樣品柱，然后進(jìn)行檢測(cè)。3 當(dāng)檢測(cè)完成后，抬起樣品臂，并用干凈的無塵紙把上下基座上的樣品擦干凈。這樣擦拭樣品就可以避免樣品在基座上的殘留。比色皿檢測(cè)Nanodrop 2000C可以檢測(cè)最高48mm的10mm光程的比色皿。當(dāng)使用微量，半微量或者超微量的比色皿時(shí)，我們建議使用周邊不透明的比色皿，不透明的比色皿保證了光穿過樣本后全部到達(dá)檢測(cè)器。而透明的比色皿會(huì)讓那些沒有透過樣本的光也到達(dá)檢測(cè)器，這樣會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)特別是低濃度樣品的檢測(cè)不準(zhǔn)確。當(dāng)檢測(cè)的波長(zhǎng)為紫外區(qū)域時(shí)（<340nm），要使用石英白色皿，這樣才能透過紫外光。雖然有一些制造商提供紫外透

9、過的一次性塑料比色皿，但是即使質(zhì)量最好的塑料比色皿也不能讓低于220nm以下波長(zhǎng)的紫外光透過，而大部分玻璃和塑料比色皿是完全紫外非透過性的。一般單光束的分光光度計(jì)都會(huì)推薦相配的比色皿，而許多比色皿生產(chǎn)廠家都有嚴(yán)格的質(zhì)控來保證比色皿的性能而不用在換比色皿時(shí)需要校準(zhǔn)，這些比色皿都可以用在Nanodrop 2000C上。比色皿檢測(cè)樣品量在樣品檢測(cè)時(shí)必須保證比色皿中的樣品量足夠，能夠讓光線完整穿過樣品。2mm的光速從比色皿底部以上8.5mm的位置穿過，請(qǐng)參考比色皿生產(chǎn)廠家的建議來確定需要的樣品體積。比色皿檢測(cè)基本操作1 把樣品加到比色皿中，要保證加入的樣品量足夠，要蓋過光束。2 抬器樣品臂，把比色皿查

10、入到儀器中，插入比色皿時(shí)要注意儀器上面的光路的指向的方向。3 在做比色皿檢測(cè)時(shí)樣品臂必須放下來。4 使用電腦上的軟件對(duì)儀器進(jìn)行初始話。5 當(dāng)檢測(cè)完成后，移出比色皿，倒出樣品，清洗干凈比色皿?？瞻讓?duì)照和吸收光計(jì)算當(dāng)Nanodrop 2000/2000C分光光度計(jì)做好空白對(duì)照后，儀器會(huì)自動(dòng)記錄空白參照液的光譜結(jié)果并保存起來作為波長(zhǎng)的光強(qiáng)度參比值。當(dāng)進(jìn)行樣品檢測(cè)時(shí)，透過樣品的光強(qiáng)度將被記錄下來。樣品的透過光強(qiáng)度和空白對(duì)照的透過光強(qiáng)度按下列公式來計(jì)算樣品吸光值：這樣，可以通過樣本和空白對(duì)照的透過光強(qiáng)度來計(jì)算特定波長(zhǎng)下的吸光值。通過BeerLamber定律來確定樣品濃度和吸光值之間的關(guān)系：A吸光值（A）

11、波長(zhǎng)依賴的摩爾消光系數(shù)（單位 L/mol*cm）b光程（單位 cm）c樣品濃度（單位 mol/L）參比溶液，或者空白溶液，通常是那些融解靶向分子的溶劑，這個(gè)溶劑要和樣品溶液具有相同的pH值和離子強(qiáng)度?；鶛z測(cè)空白循環(huán)我們建議把空白對(duì)照當(dāng)成樣品來檢測(cè)，這樣可以確認(rèn)儀器性能完好并且基座上沒有樣品殘留，按下列操作來運(yùn)行空白循環(huán)：1 軟件中打開將進(jìn)行的操作模式，把空白對(duì)照加到基座上，并把樣品臂放下。2 點(diǎn)擊Blank來進(jìn)行空白對(duì)照檢測(cè)并保存參比圖譜。3 重新加空白對(duì)照到基座上，把它當(dāng)成樣品一樣來檢測(cè)，點(diǎn)擊Measure來進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果應(yīng)該是差不多為一水平線，吸光值變化應(yīng)不超過0.04A（10mm光程）

12、4 擦去上下基座上的液體，重生進(jìn)行上面的操作，直到檢測(cè)光譜圖的變化不超過0.04A（10mm光程）。雖然不需要在每個(gè)樣品之間進(jìn)行空白校準(zhǔn)，但我們建議在檢測(cè)多個(gè)樣品時(shí)，最好每30min進(jìn)行一次空白校準(zhǔn)。30min后，最后一次做空白檢測(cè)的時(shí)間將顯示在軟件下面的狀態(tài)欄上。熒光染料在進(jìn)行Micro Array 和Protein & Labels檢測(cè)時(shí)，軟件使用BeerLambert定律來進(jìn)行熒光染料計(jì)算。用戶可以使用Dye/Chrom來編寫新的新的染料。下表是軟件中保存的染料的參數(shù)：2軟件電腦配置l Microsoft Windows XP或者Vista（32bit）操作系統(tǒng)l 1.5GHz或

13、者更高速的處理器l CD ROM光驅(qū)l 1GB或者更高的內(nèi)存（Vista系統(tǒng)需要2GB）l 40MB硬盤空間l 具有USB端口（儀器通過USB與電腦連接）軟件安裝系統(tǒng)軟件必須在儀器連接到電腦上之前安裝好，安裝軟件時(shí)必須使用管理員用戶進(jìn)入電腦。按下列步驟來正確的安裝軟件：1 關(guān)閉所有程序，并把USB線拔出。2 把軟件光盤插入到驅(qū)動(dòng)器中，軟件的安裝menu會(huì)自動(dòng)顯示，如果安裝不能自動(dòng)開始，點(diǎn)擊Start并選擇Run。在Run對(duì)話框，輸入 x:Set-up，這里的“x”代表電腦的光驅(qū)，點(diǎn)擊OK.3 按照屏幕提示來進(jìn)行操作來安裝軟件，然后連接USB線。如果出現(xiàn)“發(fā)現(xiàn)新硬件提示”，Windows XP

