正能量小組QCC成果書(shū)-優(yōu)化鐵皮石斛粉中甘露糖的檢測(cè)方法2016

1、QCC小組成果報(bào)告書(shū)湯臣倍健股份有限公司課題名稱(chēng)：優(yōu)化鐵皮石斛粉中甘露糖的檢測(cè)方法小組名稱(chēng)：正能量小組發(fā) 布 人：葉少文日 期：2016年3月一、前言鐵皮石斛，屬微子目，蘭科多年生附生草本植物。其莖直立，圓柱形，長(zhǎng)9-35厘米，粗2-4毫米，萼片和花瓣黃綠色，近相似，長(zhǎng)圓狀披針形，長(zhǎng)約1.8cm，寬45mm，花期36月。主要分布于中國(guó)安徽、浙江、福建等地。其莖入藥，屬補(bǔ)益藥中的補(bǔ)陰藥，是一種名貴中藥材。鐵皮石斛含有很多功效性多糖，我國(guó)將甘露糖作為鐵皮石斛的功效檢測(cè)指標(biāo)收載在中國(guó)藥典一部（2015版）鐵皮石斛項(xiàng)下。二、小組簡(jiǎn)介小組名稱(chēng)正能量小組成立日期2015年9月課題名稱(chēng)優(yōu)化鐵皮石斛粉中甘露糖

2、的檢測(cè)方法小組人數(shù)3人小組類(lèi)型技術(shù)攻關(guān)出勤率100%活動(dòng)時(shí)間2015年9月-2016年3月小組成員情況姓名性別文化程度職務(wù)組內(nèi)職務(wù)組內(nèi)分工QC培訓(xùn)情況李珍男研究生工程師組 長(zhǎng)組員協(xié)調(diào)、小組策劃、監(jiān)督檢查48蘇昭侖男本科工程師組員資料搜集、工作開(kāi)展、實(shí)際操作48葉少文男本科工程師組 員質(zhì)量檢查、技術(shù)指導(dǎo)48三、QC活動(dòng)計(jì)劃表活動(dòng)階段步驟負(fù)責(zé)人時(shí)間：2015年9月2016年3月9月10月11月12月1月2月3月P選定課題李珍設(shè)定目標(biāo)蘇昭侖確定可行性分析葉少文原因分析全員要因確認(rèn)全員制定對(duì)策葉少文D實(shí)施對(duì)策蘇昭侖C效果檢查李珍A鞏固措施李珍活動(dòng)總結(jié)李珍計(jì)劃： 實(shí)際：四、選擇課題鐵皮石斛中甘露糖的檢測(cè)

3、，按照中國(guó)藥典一部（2015版）鐵皮石斛項(xiàng)下的方法檢測(cè)，單從樣品前處理就至少花費(fèi)7小時(shí)40分鐘的檢測(cè)時(shí)間，整個(gè)項(xiàng)目檢驗(yàn)時(shí)間花費(fèi)10小時(shí)，直接導(dǎo)致檢測(cè)效率不高。為配合實(shí)驗(yàn)室2016年將檢測(cè)效率提高30%的目標(biāo)，將優(yōu)化鐵皮石斛粉中甘露糖的檢測(cè)方法作為一個(gè)指令性技術(shù)攻關(guān)型QCC納入小組課題。五、設(shè)定目標(biāo)：依據(jù)實(shí)驗(yàn)室2016年將項(xiàng)目檢測(cè)效率提高30%的目標(biāo)，設(shè)定目標(biāo)為：優(yōu)化鐵皮石斛粉中甘露糖的檢測(cè)方法，將檢測(cè)效率提高30%。六、確定目標(biāo)可行性首先，對(duì)中國(guó)藥典鐵皮石斛中甘露糖的檢測(cè)方法進(jìn)行整體分析，發(fā)現(xiàn)前處理至少需要耗時(shí)8小時(shí)，一個(gè)批次樣品完成需要10小時(shí)的檢測(cè)時(shí)間。按照效率提高30%的目標(biāo)設(shè)定，整個(gè)流

4、程下來(lái)，一批次樣品檢測(cè)時(shí)間變成7小時(shí)，樣品前處理時(shí)間應(yīng)縮減為3小時(shí)以下。由下表分析，根據(jù)檢測(cè)經(jīng)驗(yàn)綜合分析，樣品前處理加熱回流，煎煮和衍生水解步驟應(yīng)可作簡(jiǎn)化，提高30%檢測(cè)效率目標(biāo)可行。表：中國(guó)藥典一部（2015版）鐵皮石斛中甘露糖的測(cè)定方法校正因子測(cè)定 取鹽酸氨基葡萄糖適量，精密稱(chēng)定，加水制成每1ml含12mg的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。另取甘露糖對(duì)照品約10mg，精密稱(chēng)定，置100ml量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1ml，加水適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，吸取400l，加0.5mo1L的PMP(1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮)甲醇溶液與0.3molL的氫氧化鈉溶液各400l，混勻，70水浴反

