毛細(xì)管區(qū)帶電泳法測(cè)定黃連、黃柏炮制前后小檗堿的含量

1、毛細(xì)管區(qū)帶電泳法測(cè)定黃連、黃柏炮制前后小檗堿的含量    【摘要】  目的： 考察黃連、黃柏藥材炮制前后小檗堿的含量變化。方法： 采用熔融石英毛細(xì)管柱（50 m×72.5 cm，有效長(zhǎng)度64.2 cm）作為分離通道，50 mmol/L Na2HPO4NaH2PO4 （pH=6.7）-甲醇（21）作為緩沖溶液，運(yùn)行電壓30 kV，毛細(xì)管柱溫20 ，檢測(cè)波長(zhǎng)275 nm。結(jié)果： 小檗堿的線性范圍為0.010&#

2、160;8  0.075 6 mg/L,r = 0.999 3，小檗堿在黃連和黃柏中的回收率分別為101.56%、RSD 2.0%和95.6%、RSD 1.32% 。結(jié)論： 毛細(xì)管區(qū)帶電泳法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，重復(fù)性好，黃連、黃柏炮制后小檗堿的含量均有降低?！娟P(guān)鍵詞】  黃連 黃柏 小檗堿 電泳 毛細(xì)管Abstract Objective: To observe content cha

3、nges of berberine in Coptis chinensis Franc and Phellodenron chinense Schneid before and after processing. Method： A fused quartz capillary（50 m×72.5 cm，with effective length 

4、of 64.2 cm）  was used as abstraction tunnelThe running buffer was composed of 50mmol/L Na2HPO4NaH2PO4 （pH=6.7）-methanol（21）The applied voltage was 30kv and the capillary temperatur

5、e was 20The detection wavelength was 275nm. Results： The linear curve for berberine was obtained in the range of 0.010 8  0.075 6 mg/L,r=0.999 3. The recovery o

6、f berberine in Coptis chinensis Franch was 101.56% with RSD of 2.0% and in Phellodenron chinense Schneid was 95.6% with RSD 1.32%. Conclusions： The method is simple, 

7、;accurate and good in reproducibility. The berberine contents in Coptis chinensis Franc and Phellodenron chinense Schneid decrease after processing.Key words Coptis chinensis Franch；Phellode

8、nron chinense Schneid；electrophoresis, capillary中藥材炮制目的主要是改變藥性，降低副作用，擴(kuò)大用藥范圍，而中藥材炮制工藝繁多，飲片生產(chǎn)工藝落后，產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系不完善，現(xiàn)代藥理研究還不夠深入等缺點(diǎn)1。中藥材在炮制過程中往往需要加入某些輔料，炮制之后的藥材會(huì)因輔料中不揮發(fā)的附著物使重量增加。因此，在分析炮制前后藥材中化學(xué)成分時(shí)，這些附著物的重量應(yīng)該被扣除后才能準(zhǔn)確計(jì)算被測(cè)成分的含量變化。黃連和黃柏藥材中的藥效成分小檗堿含量的測(cè)定方法多采用高效液相色譜法2，3或薄層掃描法4，采用高效毛細(xì)管電泳法進(jìn)行測(cè)定的報(bào)道較少。20

9、07年采用高效毛細(xì)管電泳法對(duì)黃連和黃柏炮制前后小檗堿含量進(jìn)行了測(cè)定。1  儀器與試藥    HP3DCE高效毛細(xì)管電泳儀（Agilent公司）DAD檢測(cè)器，Agilent化學(xué)工作站，自動(dòng)進(jìn)樣器； AE-240雙量程分析電子天平（萬分之一和十萬分之一，梅特勒-托利多上海有限公司）。鹽酸、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、氫氧化鈉均為分析純、甲醇（分析純，色譜純）、水為重蒸餾水，鹽酸小檗堿對(duì)照品購自中國藥品生物制品檢定所（批號(hào)07139906）。藥材黃連、黃柏分別購自貴陽同濟(jì)堂藥店和貴陽鼎茂藥行，經(jīng)貴陽中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系生藥學(xué)教研室周漢華副教

10、授鑒定，黃連為毛茛科植物味連Coptis chinensis Franch.的干燥根莖，黃柏為蕓香科植物黃皮樹Phellodenron chinense Schneid.的干燥樹皮。2  方法與結(jié)果2.1  黃連和黃柏的炮制 酒黃連、姜黃連、萸黃連、鹽黃柏分別用生黃連和生黃柏，按2005版中華人民共和國藥典一部規(guī)定進(jìn)行炮制5 。由于經(jīng)過炮制后的藥材重量將會(huì)增加（得率P>100%），因此，炮制品的數(shù)據(jù)均為扣除附著物后計(jì)算的結(jié)果。計(jì)算公式如下：炮制得率： P=W2W1×10

11、0%      W1 ：炮制前干燥至恒重的樣品重量；W2：炮制后干燥至恒重的樣品重量。黃連和黃柏藥材經(jīng)炮制后的得率：酒制黃連116.81%，吳茱萸制黃連109.69%，姜制黃連111.10%，鹽制黃柏101.6%。2.2  供試品溶液的制備 稱取干燥至恒重的各樣品粉末約0.1 g ，置索氏提取器中，加入1001的甲醇-鹽酸約70 ml，水浴加熱回流至提取液無色，收集提取液，以甲醇定容至100 ml，搖勻，即得供試品溶液。2.3  毛細(xì)管

