HPLCRID法測(cè)定氨基葡萄糖鹽酸鹽的含量_圖文

1、海峽藥學(xué)2011年第23卷第2期2.4.2精密度試驗(yàn):取同一對(duì)照品溶液。重復(fù)進(jìn)樣6次,按 “2.1色譜條件”項(xiàng)下進(jìn)樣測(cè)定,測(cè)定得峰面積,求得磺胺甲嘌 唑RSD為0.59%.甲氧芐啶RSD為0.44%.說明本方法精密 度良好。2.4.3穩(wěn)定性試驗(yàn):對(duì)同一供試品溶液(批號(hào):091003,每隔 2h測(cè)定1次。共測(cè)定6次。測(cè)定得峰面積.求得磺胺甲嚼唑 RSD=0.55%;甲氧芐啶RSD=0.86%,說明供試品溶液中磺 胺甲嗯唑及甲氧芐啶在10h內(nèi)穩(wěn)定。2.4.4重復(fù)性試驗(yàn):取同一批樣品(批號(hào):091003。按“2.1色譜條件”項(xiàng)下平行測(cè)定6份,結(jié)果磺胺甲嗯唑RSD= 0.75%;甲氧芐啶RSD=0.5

2、4%。測(cè)定方法的重復(fù)性較好。 2.4.5加樣回收率試驗(yàn):按照處方比例配制樣品,其中兩種 對(duì)照品加入量分別為標(biāo)示量的80%,100%,120%,按照樣品 含量測(cè)定方法測(cè)定.分別計(jì)算回收率。結(jié)果(見表1。表1加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=3l2.5樣品測(cè)定 取本品3份.按上述供試品制備法制備。分 別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20肚L,注入液相色譜 儀,按“2.1色譜條件”項(xiàng)下測(cè)定.記錄峰面積,以外標(biāo)法計(jì)算 各組分的含量.結(jié)果(見表2。表2樣品含量測(cè)定結(jié)果標(biāo)示含量%.n=3J3討論.3.1檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇取磺胺甲嗯唑?qū)φ掌泛图籽跗S啶對(duì) 照品分別進(jìn)行紫外掃描.結(jié)果磺胺甲嗯唑在264nm處有最大 吸收,但

3、在此波長(zhǎng)處甲氧芐啶幾乎沒有吸收;而在240nm波 長(zhǎng)處2者吸光度接近,故選擇240nm作為檢測(cè)波長(zhǎng),以提高 測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確度。3.2流動(dòng)相的選擇 曾比較不同的流動(dòng)相:磷酸鹽緩沖液. 乙腈(75:25;磷酸鹽緩沖液一甲醇(75:25;水一乙腈一三乙胺 (800:200:1等?？紤]到分離效果和時(shí)間等因素。選用了水. 乙腈.三乙胺(800:200:1。參考文獻(xiàn)【l】鐘新偉.HPLC同時(shí)測(cè)定復(fù)方磺胺甲嗯唑片的兩個(gè)主藥含量J】. 中國(guó)醫(yī)藥指南.2008.10(6:86.87.【2】萬慶.程芷。王劍.RP。HPLC法測(cè)定小兒復(fù)方磺胺甲口惡唑顆粒的 含量J.安徽醫(yī)藥.2005.9(9:668.669.【3農(nóng)

4、毅滑,蔣林,莫海玲.HPLC法測(cè)定復(fù)方磺胺甲口惡唑糖漿中磺胺 甲口惡唑及甲氧芐啶的含量J】.中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用.2008.4(2:1-3.HPLCRID法測(cè)定氨基葡萄糖鹽酸鹽的含量李 俊(浙江臺(tái)州市食品藥品檢驗(yàn)所臺(tái)州318000摘要:目的建立高效液相色譜.示差折光檢測(cè)法測(cè)定氨基葡萄糖鹽酸鹽的含量。方法采用高效液相色譜法,色譜柱為Bondapak c。8柱(3.9×300ram,lOp.m,流動(dòng)相為0.005toolL.1庚烷磺酸鈉溶液(pH4.O.乙腈(97:3,流適:2.0mLmin,柱溫25。C。示差折光檢測(cè)器池溫度40 Co結(jié)果本法精密度高,穩(wěn)定性好,氨基葡萄糖鹽酸鹽在0.998

5、7.497mgmL-1的濃度范圓內(nèi)具有良好的線性關(guān)系(r=0.9999。平均加樣 回收率為99.4%。RSD=1.2%(n=9。結(jié)論 表方法簡(jiǎn)便。準(zhǔn)確.重現(xiàn)性好?？勺鳛樵撍幤返暮繙y(cè)定方法。關(guān)鍵t司:HPLC;示差折光檢測(cè)器;氨基葡萄糖鹽酸鹽;含量測(cè)定中圖分類號(hào):R927.2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:B文章編號(hào):1006376512011.02,004203Determination of glucosamine hydrochloride by RIDHPLCLI Jun(Taizhou institute for food and drug control,Taizhou 318000,China作者簡(jiǎn)