14、SP2操作系統(tǒng)將詢問是否需要通過Internet來尋找合適的軟件，選擇No，not this time，然后自動(dòng)進(jìn)行軟件安裝。這時(shí)NanoDrop 2000/2000c分光光度計(jì)就可以使用了。如果軟件不能打開，參考“Diagnostics and Troubleshooting”來尋找解決辦法?？梢栽贜anoDrop公司的網(wǎng)站上及時(shí)下載軟件更新。Thermo軟件安裝資質(zhì)Thermo軟件的安裝資質(zhì)程序執(zhí)行NanoDrop 2000/2000c軟件的安裝資質(zhì)。安裝資質(zhì)檢驗(yàn)安裝的是否是正確的軟件，并可用來檢驗(yàn)這些文件在安裝時(shí)是否被修改，刪除或者覆蓋。運(yùn)行Thermo軟件安裝資質(zhì)程序：1 選擇桌面St

15、art打開Start menu。2 選擇All programs>Thermo>Thermo Software IQ。3 按照操作提示來認(rèn)證您系統(tǒng)軟件的安裝。4 使用Help菜單進(jìn)入 Thermo IQ User Guide PDF.線連接在使用儀器進(jìn)行樣品檢測(cè)前，需要使用USB連接線把儀器和電腦相連，把12V的電源線接到儀器背面的插口上，并連接電源。當(dāng)儀器不使用時(shí)，電源不用拔下，當(dāng)儀器處于“待命”狀態(tài)時(shí)，其功率為5W，這時(shí)閃爍氙燈處于關(guān)閉狀態(tài)。在儀器背面的電源線插口上面有一個(gè)LED燈指示儀器正連接上12V電源。注冊(cè)您的儀器請(qǐng)及時(shí)注冊(cè)您的儀器，我們會(huì)在網(wǎng)上升級(jí)軟件并且免費(fèi)增加新的特

16、性。我們會(huì)及時(shí)更新我們的用戶名單，這樣我們可以及時(shí)通知您這些軟件的更新。所有提供的信息都市完全可信的，請(qǐng)?jiān)诰W(wǎng)上注冊(cè)您的儀器。軟件特征NanoDrop 2000/2000c軟件被分為左右兩塊，狀態(tài)欄和工作按鍵在左側(cè)，而右側(cè)顯示主菜單和數(shù)據(jù)窗口。在NanoDrop 2000的用戶守則中有一個(gè)“附件”中包括一頁軟件特征總則。軟件左側(cè)部分任務(wù)欄任務(wù)欄選項(xiàng)包括以下幾個(gè)選項(xiàng)：l Home顯示特定用戶群所能夠操作的應(yīng)用的主菜單，默認(rèn)的用戶群為Classic。l My Date管理數(shù)據(jù)的存檔和恢復(fù)。樣品數(shù)據(jù)保存在用戶指定的文件夾中，請(qǐng)參考“數(shù)據(jù)和帳戶管理”來查看詳細(xì)內(nèi)容。l Options包括4個(gè)控制鍵，請(qǐng)參

17、考“數(shù)據(jù)和帳戶管理”來查看詳細(xì)內(nèi)容。任務(wù)工具欄選項(xiàng)可以打開特定的應(yīng)用，包括：l Measure（指定應(yīng)用）顯示最近選擇的應(yīng)用。l Reports包括下列三個(gè)功能鍵：u Report顯示累積的樣品數(shù)據(jù)結(jié)果表格，并顯示選擇樣品的吸光圖譜。u Configuration選擇一個(gè)報(bào)告欄顯示，并選擇報(bào)告欄顯示的順序。u Print選擇需要打印的相關(guān)信息，設(shè)定打印頁面格式和報(bào)告中打印圖標(biāo)的格式。l Oligo Calc（僅應(yīng)用于核酸和Micro Array）計(jì)算特定核酸分子的分子量，激發(fā)效率，濃度因子和熔點(diǎn)。請(qǐng)參考“核酸”和“Micro Array”中的“Oligo Calc”來獲取詳細(xì)信息。l Dye/

18、Chrom.Editor（僅應(yīng)用于Miro Array和Protein & Labels）讓用戶進(jìn)入并編寫新的染料參數(shù)，參考Miro Array和Protein & Labels中的Dye/Chrom.Editor來獲取詳細(xì)信息。l Editor Options（方法編輯欄內(nèi)）微編輯方法設(shè)定可用的選擇。功能鍵當(dāng)應(yīng)用被打開時(shí)，下列的四個(gè)功能鍵被顯示在左側(cè)欄的頂部：l Measure開始進(jìn)行樣品檢測(cè)，這個(gè)功能鍵在剛進(jìn)入一個(gè)應(yīng)用時(shí)是灰色的，當(dāng)做好空白對(duì)照后才能使用。l Print Screen在默認(rèn)打印機(jī)上打印樣品的數(shù)據(jù)和相應(yīng)的光譜圖。l Blank使用溶解樣品的緩沖液來做空白對(duì)照。

19、在進(jìn)行樣品檢測(cè)前必須先做空白對(duì)照。l Re-Blank使用溶解樣品的緩沖液來再做個(gè)空白對(duì)照。Re-Blank功能會(huì)對(duì)最近的一個(gè)樣品濃度重新計(jì)算，并在屏幕上顯示修正后的光譜圖。當(dāng)選擇Method Editor或者Kinetic Editor時(shí)，會(huì)顯示下列四個(gè)功能鍵：l New開始建立一個(gè)新的客戶定制型方法。l Save在當(dāng)前選擇的組中保存編寫的方法。l Measure打開新編寫好的方法。l Delete刪除一個(gè)方法。左側(cè)欄的其他特征選擇主工具欄選擇l File主工具欄下拉菜單中包括下列選項(xiàng)：u New Workbook打開一個(gè)新的工作本，而當(dāng)前使用的工作本將被保存并自動(dòng)關(guān)閉。u Close Wo

