基于ISSR標記的扁玉螺_Neveritadidyma_自然

1、第28卷第11期2008年11月生態(tài)學報ACT A ECOLOGI CA SI N I CAVol .28,No .11Nov .,2008基金項目:山東省自然科學基金資助項目(Y200D12收稿日期:2008204202;修訂日期:2008207221作者簡介:孫始威(1982,女,山東青島人,碩士生,主要從事海洋動物遺傳學研究.E 2mail:311master 3通訊作者Corres ponding author .E 2mail:sunzxpublic .yt p tt .sd .cnFounda ti on ite m :The p r oject was financially s

2、upported by Natural Science Foundati on of Shandong Pr ovince (No .Y200D12Rece i ved da te:2008204202;Accepted da te:2008207221B i ography:S UN Shi 2W ei,Master candidate,mainly engaged in marine ani m al genetics .E 2mail:311master基于I SSR 標記的扁玉螺(N everita didy m a 自然居群遺傳結構孫始威,孫振興3,葛宜和,閆冬春,黃清榮(魯東大學生

3、命科學學院,煙臺264025摘要:利用I SSR 分子標記技術,對采自大連(DL 、煙臺(YT 及青島(QD 近海的扁玉螺3個自然居群的遺傳結構和遺傳多樣性進行了分析。用13個引物對90只個體進行了PCR 擴增,共檢測到161個位點,3個居群的多態(tài)位點比例為74.53%85109%,各居群遺傳多樣性水平的高低依次為YT >QD >DL 。扁玉螺在物種水平上的Nei s 基因多樣性指數(shù)和Shannon s 信息指數(shù)分別為0.3395和0.5113,在居群水平上分別為0.2811和0.4189,顯示出扁玉螺有著較高的遺傳多樣性。AMOVA 分子變異分析表明,扁玉螺的遺傳變異有27.16

4、%發(fā)生在居群間,72.84%發(fā)生在居群內,居群內的遺傳變異大于居群間的遺傳變異。扁玉螺3個居群間的遺傳分化系數(shù)(Gst 為0.1720,基因流(Nm 為2.4063,Nei s 遺傳距離平均值為0.1228,表明扁玉螺居群間雖然存在著一定程度的遺傳分化,但仍屬于種內正常分化的范疇。上述結果為保護和利用扁玉螺資源提供了科學依據(jù)。關鍵詞:扁玉螺;遺傳結構;I SSR文章編號:100020933(20081125499207中圖分類號:Q145文獻標識碼:AGeneti c structure of na tura l popul a ti on of N everita didy m a ba s

5、ed on I SSR markersS UN Shi 2W ei,S UN Zhen 2Xing 3,GE Yi 2He,Y AN Dong 2Chun,HUANG Q ing 2RongCollege of L ife Science,Ludong U niversity,Yantai 264025,China A cta Ecologica S in ica,2008,28(11:54995505.Abstract:The genetic structure and genetic diversity in three natural populations of N everita d

6、idym a were analyzed by using the molecular marker technique of inter si mp le sequence repeat (ISSR .The samp les of the three populations were taken from the offshores of Dalian (DL ,Yantai (YT and Q ingdao (QD ,res pectively .A total of 161l oci from 90individuals were poly merase 2chain 2reactio

7、n (PCR amp lified with 13p ri m ers .The p roportion of poly mor phic l oci in the threepopulations ranged fr om 74.53%t o 85.09%.The abundance of genetic diversity in the three populations arranged in a decent order was YT >QD >DL.The Nei s gene diversity and Shannon s infor mati on index of

8、N everita didym a was 013395and 0.5113at species level,0.2811and 0.4189at population level,res pectively,showing that the genetic diversity of N everita didym a was relatively high .An analysis of the molecular variance (AMOVA demonstrated that the among 2populati on component accounted for 27.16%of

9、 the t otal variation,while the within 2population component accounted for 72.84%.The within 2population genetic variati on was apparently larger than the among 2population .The genetic differentiati on coefficient (Gst ,gene flow (Nm and the average Nei s genetic distance were 0.1720,2.4063and01122

10、8,respectively among the three populati ons.The results indicate that although there is genetic differentiati on of s ome extent among the three populations of N everita didym a,such differentiation is well contained in the context of nor mal differentiation within the s pecies.The results have laid