12、電泳條件 采用空心石英毛細(xì)管柱（河北永年光導(dǎo)纖維廠）50 m ×72.5 cm，有效長(zhǎng)度64.2 cm ；DAD檢測(cè)器檢測(cè)波長(zhǎng)275 nm，50 mmol/L的磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉(pH=6.7)-甲醇（21）的溶液作為緩沖溶液，工作電壓30 kV，壓力進(jìn)樣3 kPa×10 s，電解質(zhì)封口1 kPa×5 s，柱溫20 。每次進(jìn)樣前依次用濃度為0.1 mol/L的氫氧化鈉和緩沖溶液分別沖柱5 min。分離效

13、果見圖1。貴陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)  33卷    4期高言明等  毛細(xì)管區(qū)帶電泳法測(cè)定黃連、黃柏炮制前后小檗堿的含量(min)2.4  標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密稱取2.70 mg鹽酸小檗堿對(duì)照品，用甲醇溶解于25 ml容量瓶中，并定容至刻度、搖勻，得濃度為0.108 g/L鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液。分別精密吸取濃度為0.108 g/L的鹽酸小檗堿對(duì)照品0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 ml于7個(gè)5 ml容量瓶中，用甲醇定

14、容至刻度，搖勻后分別精密吸取0.5 ml于7個(gè)樣品小瓶中，按“2.3”項(xiàng)下進(jìn)行電泳測(cè)定。以濃度C為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)，線性回歸方程：A=556.327 C-0.517 6，r =0.999 3。鹽酸小檗堿線性范圍為0.010 8  0.075 6 g/L。2.5  精密度試驗(yàn) 在9個(gè)樣品小瓶中分別精密加入同一濃度的對(duì)照品溶液0.5 ml，用新的樣品小瓶蓋蓋緊，按“2.3“項(xiàng)下分別進(jìn)行測(cè)定，用峰面積計(jì)算精密度，9次測(cè)定結(jié)果RSD=1.72。2.6

15、60; 穩(wěn)定性試驗(yàn) 分別取黃連、黃柏生品提取液各一份，分別在0、2、4、6、8 h測(cè)定小檗堿的峰面積，結(jié)果黃連、黃柏的RSD值分別為1.46%和1.91%。2.7  重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取黃連和黃柏干燥生品粉末樣品各5份，每份約0.1 g，按“2.2”項(xiàng)下進(jìn)行提取，按“2.3”項(xiàng)下進(jìn)行電泳分離測(cè)定。結(jié)果黃連、黃柏樣品中鹽酸小檗堿的平均含量分別為6.22%，RSD = 0.98；2.40%，RSD=2.10。2.8  回收率試驗(yàn)取鹽酸小檗堿平均含量分別為6.22%和2.40%的黃連和黃柏干

16、燥樣品粉末各5份，每份約0.05g，再加入一定量的小檗堿對(duì)照品溶液，按“2.2”項(xiàng)下進(jìn)行提取，按“2.3”項(xiàng)下進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表1。表1  鹽酸小檗堿回收率測(cè)定結(jié)果（略）2.9  樣品中鹽酸小檗堿測(cè)定 稱取各干燥至恒重的樣品粉末約0.1 g，按“2.2”項(xiàng)下進(jìn)行提取，按“2.3”項(xiàng)下進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表2。表2  樣品中鹽酸小檗堿含量測(cè)定結(jié)果（略）3  討論黃連和黃柏藥材經(jīng)炮制后，其中鹽酸小檗堿的含量都有一定程度下降，原因可能是在炮制過程中小檗堿因溫度增加而被分解。因此，如要減少小檗堿的損失，炮制

17、方法和溫度的控制是值得研究的問題6。   高效毛細(xì)管電泳采用外標(biāo)法進(jìn)行定量分析，通常精密度稍差。若采用內(nèi)標(biāo)法，要找到恰當(dāng)?shù)膬?nèi)標(biāo)物往往難度較大。本研究在使用外標(biāo)法的操作過程中進(jìn)行了一定的改進(jìn)，如用塑料樣品小瓶蓋只穿刺進(jìn)樣一次后就不再使用，或精密量取樣品溶液于樣品小瓶中，使各樣品小瓶中的液體樣品體積一致；壓力進(jìn)樣之后電泳之前，需用電泳介質(zhì)封口，經(jīng)上述3項(xiàng)改進(jìn)后，精密度有了明顯改善7。【參考文獻(xiàn)】  1唐永紅，麻春恒，潘忠記.炮制鹽黃柏新工藝參數(shù)優(yōu)選的研究J.廣西醫(yī)藥，2006（9）:1426-1428.2喬喜芹.HPLC測(cè)定黃柏炮制品鹽酸小檗堿質(zhì)量分?jǐn)?shù)J.哈爾濱商業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2006（5） ：18-20.3修彥風(fēng)，徐德生，馮怡，等.不同用量的吳茱萸炮制黃連后