5、應(yīng)100分鐘。再加0.3molL的鹽酸溶液500l，混勻，用三氯甲烷洗滌3次，每次2ml，棄去三氯甲烷液，水層離心后，取上清液10l，注入液相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算校正因子。測(cè)定法取本品粉末(過(guò)三號(hào)篩)約0.12g，精密稱(chēng)定，置索氏提取器中，加80乙醇適量，加熱回流提取4小時(shí)，棄去乙醇液，藥渣揮干乙醇，濾紙筒拆開(kāi)置于燒杯中，加水100ml，再精密加入內(nèi)標(biāo)溶液2ml，煎煮1小時(shí)并時(shí)時(shí)攪拌，放冷，加水補(bǔ)至約100ml，混勻，離心，吸取上清液1ml，置安瓿瓶或頂空瓶中，加3.0molL的鹽酸溶液0.5ml，封口，混勻，110水解1小時(shí)，放冷，用3.0molL的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至中性，吸取400l，

6、照校正因子測(cè)定方法，自“加0.5molL的PMP甲醇溶液”起，依法操作，取上清液10l，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。7七、原因分析本課題是提高檢測(cè)效率的指令性目標(biāo)課題,甘露糖的檢測(cè)方法在中國(guó)藥典一部2015版本鐵皮石斛項(xiàng)下的基礎(chǔ)上討論，按攻關(guān)型QCC總結(jié)。 年10月23日,小組全體成員開(kāi)會(huì),運(yùn)用“頭腦風(fēng)暴法”對(duì)該檢測(cè)項(xiàng)目耗時(shí)原因進(jìn)行查找，畫(huà)出因果圖。環(huán)物人對(duì)儀器，耗材擺放位置不熟悉，尋找時(shí)間長(zhǎng)樣品粉碎繁瑣濕度，溫度要求嚴(yán)格樣品前處理方法不熟練優(yōu)化檢測(cè)方法，提高檢測(cè)效率 檢測(cè)耗時(shí)長(zhǎng)（衍生反應(yīng)）70水浴反應(yīng)100分鐘儀器檢測(cè)耗時(shí)長(zhǎng)儀器預(yù)運(yùn)行時(shí)間長(zhǎng)方法繁瑣，前處理不合理索氏提取加熱回流4小時(shí)110水

7、解一小時(shí)機(jī)煎煮一個(gè)小時(shí)法校正因子測(cè)定八、要因確認(rèn)要因確認(rèn)計(jì)劃表序號(hào)要因確認(rèn)內(nèi)容確認(rèn)方法判定標(biāo)準(zhǔn)責(zé)任人完成時(shí)間1樣品前處理方法不熟悉人員是否不熟悉方法前處理方法操作，培訓(xùn)記錄查看是否有培訓(xùn)葉少文2015.11.022樣品粉碎制備繁瑣是否繁瑣實(shí)際操作確認(rèn)是否耗時(shí)超過(guò)10分鐘葉少文2015.11.053濕度，溫度要求嚴(yán)格是否對(duì)溫濕度要求嚴(yán)格條件對(duì)比試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果對(duì)比，偏差分析判定游景水2015.11.194儀器預(yù)運(yùn)行時(shí)間長(zhǎng)是否耗時(shí)長(zhǎng)實(shí)際操作確認(rèn)預(yù)運(yùn)行時(shí)間是否大于半小時(shí)李珍2015.11.195儀器檢測(cè)耗時(shí)長(zhǎng)是否耗時(shí)長(zhǎng)實(shí)際操作確認(rèn)總分析時(shí)間是否超過(guò)2小時(shí)李珍2015.11.196樣品前處理：索氏提取加熱

8、回流4小時(shí)分析步驟是否合理實(shí)際操作確認(rèn)分析步驟實(shí)際意義蘇昭侖2015.11.207樣品前處理：煎煮一小時(shí)分析步驟是否合理實(shí)際操作確認(rèn)分析步驟實(shí)際意義蘇昭侖2015.11.208樣品前處理：110水解一小時(shí)分析步驟是否合理實(shí)際操作確認(rèn)分析步驟實(shí)際意義葉少文2015.11.209樣品前處理：（衍生反應(yīng)）70水浴反應(yīng)100分鐘分析步驟是否合理實(shí)際操作確認(rèn)時(shí)間能否縮減20%以上葉少文2015.11.20要因確認(rèn) 樣品前處理方法不熟悉查詢(xún)方法操作培訓(xùn)記錄，檢測(cè)人員都得到良好的培訓(xùn)，不存在對(duì)前處理不熟悉導(dǎo)致的效率低下情況，此為非要因。要因確認(rèn) 對(duì)儀器，耗材擺放位置不熟悉，尋找時(shí)間長(zhǎng)查詢(xún)檢測(cè)人員個(gè)人檔案，該

