第四節(jié)食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的含量測定

1、第四節(jié) 食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的含量測定一、亞硝酸鹽測定 (格里斯試劑比色法 (一 目的熟悉食品中亞硝酸鹽的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn),掌握食品中亞硝酸鹽含量測定的基本方 法。(二 原理樣品經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)、除去脂肪后,在弱酸性條件下亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸 重氮化后,在與 N-1-萘基乙二胺偶合形成紫紅色染料后,與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。(三 試劑實驗用水為蒸餾水,試劑不加說明者,均為分析純試劑。1. 氯化胺緩沖液:1L 容量瓶中加入 500ml 水, 準(zhǔn)確加入 20.0ml 鹽酸, 振蕩 混勻,準(zhǔn)確加入 50ml 氫氧化銨,用水稀釋至刻度。必要時用稀鹽酸和稀氫氧化 銨調(diào)試至 pH9.69.7。2. 0.42mol/L硫酸鋅

2、溶液:稱取 120g 硫酸鋅 (ZnSO4·7H2O ,用水溶解, 并稀釋至 1000ml 。3. 20g/L氫氧化鈉溶液:稱取 20g 氫氧化鈉用水溶解,稀釋至 1L 。4.對氨基苯磺酸溶液:稱取 10g 對氨基苯磺酸,溶于 700ml 水和 300ml 冰 乙酸中,置棕色瓶中混勻,室溫保存。5. 0.1% N-1-萘基乙二胺溶液:稱取 0.1g N-1-萘基乙二胺,加 60%乙酸溶 解并稀釋至 100ml ,混勻后,置棕色瓶中,在冰箱中保存,一周內(nèi)穩(wěn)定。6.顯色劑:臨用前將 0.1% N-1-萘基乙二胺溶液和對氨基苯磺酸溶液等體積 混合。7.亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液:準(zhǔn)確稱取 250.0

3、mg 于硅膠干燥器中干燥 24h 的亞硝 酸鈉, 加水溶解移入 500ml 容量瓶中, 加 100ml 氯化胺緩沖液, 加水稀釋至刻度, 混勻,在 4避光保存。此溶液每毫升相當(dāng)于 500g 的亞硝酸鈉。8. 亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液:臨用前, 吸取亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液 1.00ml , 置于 100ml 容量瓶中,加水稀釋至刻度,此溶液每毫升相當(dāng)于 5.0g 亞硝酸鈉。(四 儀器(五 操作方法1.樣品處理 稱取約 10.00g(糧食取 5g 經(jīng)絞碎混勻樣品,置于打碎機中, 加 70ml 水和 12ml 2%氫氧化鈉溶液,混勻,用 2%氫氧化鈉溶液調(diào)樣品至 pH8, 定量轉(zhuǎn)移至 200ml 容量瓶中加 1

4、0ml 硫酸鋅溶液,混勻,如不產(chǎn)生白色沉淀,再 補加 25ml 氫氧化鈉,混勻。置 60水浴中加熱 10min ,取出后冷至室溫,加 水至刻度,混勻。放置 0.5h ,用濾紙過濾,棄去初濾液 20ml ,收集濾液備用。2.亞硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備:吸取 0, 0.5, 1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0ml 亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液 (相當(dāng)于 0, 2.5, 5, 10, 15, 20, 25g 亞硝酸鈉 ,分別 置于 25ml 帶塞比色管中。 于標(biāo)準(zhǔn)管中分別加入 4.5ml 氯化胺緩沖液, 加 2.5ml60%乙酸后立即加入 5.0ml 顯色劑,加水至刻度,混勻,在暗處靜置 25min

5、,用 1cm 比色杯 (靈敏度低時可換 2cm 比色杯 , 以零管調(diào)零點, 于波長 550nm 處測吸光度, 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。低含量樣品以制備低含量標(biāo)準(zhǔn)曲線計算,標(biāo)準(zhǔn)系列為:吸取 0, 0.4, 0.8, 1.2, 1.6, 2.0ml 亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液(分別相當(dāng)于 0, 2, 4, 6, 8, 10g 亞 硝酸鈉。3.樣品測定:吸取 10.0ml 上述濾液(樣品處理濾液于 25ml 帶塞比色管 中,其它操作同上。(六 結(jié)果計算X1 = (m2 × 1000 / m1 ×(V2/V1×1000式中:X1-樣品中亞硝酸鹽的含量, mg/kg;m1-樣品質(zhì)量, g ;

6、m2-測定用樣液中亞硝酸鹽的質(zhì)量, g ;V1-樣品處理液總體積, ml 。V2-測定用樣液體積, ml 。結(jié)果的表述應(yīng)報告算術(shù)均數(shù)的二位有效數(shù)。二、硝酸鹽測定(一 目的熟悉食品中硝酸鹽的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn),掌握食品中硝酸鹽含量測定的基本方法。 (二 原理樣品經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)除去脂肪后,溶液通過鎘柱或加入鎘粉,使其中的硝酸根 離子還原成亞硝酸根離子, 在弱酸性條件下, 亞硝酸根與對氨基苯磺酸重氮化后, 再與 N-1-萘基乙二胺偶合形成紅色染料,測得亞硝酸鹽總量,由總量減去亞硝 酸鹽含量即得硝酸鹽含量。(三 試劑1.硫酸鎘溶液 (0.14mol/L:稱取 37g 硫酸鎘 (CdSO4·8H2O ,用