11、 the scientific basis for the conservati on and utilizati on of the N everita didym a res ources.Key W ords:N everita didym a;genetic structure;ISSR物種的遺傳結構和遺傳多樣性是一個物種的重要特征,遺傳結構的空間分布與物種的繁育機制以及自然選擇效應密切相關,遺傳多樣性則反映一個物種適應環(huán)境的能力和對環(huán)境變遷持續(xù)進化的潛力1。因此,研究物種的遺傳多樣性和遺傳結構,對生物資源的合理開發(fā)利用和種質保護,有著重要的意義。簡單重復序列區(qū)間(inter si m

12、 p le sequence repeat,I SSR是一種新型分子標記技術,它以模板DNA用量少、多態(tài)性豐富、穩(wěn)定性好等特點2,被廣泛用于各種經濟動植物的群體遺傳學研究。扁玉螺(N everita didym a Roding屬于腹足綱、前鰓亞綱,分布于我國南北方沿海及朝鮮半島、日本和東南亞海域,是一種中型食用貝類,其肉味鮮美、營養(yǎng)豐富,有一定的經濟價值。但近年來扁玉螺的資源量日趨減少,已成為貝類增養(yǎng)殖潛在的開發(fā)對象。利用I SSR方法研究海洋經濟動物,已有一些魚類36和雙殼貝類78等方面的報道,迄今國內外尚未見有關扁玉螺群體遺傳學的研究報道。本文以我國北方沿海的扁玉螺為對象,利用I SSR

13、分子標記技術,探討了扁玉螺不同地理居群的遺傳結構和遺傳多樣性差異,以期為扁玉螺種質資源的保護和利用提供基礎資料。1材料與方法1.1材料實驗材料分別采自遼寧大連、山東煙臺及青島近海的3個自然居群,扁玉螺活體運回實驗室后,解剖取足肌,放入-74超低溫冰箱中保存;每個居群各隨機取30個樣品,共90個樣品(表1。表1扁玉螺居群的地理位置及采樣數(shù)目Table1L oca ti on s of N everita didy m a popul a ti on s and the nu m bers of i n d i v i dua ls s am pled居群名稱Na me of populati o

14、n 樣品采集地Sa mp led area經度/緯度Longitude/Latitude取樣個體數(shù)No.of individuals大連DL遼寧大連近海Offshore of Dalian,L iaoning E121°38/N38°5430煙臺YT山東煙臺近海Offshore of Yantai,Shandong E121°20/N37°3330青島QD山東青島近海Offshore of Q ingdao,Shandong E120°19/N36°04301.2基因組DNA提取采用常規(guī)的蛋白酶K消化和酚2氯仿抽提法9提取基因組DNA

15、,用0.7%瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度法檢測DNA純度,-20保存?zhèn)溆谩?.3I SSR引物篩選和PCR擴增I SSR引物是根據(jù)加拿大哥倫比亞大學公布的序列(htt p:/www.bi otech.ubc.ca/services/nap s/p ri m ers,由上海生工生物工程技術服務有限公司合成。PCR擴增在PE29600型PCR儀上進行。反應總體積為25l,經優(yōu)化的反應體系包括10×buffer,2.0m mol/L的Mg2+,0.25m mol/L的dNTP,0.8U的Taq DNA聚合酶,0.2mol/L的I SSR引物,20ng模板DNA。PCR反應程序為94預變性5

16、m in,94變性45s,52退火45s,72延伸90s,45個循環(huán)后,72延伸10 m in,4保存。利用優(yōu)化后的反應體系,從30個I SSR引物中篩選出了13個重復性好、特異性高的引物用于I SSR2PCR反應(表2。0055生態(tài)學報28卷表2用于I SSR 分析的13個引物序列Table 2Sequences of 13pr i m ers used i n I SSR ana lysis引物編號Pri m er code引物序列(523Pri m er sequence 引物編號Pri m er code引物序列(523Pri m er sequence UBC 811(G A 8C