9、檢測(cè)項(xiàng)目的檢測(cè)人員工齡均在2年以上，不存在對(duì)儀器，耗材擺放位置不熟悉，尋找時(shí)間長(zhǎng)的情況，此為非要因。要因確認(rèn) 樣品粉碎制備繁瑣 實(shí)際操作當(dāng)中，檢測(cè)人員將鐵皮石斛條分別用手工研磨，粉碎機(jī)粉碎，制成鐵皮石斛粉，操作時(shí)間均不超過(guò)15分鐘，此為非要因。要因確認(rèn) 濕度，溫度要求嚴(yán)格 在不同的溫度濕度下進(jìn)行樣品前處理，檢測(cè)數(shù)據(jù)精密度小于3%，說(shuō)明溫濕度環(huán)境因素對(duì)試驗(yàn)不造成影響，此為非要因。要因確認(rèn) 儀器預(yù)運(yùn)行時(shí)間長(zhǎng) 實(shí)際操作中，儀器預(yù)運(yùn)行時(shí)間不超過(guò)半小時(shí)，此為非要因。要因確認(rèn) 儀器檢測(cè)耗時(shí)長(zhǎng)實(shí)際操作上，儀器分析一個(gè)樣品的運(yùn)行時(shí)間為10分鐘，一批次分析總時(shí)間為80分鐘，不超過(guò)2小時(shí)，此為非要因。要因確認(rèn) 樣

10、品前處理：索氏提取加熱回流4小時(shí) 此步驟是為了去除鐵皮石斛中的游離甘露糖，處理時(shí)間冗長(zhǎng)，操作意義不大，對(duì)檢測(cè)效率卻有很大影響，可以通過(guò)其它處理方式達(dá)到同樣效果，從而節(jié)省時(shí)間，提高效率。此為要因。要因確認(rèn) 樣品前處理：煎煮一小時(shí) 此步驟為提取鐵皮石斛中的甘露多糖，是一個(gè)關(guān)鍵的處理步驟，而處理時(shí)間也長(zhǎng)，可以通過(guò)其它處理方法提高效率，此為要因。 要因確認(rèn)樣品前處理：加入3mol/L鹽酸溶液，110水解一小時(shí)此步驟將提取的鐵皮石斛中甘露多糖水解為單糖（甘露糖），是一個(gè)關(guān)鍵的處理步驟，而處理時(shí)間也長(zhǎng)，可嘗試優(yōu)化條件，提高效率，此為要因。要因確認(rèn) 樣品前處理：（衍生反應(yīng)）70水浴反應(yīng)100分鐘此步驟將甘露

11、糖衍生處理，可以在C18柱有保留，處理時(shí)間為1小時(shí)，衍生過(guò)程使用三氯甲烷處理，可以通過(guò)其它處理方法優(yōu)化，此為要因。 要因確認(rèn) 樣品前處理：校正因子測(cè)定 通過(guò)添加校正因子和不添加校正因子的對(duì)比試驗(yàn)，檢測(cè)結(jié)果數(shù)據(jù)對(duì)比，效值一致，可不添加校正因子，此為非要因。八、制定對(duì)策要因確認(rèn)后，小組成員制定了一系列的對(duì)策、措施及階段性目標(biāo)。序號(hào)要因?qū)Σ吣繕?biāo)措施地點(diǎn)負(fù)責(zé)人完成日期1樣品前處理：索氏提取加熱回流4小時(shí)采用超聲提取代替索氏提取加熱回流使處理時(shí)間縮短為0.5小時(shí)超聲提取2小時(shí)，1小時(shí)，0.5小時(shí)，試驗(yàn)對(duì)比對(duì)比效果樣品處理室葉少文2015.12.012樣品前處理：煎煮1小時(shí)采用微波提取替代煎煮方式使處理時(shí)