7、水溶解, 定容至 1L 。2. 0.1mol/L鹽酸溶液:吸取 8.4ml 鹽酸,用水稀釋至 1L 。3.硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液:準(zhǔn)確稱取 500.0mg 于 110120干燥恒重的硝酸鈉, 加水溶解,移入 500ml 容量瓶中,加 50ml 氯化胺緩沖液,用水稀釋至刻度,混 勻,在 4冰箱中避光保存。此溶液每毫升相當(dāng)于 1mg 的亞硝酸鈉。4. 硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液:吸取硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液 1.00ml , 置于 100ml 容量瓶中, 加水稀釋至刻度,混勻,臨用時現(xiàn)配。此溶液每毫升相當(dāng)于 10g 硝酸鈉。5.氯化胺緩沖液、亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液、顯色劑:配制方法見亞硝酸鹽測 定。6.鎘柱 (鎘粉 海綿狀鎘粉的

8、制備:于 500ml 硫酸鎘溶液中,投入足夠的 鋅棒,經(jīng) 34h ,當(dāng)其中的鎘全部被鋅置換后,用玻璃棒輕輕刮下,取出殘余鋅 棒,使鎘沉底,傾去上層清液,用水以傾斜法多次洗滌,然后移入粉碎機中加 500ml 水, 搗碎約 2s , 用水將金屬細(xì)粒洗至標(biāo)準(zhǔn)篩上, 取 2040目之間的部分, 置試劑瓶中,用水封蓋保存?zhèn)溆谩?1鎘柱還原效率的測定:取 25ml 酸式滴定管數(shù)支, 向柱底壓入 1 ml 高的玻璃棉作墊, 上置一小漏斗, 將新配制的鎘粉帶水加入柱內(nèi),邊裝邊輕輕敲擊柱排出柱內(nèi)空氣;加鎘粉至 8 10cm 高,上面用 1cm 高的玻璃棉覆蓋,上置一儲液漏斗。當(dāng)鎘柱填裝好后, 先用 25ml 0

9、.1mol/L鹽酸洗滌, 再以水洗兩次, 每次 25ml , 調(diào)節(jié)柱流速至 35ml/min。鎘柱不用時用水封蓋,隨時都要保持水平面在鎘層 之上,不得使鎘層有氣泡。鎘柱每次使用完畢后,應(yīng)先以 25ml 0.1mol/L鹽酸洗滌,再以水洗兩次,每 次 25ml ,最后用水覆蓋鎘柱。柱先加 25ml 氯化銨緩沖液,至液面接近海綿鎘時,吸取 2.0ml 硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn) 使用液。經(jīng)柱還原,控制流速 35ml/min,用 50ml 容量瓶接收。加入 5ml 氯化 銨緩沖溶液, 液面接近海綿鎘時, 加入 15ml 水洗柱, 還原液和洗液一并流入 50ml 容量瓶中。 加 60%5ml乙酸, 顯色劑 10ml

10、, 加水稀釋至刻度, 渾勻, 暗處放置 25min 。 用 1cm 比色杯, 以標(biāo)準(zhǔn)零管調(diào)節(jié)零點, 于波長 550nm 處測吸光度, 根據(jù)亞硝酸鈉 標(biāo)準(zhǔn)曲線計算還原效率(如鎘柱還原率小于 95%,應(yīng)經(jīng)鹽酸浸泡活化處理。(2鎘粉還原效率的測定:鎘粉使用前經(jīng)鹽酸浸泡活化處理,再以水洗兩次,用水浸沒待用。用牛角勺 將鎘粉加入 25ml 帶塞刻度試管中,至 5ml 刻度,用少量水封住。吸取 2.0ml 硝 酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液, 加入 5ml 氯化銨緩沖液。 蓋上試管塞,振搖 2min , 靜止 5min ,用漏斗頸部塞有少量脫脂棉的小漏斗過濾,濾液定量收集于 50ml 容量瓶中,用15ml 水少量多次洗滌

11、鎘粉,洗液與濾液合并。加 5ml 60%乙酸后,立即加顯色劑10ml ,加水稀釋至刻度,混勻,暗處放置 25min 。用 1cm 比色杯,以標(biāo)準(zhǔn)零管調(diào)節(jié)零點,于 550nm 波長處測吸光度,根據(jù)亞硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)曲線計算還原效率。(3結(jié)果計算:X2 = (m3 × 1.232×100 /20式中:X2-還原效率, %;20-硝酸鹽的質(zhì)量, g ;m3-20g 硝酸鹽還原后測得亞硝酸鹽的質(zhì)量, g ;1.232-硝酸鹽換算成硝酸鹽的系數(shù)。(四 操作方法1.樣品處理 硝酸鹽測定。1 鎘柱法:經(jīng)活化的鎘柱先加 25ml 氯化銨緩沖液,至液面接近海綿鎘時,準(zhǔn)確吸取上述的樣品濾液 10.0ml ,加入鎘柱還原。以下按上述 7(1中自“控制流速 35ml/min”起依法操作。2 鎘粉法:準(zhǔn)確吸取樣品濾液 10.0ml , 置于盛有高度至刻度為 5ml 處鎘粉的25ml 帶塞刻度試管中。以下按上述 7(2中自“加入 5ml 氯化銨緩沖液”按上述依法操作。注:蔬菜、 腌菜類食品中硝酸鹽含量較高, 可根據(jù)樣品中硝酸鹽的實際含量,將樣品溶液稀釋至適當(dāng)濃度。(五 結(jié)果計算X3 = (m5 m6×1.232×1000/ m4 ×(V4/V3×1000 式中:X3-樣品中硝酸鹽的