20、rkbook and go Home關(guān)閉當(dāng)前的工作本并回到主頁面，當(dāng)工作本被關(guān)閉時(shí)所有的數(shù)據(jù)都會(huì)自動(dòng)保存。u Close All Workbook and go Home關(guān)閉所有工作本（所有運(yùn)用和方法）并回到主頁面。u Print Report在默認(rèn)打印機(jī)上打印當(dāng)前報(bào)告。u Use current setting as default當(dāng)一個(gè)新的應(yīng)用工作本被打開時(shí)，把當(dāng)前的應(yīng)用參數(shù)如：樣品類型，單位，基線校準(zhǔn)波長(zhǎng)和比色皿類型設(shè)定為默認(rèn)。設(shè)定好后，當(dāng)前報(bào)告格式也會(huì)被設(shè)定為默認(rèn)。這個(gè)功能在每個(gè)應(yīng)用和方法中設(shè)定特定用戶選擇時(shí)非常有用。u E-mail current workbook把當(dāng)前的工作本粘貼

21、到一個(gè)新的Email中。當(dāng)要把這些數(shù)據(jù)發(fā)到NanoDrop殘破技術(shù)支持那里時(shí)，請(qǐng)使用My Date 任務(wù)欄來定位合適的自動(dòng)保存文件。使用軟件打開文件并發(fā)送給技術(shù)支持。注意：雖然在打開自動(dòng)保存的文件時(shí)所有報(bào)告內(nèi)容不能顯示，但是所有內(nèi)容可以被技術(shù)支持恢復(fù)。l Help在任何界面下都有可以運(yùn)用Ctrl-m，Ctrl-h或者F1鍵來進(jìn)入幫助文件。在幫助菜單下的上訴選項(xiàng)都市針對(duì)當(dāng)前的軟件版本和儀器型號(hào)的。左欄儀器設(shè)定l Add to Report顯示哪些樣品數(shù)據(jù)被添加到當(dāng)前的報(bào)告中。雖然所有數(shù)據(jù)被備份到自動(dòng)保存工作本中并可以以后恢復(fù)。在日常使用中最好 把Add to Report選擇上，這樣使數(shù)據(jù)恢復(fù)更

22、容易。在樣品檢測(cè)前選擇添加到報(bào)告中來把結(jié)果保存到報(bào)告和工作本中。l Overlay spectra顯示獨(dú)個(gè)光譜圖，一個(gè)交叉指針被顯示并和最近檢測(cè)的樣品相關(guān)聯(lián)。當(dāng)覆蓋光譜被選擇，點(diǎn)擊一個(gè)光譜來關(guān)聯(lián)交叉指針。n 覆蓋的樣品編號(hào)顯示在左側(cè)突變的頂部，最后一個(gè)檢測(cè)的樣品顯示在圖的最上面并被標(biāo)記為紅色。在不同的圖譜上點(diǎn)擊可以把這個(gè)圖譜顯示為紅色。n 在進(jìn)行新樣品檢測(cè)時(shí)，去選擇Overlay Spectra將清空所有光譜。l Small sample volume（僅僅適用于核酸和蛋白A280運(yùn)用）當(dāng)樣品在10mm光程的吸光值在3.0或者以上時(shí)，可以只使用0.5ul樣品進(jìn)行檢測(cè)。l Use Cuvette

23、（僅僅適用于NanoDrop 2000c）激活比色皿檢測(cè)，客戶使用比色皿檢測(cè)時(shí)可進(jìn)行的選擇包括：n Pathlengh包括10，5，2，和1mmn Stir Speed速度設(shè)定范圍是110，默認(rèn)設(shè)定為關(guān)閉。n Heat to 37把比色皿槽加入到37±5。選擇上后，當(dāng)前的溫度將被顯示在軟件屏幕的底部。加熱需要大約110min才能達(dá)到37。把樣品加熱到37需要的時(shí)間依賴于樣品溫度，在默認(rèn)情況下，加熱模塊是關(guān)閉的。注意：如果更改一個(gè)不同的應(yīng)用，加入模塊將被關(guān)閉。然而如果使用相同的運(yùn)用但使用基座檢測(cè)，加熱模塊將繼續(xù)運(yùn)行。右側(cè)欄右側(cè)欄包括下列主菜單：l Group drop-down box

24、選擇首選菜單顯示和相應(yīng)的應(yīng)用，默認(rèn)的選擇是Classic NanoDrop。l Predefined application buttons額外的主菜單選擇。l User-Defined list在用戶定義方法或者動(dòng)力學(xué)前是空的，當(dāng)客戶定義了方法或者動(dòng)力學(xué)，定量方法左邊有一個(gè)量標(biāo)簽，而動(dòng)力學(xué)方法左邊有一個(gè)時(shí)鐘標(biāo)簽。當(dāng)一個(gè)應(yīng)用被打開時(shí)，右邊欄顯示樣品的光譜圖以及相關(guān)運(yùn)用的數(shù)據(jù)。在用戶守則文件圖標(biāo)上部有基座檢測(cè)或者比色皿檢測(cè)的標(biāo)簽。圖像顯示圖像面板顯示最新檢測(cè)的樣品光譜圖。當(dāng)選擇了附件圖片的功能，就可以顯示多個(gè)樣品的數(shù)據(jù)結(jié)果。樣品名稱號(hào)顯示在左側(cè)欄的頂部。最近檢測(cè)的樣品顯示在結(jié)果欄的最上面，其光譜

25、圖顯示為紅色。注意：點(diǎn)擊較早檢測(cè)的樣品名可以打開結(jié)果并讓其圖譜顯示為紅色。雖然樣品光譜圖顯示的數(shù)量沒有限度，軟件在全屏狀態(tài)下只能在左邊最多顯示28個(gè)樣品的名稱。當(dāng)達(dá)到顯示最大數(shù)量時(shí)，樣品列表就會(huì)出現(xiàn)一個(gè)下拉框。光譜圖上的區(qū)域可以被放大，點(diǎn)擊鼠標(biāo)左鍵，在想放大的區(qū)域拉一個(gè)框，然后再點(diǎn)擊一下框。要把放大的區(qū)域縮小回去，鼠標(biāo)右擊顯示多選擇菜單：l Autoscale all sample為高濃度樣品設(shè)定較高的Y-軸上限，為低濃度樣品設(shè)定較低的上限，來保證樣品吸收光圖譜完整顯示。l Full Display all samples為所有樣品重新設(shè)定X和Y軸值來顯示全部光譜圖。l Set Scale手動(dòng)