6、介:李俊,男(1979.12一。職稱:主管藥師,從事藥品檢驗(yàn)及藥物分析研究工作。聯(lián)系電話:057688552715。42ABSTRAOT:OBJECTIVE An RID.HPI。C method was established tO determine the content of glucosamine hy.drochloride.METHODS Using a HPI,C method with Bondapak Cls column(3.9x 300mm,lOt.tm,the mobilephase was0.005mdL-11一heptanesulfonic acid sodium

7、 salt solution(pH 4.0aeetonitrile(97:3,the flow rate was 2.Oml。min一.acolumn temperature was 25and the cell temperature of Refractive Index Detector was 40.RESULTS Precision and stability of the method were fine.The standard curve was linear in the range of 0.9987.497mgmI。1(r=0.9999,and the average r

8、ecovery was 99.4%with RSD of 1.2%.CONCLUSION The method was simple,accurate and reproducible,and can be used for the method of determination.KEY WORDS:HPLC;Refractive Index Detector;91ucosamiae hydrochloride;determination基質(zhì)中合成蛋白聚糖所必需的重要成分,參與構(gòu)造人體組織和細(xì)胞膜,是蛋白多糖大分子合成的中間物質(zhì)【1J。它具有特殊的生理活性,可直接抗炎.緩解骨性關(guān)節(jié)炎的疼痛癥狀

9、,改善關(guān)節(jié)功能,在北美和歐洲被用于食品添加劑和藥品【2.3】,因此近年來越來越受到重視,相關(guān)的研究也日益增多。本文首次建立了HPLC-RID法測(cè)定氨基葡萄糖鹽酸鹽 的含量,該方法簡(jiǎn)便.結(jié)果準(zhǔn)確可靠,可用于氨基葡萄糖鹽酸 鹽的質(zhì)量控制。1儀器及材料1.1實(shí)驗(yàn)儀器Waters 2695Alliance高效液相色譜儀,包括 柱溫箱、在線真空脫氣機(jī)、2414示差折光檢測(cè)器以及Empow. er色譜工作站(美國(guó)Waters公司,BP221S型電子天平(德國(guó) Satorius公司,萬分之一。1.2藥品與試劑氨基葡萄糖鹽酸鹽(浙江澳興生物科技有 限公司,批號(hào)20080417、20080418、2008041

10、9;氨基葡萄糖鹽 酸鹽對(duì)照品(Sigma公司,批號(hào)047K0129,N一乙酰氨基葡萄 糖對(duì)照品(FLUKA公司,批號(hào)1323294;乙腈、庚烷磺酸鈉、 冰乙酸均為色譜純。乙酸鈉為分析純,水為重蒸餾水。2方法與結(jié)果2.1色譜條件 色譜柱:Bondapak C18柱(3.9X 300mm, lOum;以0.005molL1庚烷磺酸鈉溶液(稱取庚烷磺酸鈉 和乙酸鈉適量加水配制成濃度分別為0.005molL-1和0.01 molL-1的溶液,用冰醋酸調(diào)pH至4.0±0.05一乙腈(97:3 為流動(dòng)相;流速:2.0mLmin_1;柱溫25。C,檢測(cè)器池溫度40。 C。進(jìn)樣量lOlL。2.2測(cè)定

11、方法 精密稱取氨基葡萄糖鹽酸鹽約250nag,置 50mL量瓶中。加3%的乙腈溶液30mL,超聲2min使完全溶 解,放置至室溫,稀釋至刻度搖勻。精密世取IO#L照2.1項(xiàng) 下的色譜條件進(jìn)樣到液相色譜儀中,記錄色譜圖;另取氨基葡 萄糖鹽酸鹽對(duì)照品約250mg同法配制成對(duì)照品溶液。同法測(cè) 定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量。2.4系統(tǒng)適用性在上述色譜條件下。D氨基葡萄糖鹽酸鹽 峰的理論板數(shù)為3639.與相鄰的峰(系統(tǒng)峰的分離度為 6.82;空白及N.乙酰氨基葡萄糖峰均不干擾n氨基葡萄糖鹽 酸鹽峰(見圖1-4。取對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6針.記錄色譜圖,計(jì)算峰面積的 相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.5%。說明方法的系統(tǒng)適用