17、UBC 835(AG 8YC UBC 812(G A 8A UBC 836(AG 8Y A UBC 813(CT 8T UBC 840(G A 8YT UBC 814(CT 8A UBC 856(AC 8Y A UBC 815(CT 8G UBC 857(AC 8YG UBC 825(AC 8T UBC 873(G ACA 4UBC 834(AG 8YT1.4擴增產物的電泳檢測與條帶記錄PCR 擴增產物以2002000bp 的標準分子量(DNA Ladder Marker,北京鼎國公司產作為參照,陰性對照加入除模板DNA 以外的其它各成分,用雙蒸水代替模板DNA 。以1.2%的瓊脂糖凝膠進行電

18、泳檢測(膠中含終濃度為1g /m l 的溴化乙錠,電泳后在凝膠成像系統(tǒng)下觀察并拍照。由同一引物擴增的電泳遷移率一致的條帶作為同一位點,記錄清晰穩(wěn)定的電泳條帶,按條帶的有無分別記為“1”和“0”,構成I SSR 表型數(shù)據(jù)矩陣。1.5數(shù)據(jù)分析用P OPGENE (VERSI O N 1.32軟件10對I SSR 表型數(shù)據(jù)矩陣進行遺傳參數(shù)分析,分別計算:多態(tài)位點比例(p r oporti on of poly mor phic l oci,PPB 、觀測等位基因數(shù)(observed number of alleles,N a 、有效等位基因數(shù)(effective nu mber of alleles

19、,N e 、Nei s 基因多樣性指數(shù)(Nei s gene diversity,h 、Shannon s 信息指數(shù)(Shannon s inf or mati on index,I 、居群間的遺傳分化系數(shù)(coefficient of genetic differentiati on,Gst 、基因流(gene fl ow,Nm 、遺傳相似度(genetic si m ilarity,S 和遺傳距離(genetic distance,D 。利用Shannon s 信息指數(shù),按照W achira 等11的公式,分別計算基于各引物擴增位點在居群(Hpop 和物種水平的遺傳多態(tài)度(Hsp ,并根據(jù)

20、Hpop /Hsp 和(Hsp -Hpop /Hsp 分別計算居群內和居群間遺傳變異所占的比例:Ho =-1NX i ln X i式中,Ho 為各居群的遺傳多態(tài)度,X i 為位點i 在某一居群中出現(xiàn)的頻率,N 為在該居群中檢測到的位點總數(shù)。Hpop =1nHo 式中,Hpop 為居群內遺傳多態(tài)度,n 為所研究的居群數(shù)。Hsp =-1NX ln X式中,Hsp 為居群總的遺傳多態(tài)度,X 為n 個居群的綜合表型頻率。以DCF A (VERSI O N 1.1軟件計算Euclidean 距離平方12,利用W I N AMOVA (VERSI O N 1.55軟件對居群間和居群內的遺傳變異進行分子變異

21、分析(analysis of molecular variance,AMOVA 13。2結果2.1扁玉螺居群的遺傳多樣性13個I SSR 引物對扁玉螺3個居群的90只個體共擴增出161個位點,平均每個引物記錄12.4個位點,擴增產物的分子量大多在2001600bp 之間(圖1。3個居群的多態(tài)位點比例、觀測等位基因數(shù)、有效等位基因數(shù)、Nei s 基因多樣性指數(shù)和Shannon s 信息指數(shù)如表3所示。從表3可以看出,煙臺居群的多態(tài)位點比例最高、為85.09%,雖然大連居群和青島居群的多態(tài)位點比例相同,但根據(jù)Nei s 基因多樣性指數(shù)(h 和105511期孫始威等:基于I SSR 標記的扁玉螺(N

22、 everita didym a 自然居群遺傳結構Shannon s 信息指數(shù)(I 來看,二者的大小趨勢相同,即各居群遺傳多樣性水平的高低依次為YT >QD >DL 。表3扁玉螺3個居群的遺傳多樣性Table 3The geneti c d i versity w ith i n three popul a ti on s of N everita didy m a居群名稱Populati on na me多態(tài)位點數(shù)Number ofpoly mor phic l oci多態(tài)位點比例PPB (%觀測等位基因數(shù)N a有效等位基因數(shù)N eNei s 基因多樣性指數(shù)hShannon s信

23、息指數(shù)I大連DL 12074.53 1.7453±0.4370 1.4280±0.35530.2546±0.18590.3836±0.2619煙臺YT 13785.09 1.8509±0.3573 1.5434±0.34960.3134±0.17500.4642±0.2393青島QD12074.531.7453±0.43701.4734±0.36480.2753±0.19000.4088±0.26733PPB :Pr oporti on of poly mor phic l