26、設(shè)定Y軸最大和最小值。l Sample labels（僅適用于UV-Vis）為最近的樣品選擇一個(gè)特定的吸收光波長(zhǎng)，顯示在光譜圖中。l Sample legend確定是否要顯示樣品的名稱數(shù)據(jù)和帳戶管理我的數(shù)據(jù)樣品檢測(cè)的結(jié)果被記錄在工作薄中并保存在客戶指定的文件夾。通過左側(cè)欄我的數(shù)據(jù)任務(wù)欄來保存工作薄。使用查詢框來找到保存的感興趣的工作薄。當(dāng)我的數(shù)據(jù)任務(wù)欄被選擇時(shí)在左邊欄有兩個(gè)有效的工具。選擇New 打開一個(gè)新的工作薄在右側(cè)突出其應(yīng)用。選擇Open打開選擇的工作薄并開始相關(guān)的應(yīng)用。額外的檢測(cè)結(jié)果可以添加到打開的工作薄中。在新建和打開按鍵下有五個(gè)快速鏈接可以進(jìn)入存檔的工作薄，然后顯示在右側(cè)欄中。雙擊

27、一個(gè)工作薄打開文件，并可讓其他的檢測(cè)結(jié)果附加到工作薄中。注意：如果要把一個(gè)樣品的檢測(cè)結(jié)果加到一個(gè)工作薄中，在進(jìn)行樣品檢測(cè)前必須把“添加到報(bào)告”鍵選上。Report報(bào)告是用戶定制型的顯示樣品結(jié)果的表格。一旦打開一個(gè)應(yīng)用或者用戶方法，就可以看到報(bào)告任務(wù)欄，可以通過點(diǎn)擊任務(wù)欄來打開報(bào)告。當(dāng)選擇了報(bào)告任務(wù)欄后，在右欄中顯示下列三個(gè)設(shè)定：l Report在一個(gè)打開的工作薄中顯示保存的樣品數(shù)據(jù)。在頁面底部的報(bào)告欄中可以顯示選擇的樣品光譜圖。如果沒有選擇樣品，則報(bào)告欄顯示表格中第一個(gè)樣品的光譜圖?？梢酝ㄟ^選擇報(bào)告表格中的的多個(gè)樣品數(shù)據(jù)來顯示多個(gè)光譜圖。l Configuration選擇報(bào)告欄顯示的內(nèi)容和順序

28、。只有那些選擇的欄目的信息才會(huì)出現(xiàn)在導(dǎo)出的報(bào)告文件中。參考下列的導(dǎo)出報(bào)告內(nèi)容獲取 更多信息。l Print為報(bào)告添加標(biāo)題和副標(biāo)題。檢測(cè)的方法信息和光譜圖可以隨報(bào)告表格一起打印。注意：可以通過點(diǎn)擊應(yīng)用或者檢測(cè)方法顯示圖下面的波浪圖標(biāo)簽來顯示一個(gè)僅僅查看的報(bào)告文件。當(dāng)選擇了報(bào)告任務(wù)欄，在左側(cè)欄的頂部可以顯示三個(gè)圖標(biāo)：l Preview在打印報(bào)告前預(yù)覽報(bào)告。應(yīng)用選擇工具欄或者打印圖標(biāo)來顯示選擇的頁眉和頁腳信息。參考“Date and Account Management”中的“Options”來獲取詳細(xì)信息。l Print開始打印一個(gè)報(bào)告。l 把報(bào)告導(dǎo)出為.xml，.tsv，或者.tebk格式文件，

29、特定的選項(xiàng)包括：n Report，Excel XML Spreadsheet（*.xml）把報(bào)告保存為可以使用Excel表格打開的文件。這個(gè)保存格式只能把報(bào)告保存為表格。在保存報(bào)告前必須配置報(bào)告顯示內(nèi)容。n Report，Tab Separated Values（*.xml）把報(bào)告保存為可以用記事本或者Excel文件打開的格式。這個(gè)保存格式只能把報(bào)告保存為表格。在保存報(bào)告前必須配置報(bào)告顯示內(nèi)容。n Spectrum，Excel XML Spreadsheet（*.xml）保存選擇樣品的每個(gè)波長(zhǎng)下的吸光值，可以在Excel表格中打開結(jié)果。如果選擇了多個(gè)樣品，則可以在Excel的多個(gè)工作表中保存每

30、個(gè)波長(zhǎng)下相應(yīng)的吸光值。n Spectrum，Tab Separated Value（*.tsv）保存選擇樣品的每個(gè)波長(zhǎng)下的吸光值，可以在Excel表格或者記事本中打開結(jié)果。多個(gè)樣品的結(jié)果可以分別保存在一個(gè)工作欄中。n Spectra，New Workbook（*.twbk）把選擇的樣品數(shù)據(jù)保存為一個(gè)新的工作薄，可以在NanoDrop 2000/2000c軟件中再打開。n ND Legacy（*.tsv）保存相應(yīng)波長(zhǎng)下的每個(gè)吸光值，并在報(bào)告中保存調(diào)整好的特定區(qū)域。這個(gè)功能可以在一個(gè)工作薄中保存多個(gè)樣品數(shù)據(jù)并可以使用記事本或者Excel打開。在導(dǎo)出前必須配置報(bào)告顯示內(nèi)容。注意：Spectra，Ne