12、性較好。圈1空白溶液色譜圖囝2對(duì)照品溶液色譜圖圖4供試品溶液色譜圖2.5檢出限與定量限取對(duì)照品溶液逐級(jí)稀釋當(dāng)色譜峰的 S/N約等于3h.對(duì)照品溶液的檢測(cè)限濃度為0.02mgmL一1最低檢出量0.2旭。同法取對(duì)照品溶液逐級(jí)稀釋當(dāng)色譜峰的S/N約10時(shí). 對(duì)照品溶液的定量限濃度為0.08ragmL一1取該濃度溶液進(jìn) 樣6次.相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.8%。2.6線性范圍 精密稱取n氨基葡萄糖鹽酸鹽對(duì)照品 43海峽藥學(xué)2011年第23卷第2期49.9、125.2、201.1、249.4、301.0、374.8mg分別置50mL量 瓶中,加3%的乙腈溶液30mL。超聲2min使完全溶解,放置 至室溫,稀釋至刻

13、度搖勻,得到6個(gè)濃度的溶液,按2.1的色 譜條件分別進(jìn)樣10vL,記錄色譜圖,以峰面積A對(duì)濃度C(mg mL_1作線性回歸,結(jié)果:在0.9987.497mgmL。1的濃度 范圍內(nèi),測(cè)定的峰面積與D氨基葡萄糖鹽酸的濃度呈良好的 線性關(guān)系。線性方程為:A=21969.329C+155.313,r= 0.9999。2.7回收率試驗(yàn)精密稱取適量的D氨基葡萄糖鹽酸鹽供 試品(批號(hào)200804179份。各約125mg,置50mL量瓶中。分 別加入D.氨基葡萄糖鹽酸鹽對(duì)照品約25、125、225mg各3份,按2.2項(xiàng)下的方法配制得到9份回收率測(cè)試溶液,按上述 方法進(jìn)樣測(cè)定,計(jì)算氨基葡萄糖鹽酸的回收率,結(jié)果平

14、均回收 率為99.4%.相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.2%。2.8精密度試驗(yàn) 取n氨基葡萄糖鹽酸供試品(批號(hào) 20080417按2.2項(xiàng)下的方法分別配制6份供試品溶液。然后 分別進(jìn)樣測(cè)定,以外標(biāo)法計(jì)算:D氨基葡萄糖鹽酸含量為 99.16%、99.69%、99.70%、98.38%、99.65%、99.75%.相對(duì) 標(biāo)準(zhǔn)偏差為O.5%。2.9穩(wěn)定性試驗(yàn) 取D一氨基葡萄糖鹽酸鹽供試品(批號(hào) 20080417按2.2項(xiàng)下的方法配制1份供試品溶液,分別間隔 O、l、2、4.6、8、10、12h后進(jìn)樣測(cè)定。計(jì)算氨基葡萄糖鹽酸鹽峰 面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差.結(jié)果分別為O.7%。表1樣品含量測(cè)定結(jié)果2.10樣品測(cè)定取D氨基葡

15、萄糖鹽酸鹽供試品3批,按按 2.2項(xiàng)下的方法各配制兩份,在上述色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定。計(jì) 算氨基葡萄糖鹽酸鹽的含量,結(jié)果(見表1。3討論由于氨基葡萄糖鹽酸鹽的極性比較強(qiáng),在C18柱上不易 保留,本實(shí)驗(yàn)采用反相離子對(duì)色譜法,在流動(dòng)相中加人了離子 對(duì)試劑庚烷磺酸鈉,使氮基葡萄糖鹽酸鹽的保留時(shí)問延長(zhǎng)。 與紫外可見吸收檢測(cè)器(UVD相比,示差折光檢測(cè)器(RID 的靈敏度較低,但氨基葡萄糖鹽酸鹽無發(fā)色團(tuán),在紫外區(qū)內(nèi)無 特征吸收峰。因此選擇了示差折光檢測(cè)器檢測(cè)氨基葡萄糖鹽 酸鹽。氨基葡萄糖常用的測(cè)定方法有比色法(45和I-IPLC 法(6-8?，F(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)均采用的比色法,專屬性和重現(xiàn)性均 較差,而美國(guó)藥典采用

16、的HPLC-UVD法的可靠性和重現(xiàn)性值 得懷疑【9J。在不苛求靈敏度的情況下,本方法作為氨基葡萄 糖鹽酸鹽的含量測(cè)定法,具有方法簡(jiǎn)便、不需要衍生化,結(jié)果 準(zhǔn)確可靠的優(yōu)點(diǎn),可作為該藥品的質(zhì)量控制方法。參考文獻(xiàn)【1Anderson JW。Nicolosi RJ。Borzelleca JF.Glucosamine effects in hu. malls:a review of effects Oil glucose metabolism.side effects.safety considerations and efficacyU.Food and Chemical Toxicology,200

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