24、oci;N a :Observed number of alleles;N e :Effective number of alleles;h :Nei s gene diversity;I :Shannon sinf or mati on index圖1引物UBC835對DL 、QD 和YT 居群擴增的電泳圖譜Fig .1Electr ophoret ogra m of PCR p r oduct fr om populati on DL,YTand QD by p ri m er UBC835Nei s 基因多樣性指數(shù)(h 和Shannon s 信息指數(shù)(I 在居群水平上分別為0.2811和

25、0.4189,在物種水平上分別為0.3395和0.5113,顯示出扁玉螺居群擁有較高的遺傳多樣性水平,物種水平的遺傳多樣性高于居群水平。從Shannon s 信息指數(shù)(I 在扁玉螺居群中的分布情況看,物種水平的遺傳多態(tài)度(Hsp 為0.3130,居群水平的遺傳多態(tài)度(Hpop 為0.2457;扁玉螺的遺傳變異有78.73%存在于居群內,21.27%的變異存在于居群間(表4。2.2扁玉螺居群的遺傳結構2.2.1居群間的遺傳距離和遺傳相似度遺傳距離(D 和遺傳相似度(S 是衡量居群間遺傳變異程度的重要參數(shù),S 值越大,表明親緣關系越近,遺傳變異越小;而D 值越大,則表明親緣關系越遠,遺傳變異越大。

26、根據(jù)Nei 的公式14計算居群間的無偏遺傳距離和遺傳相似度的結果如表5,可見遺傳距離與遺傳相似度所得結果是一致的,即在扁玉螺3個居群中,DL 與YT 之間的親緣關系較近,DL 與QD 之間的親緣關系較遠。2.2.2居群間的遺傳分化利用AMOVA 的等級剖分法得出的居群間和居群內對總遺傳變異的貢獻率表明,扁玉螺27.16%的變異發(fā)生在居群間,72.84%的變異發(fā)生在居群內(表6,顯著性檢驗顯示扁玉螺居群間和居群內均有極顯著的遺傳分化(st =0.2720,P <0.001。居群間遺傳分化系數(shù)(Gst 為0.1720,由Gst 估算的基因流(Nm 為2.4063。3討論3.1關于扁玉螺的遺傳

27、多樣性遺傳多樣性可評價物種對環(huán)境的適應能力以及進化潛力,多態(tài)位點比例則是這種評價的量化參數(shù)之一。本文中扁玉螺的多態(tài)位點比例為74.53%85.09%,與用I SSR 方法得出的其它海洋動物多態(tài)位點比例相比,扁玉螺自然居群的遺傳多樣性水平較高。如小黃魚(Pseudosciaena polyactis 為65.63%3,牙鲆(Paralichthysolivaceus 為27.45%33.92%4,刀鱭(Coilia ectenes 為57158%68.18%5,斜帶髭鯛(Hapalogenys n itens 2055生態(tài)學報28卷表4扁玉螺3個居群內和居群間Shannon s 信息指數(shù)的分布T

28、able 4Partiti on of the Shannon s i n dex w ith i n and am ong 3popul a ti on s of N everita didy m a引物Pri m ers 各居群的遺傳多態(tài)度HoShannon s index of 3populati onsDLYT QD 居群內遺傳多態(tài)度Hpop居群總的遺傳多態(tài)度Hsp居群內遺傳多態(tài)度比例Hpop /Hsp 居群間遺傳多態(tài)度比例(Hsp 2Hpop /HspUBC 8110.22680.19840.20250.20920.32380.64630.3537UBC 8120.30700.268

29、30.20430.25990.29740.87390.1261UBC 8130.26060.30680.24300.27010.31980.84470.1553UBC 8140.19530.27740.33750.27010.32060.84230.1577UBC 8150.30750.30610.22290.27880.28930.96360.0364UBC 8250.24040.29100.22700.25280.31830.79430.2057UBC 8340.21870.26280.24580.24240.32330.74980.2502UBC 8350.18130.28460.147