31、w Workbook（*.twbk）和ND Legacy（*.tsv）在動(dòng)力學(xué)檢測(cè)時(shí)不能使用。如果電腦不能識(shí)別.xml文件為Excel，可以通過Excel打開這些文件。向以前的工作薄中添加數(shù)據(jù)如果在一個(gè)工作薄打開時(shí)關(guān)閉軟件，會(huì)出現(xiàn)一個(gè)信息為你是否想把數(shù)據(jù)添加到工作薄中，這樣下次打開這個(gè)應(yīng)用時(shí)就可以顯示這些信息。通過我的數(shù)據(jù)工具欄來打開工作薄，這樣可以在軟件關(guān)閉前把數(shù)據(jù)添加到關(guān)閉的工作薄中。在做蛋白定量實(shí)驗(yàn)時(shí)，建議在添加新結(jié)果到工作薄之前，按照操作說明建立一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線。重新處理在某些應(yīng)用模式下，在左側(cè)欄的頂部有重新處理工具。這個(gè)工具可以基于不同的基線校準(zhǔn)波長(zhǎng)，濃度單位或者樣品類型對(duì)樣品重新進(jìn)行濃

32、度計(jì)算。這個(gè)功能不能用于重命名的樣品。重新處理欄可以在報(bào)告內(nèi)容配置欄上選取。注意：重新處理的樣品數(shù)據(jù)將作為一個(gè)新的數(shù)據(jù)出現(xiàn)在當(dāng)前報(bào)告中，重新處理數(shù)據(jù)不會(huì)備份倒自動(dòng)保存的工作薄中。重命名一個(gè)樣品任何時(shí)間都可以在報(bào)告中修改樣品的名稱。注意：樣品名稱的修改不會(huì)反應(yīng)到自動(dòng)保存的文件中。自動(dòng)保存文件除動(dòng)力學(xué)檢測(cè)結(jié)果，其他所有結(jié)果都自動(dòng)存檔為Autosave file（*.twbk），存檔位置依賴于電腦的操作系統(tǒng)。Vista: C:UsersPublicPublic DocumentsThermoAutosave (Software Application)XP: C:Documents and Sett

33、ingsAll UsersShared DocumentsThermoNanoDrop2000 Autosave (Software Application)自動(dòng)保存文件包括了24小時(shí)內(nèi)檢測(cè)的所有樣品數(shù)據(jù)，這些數(shù)據(jù)按應(yīng)用和方法自動(dòng)分類。自動(dòng)保存文件并不是用戶可以修改的工作薄。由于數(shù)據(jù)可以附加到用戶定制型的工作薄中，用戶定制的工作薄通常和自動(dòng)保存文件不匹配。如果需要恢復(fù)用戶定制的工作薄中沒有保存的數(shù)據(jù)，使用NanoDrop 2000/2000c軟件打開相關(guān)的自動(dòng)保存文件，選擇感興趣的樣品，導(dǎo)出結(jié)果為Spectra，New Workbook（*.twbk），使用我的數(shù)據(jù)任務(wù)欄來查看新的工作薄。如果

34、自動(dòng)保存的工作薄已經(jīng)打開，在新的檢測(cè)之前必須關(guān)閉工作薄。選項(xiàng)在選擇任務(wù)欄下有絲個(gè)工具欄：l Application添加新的用戶組和相關(guān)的應(yīng)用方法設(shè)定。要添加一個(gè)新的組，輸入組名并點(diǎn)擊Add?？梢园岩粋€(gè)或者多個(gè)應(yīng)用拉到空白鍵中來定制組的顯示內(nèi)容。有兩個(gè)方法可以顯示客戶定制方法而不是標(biāo)準(zhǔn)方法：n 把客戶定制的方法拉到一個(gè)特定的菜單按鍵中。n 把方法列表包括到一個(gè)主菜單選項(xiàng)中。當(dāng)前的方法不會(huì)顯示在選項(xiàng)屏幕中，而回顯示在對(duì)應(yīng)組的主頁中，由于文本框的大小限制，方法列表只能顯示最上面的9個(gè)菜單按鍵。使用Delete group按鍵可以刪除整個(gè)組，使用頁面底部的Clear App Buttons來重新設(shè)定應(yīng)

35、用鍵。l Report Master Page編寫打印報(bào)告的頁眉和頁腳的布局。使用這個(gè)功能，可以選擇頁眉是否包括單位名稱，Logo，日期或者時(shí)間。頁腳選項(xiàng)包括額外文本和頁碼。這些選項(xiàng)可以用來打印所有應(yīng)用和用戶定制方法的報(bào)告。頁面設(shè)定按鍵可以顯示頁面大小和打印邊框的窗口。l Preferences確認(rèn)這些設(shè)定是對(duì)特定的用戶可用還是對(duì)所有用戶可用。選擇Support Dymo Label printer來應(yīng)用獨(dú)立的程序來打印報(bào)告。在這個(gè)標(biāo)簽下，可以選擇快捷鍵，請(qǐng)參考下表的快捷鍵。在動(dòng)力學(xué)方法中，Re-Blank功能鍵被Stop功能鍵所替代。l Account管理那些用戶或者用戶群有權(quán)限更改或者調(diào)整

36、報(bào)告，定義默認(rèn)設(shè)定和修改標(biāo)準(zhǔn)曲線。另外，覆蓋文件或者改變文件保存路徑也是由Account鍵控制。帳戶頁的左側(cè)顯示一系列控制類別的路徑。每個(gè)控制類別包括特定用戶或者用戶組的軟件特征夠可以進(jìn)入?？梢赃M(jìn)入的類別包括：l Allow access to：n Options讓用戶或者組能夠進(jìn)入：應(yīng)用，報(bào)告管理頁面，參數(shù)選擇和帳戶。n Reports能夠讓客戶或者組能夠在報(bào)告屏幕下可以進(jìn)入配置標(biāo)簽和再生鍵。n Editor讓用戶或組能夠刪除用戶編寫的方法，保存動(dòng)力學(xué)方法。n Use Current Settings as default把當(dāng)前的應(yīng)用參數(shù)設(shè)定衛(wèi)為默認(rèn)值。n Overwrite files在已