12、間縮短為5分鐘微波提取30分鐘，20分鐘，5分鐘，作試驗(yàn)對(duì)比效果樣品處理室葉少文2015.12.023樣品前處理：加入3mol/L鹽酸溶液，110水解一小時(shí)提高溫度，縮短水解時(shí)間使處理時(shí)間縮短為30鐘120，水解處理60min,50min,40min作試驗(yàn)對(duì)比效果樣品處理室葉少文2015.12.034樣品前處理：（衍生反應(yīng)）70水浴反應(yīng)100分鐘采用其他分析體系取代衍生處理不使用高毒試劑三氯甲烷，且后程試驗(yàn)時(shí)間不增加采用鈣型糖柱體系分析測(cè)試精密儀器室一葉少文2015.12.05九、實(shí)施對(duì)策實(shí)施（一）采用超聲提取代替索氏提取加熱回流 試驗(yàn)條件實(shí)驗(yàn)結(jié)果（%）結(jié)論超聲功率40kw,超聲時(shí)間2小時(shí)22

13、.16,22.34與原方法效值一致超聲功率40kw,超聲時(shí)間1小時(shí)22.24,22.46與原方法效值一致超聲功率40kw,超聲時(shí)間0.5小時(shí)22.36,22.55與原方法效值一致藥典方法（索氏提取加熱回流4h）22.23,22.41小結(jié)：選擇效率最優(yōu)步驟：超聲功率40kw,超聲時(shí)間0.5小時(shí)實(shí)施（二）樣品前處理：微波提取代替煎煮1小時(shí) 試驗(yàn)條件實(shí)驗(yàn)結(jié)果（%）結(jié)論微波提取30分鐘22.52,22.83與原方法效值一致微波提取20分鐘22.46,22.71與原方法效值一致微波提取5分鐘22.37,22.31與原方法效值一致藥典方法（煎煮1小時(shí)）22.28,22.91小結(jié)：選擇效率最優(yōu)步驟：微波提取

14、5分鐘實(shí)施（三）優(yōu)化樣品前處理步驟（加入3mol/L鹽酸溶液，110水解一小時(shí)） 試驗(yàn)條件實(shí)驗(yàn)結(jié)果（%）結(jié)論120水解60分鐘22.75,22.63與原方法效值一致120水解50分鐘22.44,22.37與原方法效值一致120水解40分鐘22.13,22.47與原方法效值一致藥典方法（110水解60分鐘）22.22,22.14小結(jié)：選擇效率最優(yōu)步驟：120水解40分鐘實(shí)施（四）取代樣品前處理：（衍生反應(yīng)）70水浴反應(yīng)100分鐘此步驟是為了生成甘露糖衍生物，從而在C18色譜柱中保留（不衍生無(wú)法在C18色譜柱中保留，從而無(wú)法進(jìn)行檢測(cè)）。樣品衍生處理需要100分鐘的反應(yīng)時(shí)間，其次衍生后需要用三氯甲烷

15、（高毒試劑）洗滌樣品。因此，小組經(jīng)過(guò)討論，制定出一個(gè)不需要衍生，不需要用三氯甲烷洗滌樣品的方法處理步驟。儀器分析體系變化：鈣型糖柱（8%交聯(lián)度，填料聚苯乙烯-二乙烯苯）體系：（流動(dòng)相：純化水，示差折射光檢測(cè)器）C18色譜柱體系：（流動(dòng)相為乙腈:0.02mol/L乙酸銨=20:80，紫外檢測(cè)器：波長(zhǎng)250nm） 試驗(yàn)對(duì)比實(shí)驗(yàn)結(jié)果（%）結(jié)論鈣型糖柱體系22.78 ,22.49與原方法效值一致原方法（C18色譜柱體系）22.75, 22.67 變化前：衍生反應(yīng)處理100分鐘，上機(jī)分析需要50分鐘，總共需要150分鐘。 變化后：無(wú)需衍生，上機(jī)分析需要210分鐘。小 結(jié)：變化后，無(wú)需使用高毒試劑三氯甲烷，但檢驗(yàn)時(shí)間比改變前增加了40分鐘，綜合考慮，由于改變體系后檢測(cè)步驟簡(jiǎn)化，耗能相對(duì)減少，權(quán)重考慮，選擇了變化后的方法步驟。十、效果檢查1、 目標(biāo)檢查經(jīng)過(guò)方法優(yōu)化后，QC活動(dòng)達(dá)到以下目標(biāo)：檢測(cè)時(shí)間為285分鐘，原方法檢測(cè)時(shí)間為610分鐘，優(yōu)化后方法效率提高46%，無(wú)需使用高毒試劑三氯甲烷，達(dá)到實(shí)驗(yàn)室2016提高檢驗(yàn)效率30%目標(biāo)。2、其它收獲：小組人員素質(zhì)在過(guò)程中得到進(jìn)一步提高。評(píng)價(jià)項(xiàng)目QC知識(shí)質(zhì)量意識(shí)創(chuàng)新意識(shí)團(tuán)隊(duì)意識(shí)分析能力平均得分活動(dòng)前得分687169726869活動(dòng)后得分828486838884十一、制定鞏固措施1、鞏固