30、40.20440.28630.71390.2861UBC 8360.24330.20960.24890.23400.32220.72620.2738UBC 8400.21100.26880.25560.24510.32120.76320.2368UBC 8560.24030.26110.19750.23300.32260.72210.2779UBC 8570.25700.25750.31390.27610.29870.92450.0755UBC 8730.21710.24320.19440.21830.32590.66970.3303平均Mean0.23890.26430.23390.2457

31、0.31300.78730.21273Hpop :Genetic diversity within populati ons;Hsp :Total genetic diversity;Hpop /Hsp :Rati o of genetic diversity within populati ons;(Hsp 2Hpop /Hsp :Rati o of genetic diversity a mong populati ons表5扁玉螺3個居群間的遺傳距離和遺傳相似度Table5Geneti c d ist ances and geneti c i den titi es i n dex am

32、 ong 3popul a ti on s of N everita didy m a居群名稱Populati on na me大連DL煙臺YT青島QD大連DL 20.89870.8683煙臺YT 0.106920.8867青島QD0.14120.120323對角線右上方為遺傳相似度,左下方為遺傳距離Geneticidentity (above diagonal and genetic distance (bel ow diagonal 為44.83%51.72%6,文蛤(M eretrix m eretrix 為68.40%80.70%7,翡翠貽貝(Perna viridis 為57114%

33、60178%8。這是由于在上述海洋動物中除小黃魚和刀鱭為自然居群外,其余種類中包括人工養(yǎng)殖群體,由于多代連續(xù)人工養(yǎng)殖造成的瓶頸效應、遺傳漸滲和近親交配等不利因素,勢必導致遺傳多樣性水平的下降15,16,而扁玉螺目前仍為自然居群,尚未進行人工養(yǎng)殖或放流增殖,因而避免了對其遺傳多樣性的不利影響。從本文得出的Nei s 基因多樣性指數(shù)(h 和Shannon s 信息指數(shù)(I 兩項參數(shù)看,扁玉螺在物種水平的遺傳多樣性高于居群水平,而造成居群內遺傳多樣性降低和遺傳衰退的原因有選擇效應、有效繁育個體數(shù)量減少、遺傳漂變以及近交等17。表6扁玉螺3個居群遺傳變異的AMO VA 分析Table 6Ana lys

34、is of m olecul ar var i a nce (AMOVA of N everita didy m a three popul a ti on s變異來源Source of variance自由度d f 離差平方和SS D 均方MS 變異組分Variancecomponent 變異百分率Percentage of variati on (%P 3居群間Among populati ons 2547.9778273.98898.383527.16<0.001居群內W ithin populati ons871956.066722.483522.483572.84<0.0

35、013交換1000次單倍型的顯著性檢驗Significant differences were calculated using 1000per muted samp les;d f :Degree of freedom;SS D:Sum ofsquare deviati on;MS:Mean square3.2扁玉螺居群的遺傳結構與遺傳分化分析AMOVA 分析從基因型的分化程度出發(fā)研究居群的遺傳結構,是分析RAP D 、I SSR 等顯性標記數(shù)據(jù)的一種有效方法12。本研究結果中,AMOVA 分析與Shannon s 信息指數(shù)分析變異在居群內和居群間的分布情況305511期孫始威等:基于I S

36、SR 標記的扁玉螺(N everita didym a 自然居群遺傳結構5504 生 態(tài) 學 報 28 卷 基本一致 ,即有 70%以上的變異存在于各居群內 ,僅有小部分存在于居群間 ,居群內的遺傳分化大于居群間 的遺傳分化 。 本文由 POPGENE 基于 Nei遺傳距離估算出的扁玉螺居群間遺傳分化系數(shù) Gst為 0. 1720, 由 AMOVA s 分析基于 Euclidean距離平方得出的 st為 0. 2720, 兩種估算方法在數(shù)值上雖然不同 , 但二者的評價標準相 同 ,都是反映居群遺傳分化程度的重要指標 方 13 18 。 Euclidean 距離平方事實上是兩個基因型的差的平方