37、存的工作薄名下保存一個(gè)新的工作薄。l Allow access to Groups：n 用戶可以進(jìn)入，添加，刪除，修改組。要進(jìn)入上面描述的特定的路徑：1. 在左側(cè)突出顯示感興趣的特征，對(duì)每個(gè)小類的路徑都必須分別授權(quán)。2. 使用List names from 和Organization的下拉菜單來選擇特定的用戶和組。3. 點(diǎn)擊Add把用戶或者組移動(dòng)到中間框中。只有那些在中間框中的名稱才能進(jìn)入左邊欄的突出的軟件特征。在默認(rèn)情況下，對(duì)于每個(gè)應(yīng)用用戶組都要添加到允許的路徑中。下拉框和列表框：l List name from顯示可以從中選擇的區(qū)域列表。l Organization顯示選擇區(qū)域中的組織列表

38、。（如果本地區(qū)域被選擇了，就不選擇這個(gè)列表了）l Allow access to授權(quán)給用戶或者組可以使用前面描述的軟件參數(shù)。n 要添加一個(gè)用戶或組到用戶或組列表中，在頁面底部的Select or enter a name區(qū)域輸入一個(gè)有效的用戶名或組名，再點(diǎn)擊Add鍵。n 名稱必須包括區(qū)域名，如果一個(gè)名稱是有效的，就可以出現(xiàn)再授權(quán)列表中。如果如果命名無效，將會(huì)出現(xiàn)一個(gè)警告信息提示您。l User and Groups一個(gè)選擇的區(qū)域中的有效的用戶列表。3應(yīng)用總論使用NanoDrop 2000/2000c分光光度計(jì)可以方便的使用微量樣品進(jìn)行紫外可見分光檢測(cè)。NanoDrop 2000/2000c可以

39、應(yīng)用于如下檢測(cè)：l 不用稀釋可以檢測(cè)濃度小于15000ng/ul（dsDNA）的核酸濃度和純度l 普通的紫外可見分光光度檢測(cè)l 純蛋白濃度檢測(cè)（A280）l Micro array和Protein & Labels應(yīng)用中的熒光染料基團(tuán)檢測(cè)l 擴(kuò)展的光譜檢測(cè)，定量應(yīng)該標(biāo)記蛋白，金屬蛋白l BCA蛋白定量分析l Bradford蛋白定量分析l Lowry法蛋白定量分析l Pierce 660nm蛋白定量分析l 微生物細(xì)胞培養(yǎng)檢測(cè)l 動(dòng)力學(xué)檢測(cè)l 用戶自己編輯檢測(cè)方法快速啟動(dòng)1. 雙擊軟件圖標(biāo)，并在右欄中選擇感興趣的軟件應(yīng)用。n 在進(jìn)行檢測(cè)簽選擇Add to report來把樣品數(shù)據(jù)保存到一

40、個(gè)工作薄中。2 使用合適的緩沖液來建立一個(gè)空白對(duì)照。n 基座模式：取12ul空白液加到底部基座上，放下檢測(cè)臂并點(diǎn)擊Bank。n 比色皿模式（僅僅2000c）：選擇Use Cuvette，按儀器上指示箭頭插入比色皿。檢測(cè)光束（2mm）位置在比色皿底部以上8.5mm，參考比色皿生產(chǎn)廠家的建議來確定需要液體體積。注意：使用比色皿檢測(cè)時(shí)，也需要把檢測(cè)臂放下。在使用基座檢測(cè)時(shí)，建議把比色皿拿出以保證基座臂能放到合適的位置。3 使用干凈無塵紙把基座上的空白液擦干凈，在合適的位置輸入樣品名稱，取1ul樣品進(jìn)行檢測(cè)。注意：每次檢測(cè)的樣品都必須是剛加入的。檢測(cè)后：l 使用干凈的無塵紙擦掉上下基座上的樣品，即可用

41、于下一個(gè)樣品檢測(cè)。l 當(dāng)使用比色皿檢測(cè)時(shí)，拿出比色皿，在做下一個(gè)樣品前清洗干凈并涼干。雖然沒有必要在做每個(gè)樣品之前都做空白對(duì)照，但建議在做一種樣品檢測(cè)30min后做一次空白對(duì)照。30min后，最后一次做的空白對(duì)照的時(shí)間會(huì)顯示在底部狀態(tài)欄上。在NanoDrop 2000的用戶指南的附件上有一個(gè)快速使用指南，其中有空白對(duì)照和樣品檢測(cè)的操作說明。建議把這個(gè)指南打印出來貼在儀器附近作為參考。注意：上面說的染料的檢測(cè)范圍只針對(duì)基座檢測(cè)。核酸總論使用NanoDrop 2000/2000c可以很方便的檢測(cè)核酸的濃度和質(zhì)量。要檢測(cè)核酸在主頁面上選擇Nucleic Acid功能。核酸濃度計(jì)算使用BeerLamb

42、ert定律來進(jìn)行核酸濃度計(jì)算：C核酸濃度，單位ng/mlAAU的吸光值消光系數(shù)，單位ng-cm/mlb光程，單位cm通常情況下核酸的消光系數(shù)為：l 雙鏈DNA：50ng-cm/ull 單鏈DNA：33ng-cm/ull RNA：40ng-cm/ul當(dāng)選擇基座模式，NanoDrop 2000/2000c分光光度計(jì)使用1.0mm到0.05mm的短光程來進(jìn)行檢測(cè)，這樣保證不用稀釋就可以檢測(cè)高濃度樣品。注意：報(bào)告中的吸光值可以象軟件屏中顯示的模式存檔。不論基座檢測(cè)還是比色皿檢測(cè)，核酸檢測(cè)的吸光值被一致化為1cm光程下的讀數(shù)值。NanoDrop 2000/2000c分光光度計(jì)可以準(zhǔn)確檢測(cè)15000ng/

43、ul的雙鏈DNA而不用稀釋。對(duì)每個(gè)樣品，軟件會(huì)自動(dòng)選擇最佳的檢測(cè)光程進(jìn)行檢測(cè)。參考“Measurement Ranges”來獲得詳細(xì)信息。當(dāng)檢測(cè)樣品的吸光值3.0時(shí)（1cm光程下），可以使用較少量的樣品進(jìn)行檢測(cè)。獨(dú)特的屏幕顯示右側(cè)欄顯示核酸檢測(cè)特定的配置，左側(cè)的任務(wù)欄在“Software Overview”中有詳細(xì)描述光譜圖中顯示的數(shù)據(jù)都是一致化為10mm光程下的讀數(shù)。光譜顯示的右欄包括以下內(nèi)容：l Sample ID輸入樣品名稱，在進(jìn)行樣品檢測(cè)時(shí)應(yīng)輸入樣品的名稱。l Type一個(gè)下列菜單來選擇檢測(cè)的核酸類型，選擇DNA-50做dsDNA檢測(cè)，RNA-40做RNA檢測(cè)，ssDNA-33做單鏈D

