分子心血管學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室轉(zhuǎn)基因動(dòng)物平臺(tái)

1、12儀器設(shè)備：儀器設(shè)備： 顯微操縱系統(tǒng)、倒置顯微鏡、自制防震臺(tái)、顯微操縱系統(tǒng)、倒置顯微鏡、自制防震臺(tái)、細(xì)胞培養(yǎng)箱、超凈臺(tái)、方波電穿孔系統(tǒng)、高速細(xì)胞培養(yǎng)箱、超凈臺(tái)、方波電穿孔系統(tǒng)、高速冷凍離心機(jī)和獨(dú)立的動(dòng)物飼養(yǎng)室。冷凍離心機(jī)和獨(dú)立的動(dòng)物飼養(yǎng)室。功能：功能： 構(gòu)建過表達(dá)心血管疾病相關(guān)基因載體，利構(gòu)建過表達(dá)心血管疾病相關(guān)基因載體，利用轉(zhuǎn)基因或基因敲除的方法，制備心血管疾病用轉(zhuǎn)基因或基因敲除的方法，制備心血管疾病小鼠和家兔的模式動(dòng)物，為系統(tǒng)地研究心血管小鼠和家兔的模式動(dòng)物，為系統(tǒng)地研究心血管疾病病理機(jī)制、評(píng)價(jià)藥物藥效和藥理提供體內(nèi)疾病病理機(jī)制、評(píng)價(jià)藥物藥效和藥理提供體內(nèi)研究的技術(shù)手段。研究的技術(shù)手段。

2、 3Genetically Engineered Mouse Models:Transgenic characterize the ability of a promoter to direct tissue-specific gene expression examine the effects of overexpressing andmisexpressing endogenous or foreign genes at specific times and locations in the animals45內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞Tie2平滑肌細(xì)胞細(xì)胞平滑肌細(xì)胞細(xì)胞SM22a a神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)

3、系統(tǒng)Neuron specific enolase,nestin, synapsin, GFAP肝臟肝臟Albumin, ApoE脂肪脂肪AP2腎臟腎臟Uromodulin, mSGLT 2,mKAP2, CYP27B1皮膚皮膚Keratin 5,keratin 6心臟心臟MHC, MLC2Transgene Design: Representative Examples of Tissue-Specific Expression Profiles全身表達(dá)全身表達(dá)EF1，CMV胰腺胰腺Elastase贏潤(rùn)生物（Yrbio）長(zhǎng)沙市國(guó)家高新技術(shù)開發(fā)區(qū) 678Pros: Relatively sim

4、ple and efficient Generate transgenics in 3 months Long transgenes possible Potentially all speciesCons: Multiple copies at a single locus Occasionally mosaic founders (late stage integration) 10% insertions result in phenotype due to disruption ofendogenous gene Deletion, complex rearrangements of

5、host genome Not all integrated transgenes are expressed. Expressionlevel do not correlate well with copy number91011定動(dòng)物實(shí)驗(yàn)日期實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物種類和數(shù)量PMSG注射時(shí)間和量實(shí)驗(yàn)日期HCG注射時(shí)間和量交配情況動(dòng)物年齡飼養(yǎng)環(huán)境光照周期雄鼠淘汰雌鼠淘汰實(shí)驗(yàn)記錄實(shí)驗(yàn)記錄操作人操作人趙芙潔2011-10-82011-10-82011-10-92011-10-92011-10-102011-10-102011-10-82011-10-82011-10-92011-10-92011-10-102

6、011-10-10C57C57* *5 5C57C57* *9 9C57C57* *5 5150ul150ul（11:00AM11:00AM）150ul150ul（11:00AM11:00AM）150ul150ul（11:00AM11:00AM）趙芙潔，韓迎春2011-10-102011-10-102011-10-112011-10-112011-10-122011-10-12150ul150ul（10:00AM10:00AM）150ul150ul（10:00AM10:00AM）150ul150ul（10:00AM10:00AM）趙芙潔，韓迎春C57C57：=1:1=1:1* *5 5C57C

7、57：=1:1=1:1* *9 9C57C57：=1:1=1:1* *5 5ICRICR：結(jié)扎：結(jié)扎=1:1=1:1* *1818ICRICR：結(jié)扎：結(jié)扎=1:1=1:1* *1818ICRICR：結(jié)扎：結(jié)扎=1:1=1:1* *18183W3W3W3W3W3W2525252525257:00-19:007:00-19:007:00-19:007:00-19:007:00-19:007:00-19:0012實(shí)驗(yàn)日期實(shí)驗(yàn)日期見栓動(dòng)物數(shù)量供體受體取卵開始時(shí)間取卵結(jié)束時(shí)間取卵數(shù)量加熱塊溫度注射基因名稱、片段確認(rèn)和濃度稀釋離心情況注射臺(tái)溫度注射開始時(shí)間注射卵數(shù)量注射結(jié)束時(shí)間存活卵數(shù)量2011-10-6

8、2011-10-6操作人10王宇輝2 28:008:009:009:0080803636PCSK9PCSK9野生野生TETE稀釋，稀釋，3-3-5ng/ul5ng/ul，離心，離心353513:0013:00606016:0016:00101013每只動(dòng)物回輸卵數(shù)量回輸動(dòng)物體重戊巴比妥鈉用量回輸情況手術(shù)情況第二天情況第五天體重第10天體重第15天體重出生情況帶仔情況基因型鑒定10X1251%，200ul好順利恢復(fù)262628未生李海波14 供體鼠見栓率及取卵數(shù)統(tǒng)計(jì)供體鼠見栓率及取卵數(shù)統(tǒng)計(jì)年齡年齡3-4周周品系品系C57BL/6激素劑量激素劑量5U/只只見栓率見栓率60.0%平均取卵數(shù)平均取卵數(shù)27個(gè)個(gè)/只只 受體受體ICR雌鼠情況統(tǒng)計(jì)雌鼠情況統(tǒng)計(jì)年齡年齡8-16周周見栓率見栓率15%回輸數(shù)回輸數(shù)51只只產(chǎn)子母鼠數(shù)產(chǎn)子母鼠數(shù)20只只出生子鼠數(shù)出生子鼠數(shù)80只只制備轉(zhuǎn)基因品系制備轉(zhuǎn)