37、, 從方 12 差的定義出發(fā) ,顯然更適合用其計算離差平方和 , 因此 W I AMOVA 軟件中推薦使用 Euclidean 距離平 N 18 。B uso 等認為 , Gst或 st值介于 0 0. 05 之間表示居群間遺傳分化程度很弱 ; 0. 05 0. 15 為分化程度 。由此可見 ,扁玉螺居群間已發(fā)生了較大程 19 中等 ; 0. 15 0. 25 為分化程度較大 ; 大于 0. 25 為分化程度很大 度的遺傳分化 , Gst與 st值反映的遺傳分化趨勢是一致的 。 影響居群遺傳結構最重要的因素是基因交流程度和繁育方式 。群體遺傳學理論認為 , 不管居群大 小 , 如果基因流 Nm

38、 < 1,遺傳漂變就成為影響居群遺傳結構的主導因素 ; 但只要基因流是多向的 ,當每世代 20 居群間遷移者大于或等于 1 時 (Nm 1 ,基因流就可以防止居群間由遺傳漂變引起的遺傳分化 。本研究 中扁玉螺 3 個居群間的基因流 Nm = 2. 4063,表明居群間存在著有效的基因流 ,遺傳漂變不是影響扁玉螺居 群遺傳分化的主要因素 。引起扁玉螺居群遺傳分化可能與其繁育方式 、 各居群之間分布不連續(xù)造成的地理隔 離、 以及人為過度采捕導致資源量減少等因素有關 。扁玉螺行交尾繁殖 ,其面盤幼蟲的浮游期極為短暫 ,成體 在海底匍匐生活 ,遷移范圍較小 ,這些都在一定程度上限制了基因的交流

39、。 雖然扁玉螺自然居群已出現(xiàn)了一定程度的遺傳分化 ,但從遺傳距離的分析可以看出 , 3 個居群間的遺傳 距離平均值為 0. 1228,這與同一物種的居群間遺傳距離小于 0. 16 的觀點 21 是相符的 , 即扁玉螺的遺傳分化 仍屬于種內正常分化的范疇 。本文中 ,大連居群與青島居群的遺傳距離較大 ,而大連居群與煙臺居群的遺傳 距離較小 ,這與 3 個居群所處的地理位置有關 ,大連與煙臺之間為渤海海峽 ,海流水團運動暢通無阻 ; 而青島 地處山東半島南部 ,對來自渤海和黃海西北部的海流水團運動而言 ,山東半島是一天然屏障 ,這種特殊的地理 隔離導致了居群間基因流受阻 。 本研究結果表明 ,我國

40、北方沿海的扁玉螺自然居群有著豐富的遺傳多樣性 ,但各居群已經出現(xiàn)了遺傳分 化 。這一結果客觀地反映了扁玉螺不同自然居群的遺傳多樣性 、 遺傳結構及居群之間的基因交流情況 , 為評 價扁玉螺種質資源狀況提供了科學依據(jù) 。在此基礎上 ,應當對扁玉螺實施遺傳多樣性保護和種質資源保存的 策略 ,并根據(jù)其自然居群的遺傳多樣性水平較高 、 遺傳變異大部分存在于居群內的特點 ,加強對分布海域內不 同居群以及居群內不同類型個體的保存 ,避免過度采捕 、 環(huán)境污染等人為因素造成扁玉螺自然資源的衰減 ,從 而合理開發(fā)和持續(xù)利用扁玉螺資源 。 References: 1 Sokal R R , Jacquez G

41、M , Wooten M C. Spatial autocorrelation analysis of m igration and selection. Genetics, 1989, 121 ( 4 : 845 2 855. Aquaculture, 2006, 255 ( 1 24 : 565 2 572. Sinica, 2007, 29 ( 14 : 105 2 110. Nanjing Nor mal University (Natural Science , 2004, 27 ( 3 : 74 2 77. analyses Journal of Trop ical Oceanog

42、raphy, 2007, 26 ( 4 : 51 2 . 55. 2004, 24 ( 8 : 1657 2 1663. Sea. Marine Sciences, 2005, 29 ( 11 : 34 2 38. ISSR 2PCR markers Journal of Shanghai Fisheries University, 2006, 15 ( 4 : 390 2 . 397. 2 L i H S, Chen G Z Genetic diversity of mangrove p lant S onneratia caseola ris in Hainan Island based

43、on ISSR analysis Acta Ecologica Sinica, . . 3 Xu G P, Zhong X M , D ing Y P, et a l The research on genetic diversity of Pseudosciaena polyactis population from the southern part of the Yellow . 4 L iu Y G, Chen S L, L i J, L i B F. Genetic diversity in three Japanese flounder ( Pa ra lichthys oliva