44、NA檢測(cè)。其他選擇包括，DNA寡核苷酸核RNA寡核苷酸，需要輸入相應(yīng)的吸光系數(shù)?？梢暂斎氲奈庀禂?shù)范圍時(shí)15150。l Conc通過260nm處的吸光值和消光系數(shù)計(jì)算得到的濃度值，濃度單位可以在后面的下拉框中選擇。參考“Nucleic Acid Calculations”中的詳細(xì)信息。l A260顯示10mm光程下的260nm處的吸光值。l A280顯示10mm光程下的280nm處的吸光值。l 260/280260nm和280nm處的吸光值的比值，這個(gè)值用來判定DNA和RNA的純度。純DNA的比值在1.8左右，純RNA的比值在2.0左右。如果這個(gè)比值偏小，表明有蛋白，苯酚或者其他污染物存在，這

45、些物質(zhì)在280nm處有明顯的光吸收。l 260/230260nm和230nm處的吸光值的比值，這是一個(gè)次要的核酸濃度指示值。純核酸的這個(gè)比值比260/280比值大，一般在1.8-2.2之間，如果比值偏低，表示核酸中有污染物。l Baseline correction如果選擇了基線校準(zhǔn)，默認(rèn)的校準(zhǔn)波長(zhǎng)為340nm。用戶可以根據(jù)試驗(yàn)需要輸入不同的校準(zhǔn)波長(zhǎng)。在任何試驗(yàn)下，基線都是自動(dòng)設(shè)定為選擇波長(zhǎng)下的吸光值。所有波長(zhǎng)下的讀數(shù)都要減去這個(gè)值。注意：如果不選擇基線校準(zhǔn)，光譜值將會(huì)產(chǎn)生偏移，計(jì)算的濃度也會(huì)改變。核酸濃度檢測(cè)1 在主菜單中選擇核酸模式，如果顯示波長(zhǎng)校準(zhǔn)窗口，放下基座臂點(diǎn)擊OK。2 選擇檢測(cè)的

46、樣品類型，默認(rèn)的設(shè)定為DNA-50。3 選擇濃度單位，默認(rèn)的為ng/ul。4 默認(rèn)的校準(zhǔn)波長(zhǎng)為340nm，重新選擇一個(gè)校準(zhǔn)波長(zhǎng)或者去選擇Baseline來不選擇校準(zhǔn)波長(zhǎng)。5 選擇Add to Report自動(dòng)把檢測(cè)結(jié)果添加到當(dāng)前報(bào)告中去，默認(rèn)設(shè)置是把每個(gè)樣品都添加到報(bào)告中。要把樣品數(shù)據(jù)保存到工作薄中，在檢測(cè)前必須選上Add to report。6 選擇Overlay spectra可以在同一時(shí)間顯示多個(gè)光譜。7 使用合適的液體建立空白對(duì)照，空白對(duì)照液體是溶解目標(biāo)分子的液體?？瞻讓?duì)照液體的pH值和離子濃度應(yīng)和檢測(cè)樣品一樣。l 基座模式：取1-2ul空白對(duì)照加到基座上，放下檢測(cè)臂，點(diǎn)擊Blank鍵

47、。l 比色皿模式（僅ND2000c）：插入比色皿時(shí)注意儀器上箭頭指示方向。光束（2mm寬）位置再比色皿底部以上8.5nm的位置，請(qǐng)按照比色皿生產(chǎn)廠家的建議加入液體。注意：對(duì)于所有模式檢測(cè)，檢測(cè)臂都必須放下。在做基座檢測(cè)前，要把比色皿拿出來了，這樣可以保證檢測(cè)臂放到正確的位置。2.3.4.5.6.7.8. 在指定的位置輸入樣品名稱，按上面檢測(cè)空白對(duì)照的操作進(jìn)行樣品檢測(cè)。注意：每次檢測(cè)的樣品都必須是新加的。檢測(cè)后l 使用干凈的無塵紙擦干凈上下基座，這樣儀器就可以進(jìn)行下一個(gè)樣品檢測(cè)了。l 當(dāng)使用比色皿時(shí)，取出比色皿，徹底清洗比色皿并晾干。Oligo CalcOligo Calc 用來計(jì)算特定核酸序列

48、的分子量，消光系數(shù)，濃度因子和溶點(diǎn)。選擇這個(gè)任務(wù)欄將顯示兩個(gè)鍵：l Oligo Calc用來輸入感興趣的序列，并選擇合適的樣品類型。l Melting Point顯示DNA序列熔點(diǎn)的結(jié)算結(jié)果。這個(gè)功能鍵僅在DNA序列檢測(cè)時(shí)出現(xiàn)。要使用Oligo Calc：1 使用如下方法來輸入一個(gè)堿基序列：Ø 使用堿基序列顯示框下的按鍵。Ø 鍵盤（僅僅能使用A，C，G，T，和U來輸入堿基）Ø 復(fù)制和粘貼一個(gè)序列到顯示框（僅僅能使用A，C，G，T，和U來輸入堿基）Ø 清除堿基序列框中的序列，點(diǎn)擊序列框右側(cè)的Clear鍵，單個(gè)可以手動(dòng)來刪除。2 選擇磷酸化程度，可以選擇：D

49、NA單磷酸化，RNA單磷酸化和三磷酸化。3 如果需要可以選擇雙鏈，互補(bǔ)的雙鏈序列能夠包括在計(jì)算中。4 在下拉框中，選擇檢測(cè)的核酸類型，默認(rèn)的為DNA。5 如果要添加序列選擇Modification并輸入相關(guān)的分子量。Oligo Calc分析結(jié)果區(qū)域包括：l 分子量顯示堿基序列計(jì)算得到的分子量。l 消光系數(shù)顯示260nm波長(zhǎng)依賴的消光系數(shù)，單位是ng-cm/ml。l 濃度因子基于消光系數(shù)的常數(shù)，用來計(jì)算堿基序列的濃度。l 堿基數(shù)顯示輸入多少個(gè)堿基。l %GC顯示序列中的G/C含量。要計(jì)算DNA序列的熔點(diǎn)：1 按上面說明輸入序列，如果序列已經(jīng)輸入到Oligo Calc Tab中，序列框中將自動(dòng)計(jì)算

50、序列的熔點(diǎn)。2 按下列說明在框中輸入合適的數(shù)值：Ø Oligo Molarity輸入樣品序列的摩爾濃度，默認(rèn)的值為10um，但是可以根據(jù)不同的樣品更改。Ø Cation Molarity輸入樣品的陽離子濃度，默認(rèn)的值為50um，但是可以根據(jù)不同的樣品更改。Ø Formamide輸入樣品中的氨基濃度，默認(rèn)值為0，但是可以根據(jù)不同的樣品更改。熔點(diǎn)分析結(jié)果區(qū)域包括：l Salt Adjusted計(jì)算序列的熔點(diǎn)，不考慮鹽對(duì)相鄰堿基的相互作用影響。l Nearest Neighbor計(jì)算序列的熔點(diǎn)，考慮鹽對(duì)相鄰堿基的相互作用影響。微陣列總論通過這個(gè)功能可以篩選有效的熒光標(biāo)記

51、雜交探針用于芯片試驗(yàn)，這樣避免潛在的不好的探針，可以提高試驗(yàn)效率。NanoDrop 2000/2000c可以檢測(cè)熒光染料的吸收光強(qiáng)度，最低可以檢測(cè)0.2pmol/ul的熒光染料。軟件可以自動(dòng)應(yīng)用相應(yīng)的波長(zhǎng)檢測(cè)樣品的吸光值。檢測(cè)濃度范圍NanoDrop 2000/2000c可以準(zhǔn)確檢測(cè)熒光染料標(biāo)記的核酸濃度達(dá)：100pmol/ul的Cy3以及750ng/ul的DNA。染料/發(fā)色團(tuán)編輯用戶可以在NanoDrop 2000/2000c軟件中選擇預(yù)設(shè)好的染料，也可以使用染料/發(fā)色團(tuán)編輯功能來添加新的染料。要添加一個(gè)新的染料，選擇Show 欄（第一列），這將激活手動(dòng)輸入的區(qū)域，參照染料制造廠家的說明來填

52、寫合適的校準(zhǔn)參數(shù)。當(dāng)合適的染料被選擇了，260nm的校準(zhǔn)將被自動(dòng)應(yīng)用到核酸濃度計(jì)算中。當(dāng)所有參數(shù)填寫好后，保存這些信息。要?jiǎng)h除一個(gè)用戶自定義的染料，點(diǎn)擊左側(cè)（）鍵旁邊的灰色框選擇要?jiǎng)h除的染料，然后點(diǎn)擊鍵盤上的Delete鍵或者使用鼠標(biāo)右鍵來刪除。預(yù)編輯好的那些熒光染料，在編制欄是被鎖定的，不能被刪除。默認(rèn)的設(shè)定是染料1是Cy3，染料2是Cy5。獨(dú)特的屏幕顯示右側(cè)欄顯示Micro Array應(yīng)用獨(dú)特的功能鍵，左側(cè)任務(wù)欄上的功能鍵參考“Software Overview”的描述。光譜顯示了當(dāng)前樣本在1nm光程下的數(shù)據(jù)，光程信息顯示在Y軸。右側(cè)的光譜顯示欄包括下列部分：l Sample ID輸入樣品

53、名稱的區(qū)域。應(yīng)在樣品檢測(cè)前輸入樣品名稱。l Type用戶可以在下拉菜單中選擇檢測(cè)的核酸類型。選項(xiàng)包括：DNA-50用于檢測(cè)DNA，RNA-40用于檢測(cè)RNA，ssDNA-33用于檢測(cè)單鏈DNA，其他選項(xiàng)還有Oligo DNA和Oligo RNA，可以根據(jù)不同的序列使用合適的消光系數(shù)。Custom選項(xiàng)可以輸入消光系數(shù)的范圍是15150。l Conc使用特定的消光系數(shù)和260nm波長(zhǎng)下的吸光值來計(jì)算濃度。濃度單位可以在下拉框中選擇。使用Beer定律來計(jì)算核酸濃度，可以參考“Nucleic Acid Calculations”。l A260顯示校準(zhǔn)到10mm光程下的260nm波長(zhǎng)下的吸光值。注意：顯

54、示的A260值并不同于樣品在260nm下的吸光值（以750nm波長(zhǎng)為參比波長(zhǎng)）。A260值在計(jì)算核酸濃度時(shí)考慮到染料對(duì)吸光值的影響，采用染料校準(zhǔn)因子對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了校準(zhǔn)，吸光值校準(zhǔn)采用選擇的校準(zhǔn)波長(zhǎng)和750nm基線。從而顯示的A260值和用來計(jì)算的核酸濃度的吸光值不一樣。l 260/280260和280nm吸光值的比值。這個(gè)比值用來判定DNA和RNA的純度。對(duì)于DNA來說比值為1.8時(shí)認(rèn)為是純的DNA，對(duì)于RNA來說比值為2.0時(shí)認(rèn)為是純的RNA。如果比值偏低，表明核酸中存在蛋白，酚或其他在280nm 處有吸光的雜質(zhì)。l Dye1（2）：選擇染料，默認(rèn)的選擇是：染料1（Cy3），染料2（Cy5）。Ø Abs每個(gè)染料在1mm光程下的吸光值。Ø pmol/ul基于每個(gè)熒光染料的消光系數(shù)計(jì)算出來的濃度，可以在下拉框中選擇濃度單位。l Analysis correction在計(jì)算濃度前，減去參比波長(zhǎng)下的吸光值。這僅僅影響報(bào)告的核酸濃度，默認(rèn)的參比波長(zhǎng)為340nm