44、ceus populations revealed by ISSR markers . 5 Zhang Y, Hu Z H, Zhou Z G, et a l Population genetic structure of Coilia ectenes samp led from Yangtze R iver estuary revealed by RAPD 2PCR and . 8 Du X D , L i K, Huang R L, et a l Genetic diversity of three populations of Penera virid is as revealed by

45、 phenotyp ic traits, RAPD and ISSR . 6 W ang S F, Du J Y, Su Y Q , et a l The genetic structure of nature and reared group s of Hapa logenys n itens by ISSR analysis Acta Oceanologica . . 7 Chen D P, Shen H S, D ing Y P, et a l U sing inter2simp le sequence repeats ( ISSR technique in two population

46、s of M eretrix m eretrix. Journal of . http: / /www. ecologica. cn 11 期 孫始威 : 基于 ISSR 標記的扁玉螺 (N everita d idym a 自然居群遺傳結構 等 5505 9 L i L, Sun Z X, Yang S D , et al Analysis of genetic variation of abalone ( Ha liotis d iscus hanna i populations with m icrosatellite markers . . 10 Yeh F C, Boyle T J

47、B. Population genetic analysis of co 2dom inant and dom inant markers and quantitative traits Belgian Journal of Botany, 1997, . 129 ( 2 : 157. ( 2 : 201 2 210. 12 Zhang F M , Ge S Data analysis in population genetics . analysis of RAPD data with AMOVA. B iodiversity Science, 2002, 10 ( 4 : 438 2 .

48、. 444. 14 Nei M. Estim ation of average heterozygosity and genetic distance from a small number of individuals Genetics, 1978, 89 ( 3 : 583 2 . 590. 16 Holts mark M , Klemetsdal G, Sonesson A K, et a l . 2008, 274 ( 2 24 : 241 2 246. 462 2 470. 2 李海生 ,陳桂珠 . 海南島紅樹植物海桑遺傳多樣性的 ISSR 分析 . 生態(tài)學報 , 2004, 24

49、( 8 : 1657 1663. 3 許廣平 ,仲霞銘 ,丁亞平 ,等 . 黃海南部小黃魚群體遺傳多樣性研究 . 海洋科學 , 2005, 29 ( 11 : 34 38. 6 王世鋒 ,杜佳瑩 ,蘇永全 ,等 . 斜帶髭鯛野生與養(yǎng)殖群體遺傳結構的 ISSR 分析 . 海洋學報 , 2007, 29 ( 14 : 105 110. 8 杜曉東 ,李康 ,黃榮蓮 ,等 . 翡翠貽貝 3 個野生種群遺傳多樣性分析 . 熱帶海洋學報 , 2007, 26 ( 4 : 51 55. 7 陳大鵬 ,沈懷舜 ,丁亞平 ,等 . 文蛤地理種群 ISSR 分子標記的初步研究 . 南京師范大學學報 (自然科學版

50、 , 2004, 27 ( 3 : 74 77. 9 李莉 ,孫振興 ,楊樹德 ,等 . 用微衛(wèi)星標記分析皺紋盤鮑群體的遺傳變異 . 遺傳 , 2006, 28 ( 12 : 1549 1554. 12 張富民 ,葛頌 . 群體遺傳學研究中的數(shù)據(jù)處理方法 . RAPD 數(shù)據(jù)的 AMOVA 分析 . 生物多樣性 , 2002, 10 ( 4 : 438 444. 17 常亞青 ,陳曉霞 ,丁君 ,等 . 蝦夷扇貝 ( Pa tinopecten yessoensis 5 個群體的遺傳多樣性 . 生態(tài)學報 , 2007, 27 ( 3 : 1145 1152. South Africa ( Ha liotis m idae . Aquaculture, 2004, 233 ( 1 24 : 109 2 127. Ecologica Sinica, 2007, 27 ( 3 : 1145 2 1152. Ecology, 2005, 14 ( 7 : 1925 2 1937. Ecology, 2001, 10 ( 1 : 53 2 63. m itochondrial DNA restriction data. Genetics, 1992, 131 ( 2 : 479 2