食物中毒中不同血清型副溶血性弧菌基因特征分析_鞠長(zhǎng)燕_

1、·論著 ·食物中毒中不同血清型副溶血性弧菌基因特征分析鞠 長(zhǎng) 燕 , 黃 銳敏 ,段永 翔 , 俞慕 華 【 摘要 】 目的對(duì) 2起 食 物 中 毒 中 不 同 血清 型 的 副 溶 血 性 弧菌 進(jìn)行 基 因 特征 分析 。 方法第1起 食 物 中 毒 發(fā) 生 在 2010年 5月 17日深圳 市 某 食 堂 , 感 染 人 數(shù) 20人 左右 , 采 集 到 病人 肛拭子 9份 , 可 疑 食 品 3份 , 每 份樣 本 挑 取 20個(gè)可 疑菌落 ; 第 2起 食 物 中 毒 發(fā) 生 在 2010年 7月 1日深圳 市 某 配 餐 中 心 , 感 染 人 數(shù) 10人 左右

2、 , 采 集 到 病人 肛拭子 7份 , 可 疑 食 品 2份 , 涂抹 樣 3份 , 每 份樣 本 挑 取 10個(gè)可 疑菌落 。 對(duì) 可 疑菌落 分別 進(jìn)行 鹽 耐受試 驗(yàn) 、 生 化 試 驗(yàn) 和 血清 學(xué) 鑒 定 。 從 2起 食 物 中 毒 的 每 份樣 本 中 挑 取 不 同 血清 型 進(jìn)行 tdh 、trh 、 GS-PC、 orf 8基 因 檢測(cè) 和 脈沖場(chǎng)凝膠電泳 分析 (PFGE 。 結(jié)果 第 1起 食 物 中 毒 分 離 到副 溶 血 性 弧菌 180株 , 其中 O3:K6107株 , O2:K2870株 , O4:K34、 O3:K25、 O4:K12各 1株 ; 第 2

3、起 食 物 中 毒 分 離 到副 溶 血 性 弧菌 80株 , 其中 O3:K644株 , O4:K8、 O11:K36、 O11:K19各 10株 , O1:K566株 。 O3:K6、 O1:K56、 O4:K8、 O11:K36攜帶 tdh 基 因 , 不 攜帶 trh 基 因 , 其他 血清 型 (O2:K28,O4:K12, O3:K25, O4:K34, O11:K19 均不 攜帶 tdh 和 trh 基 因 。 O3:K6和 O11:K362種血清 型 的 GS-PC和 orf 8基 因 陽(yáng) 性 , 其他 血清 型 陰 性 。 PFGE 結(jié)果顯示 第 1起 食 物 中 毒 中食

4、品 和病人 肛拭 分 離 的 O2:K28(分別 3、 2株 的 PFGE 帶 型 基 本 一 致 , 屬 高 度 相 關(guān) 菌株 。 第 2起 食 物 中 毒 中病人 肛拭 分 離 的 4株 O3:K6與 鹵雞 蛋 盤涂抹 樣 分 離 的 1株 O3:K6PFGE 帶 型一 致 。 2起 食 物 中 毒 的 O3:K6帶 型 基 本 一 致 。 來(lái) 自 相 同 樣 本 不 同 血清 型 的 副 溶 血 性 弧菌 的 PFGE 帶 型不 一 致 。 結(jié)論第 1起 食 物 中 毒 與食用 污 染 了 副 溶 血 性 弧菌 的食 品 有 關(guān) , 第 2起 食 物 中 毒 與 污 染 了 副溶 血 性

5、 弧菌 的 鹵雞 蛋 盤 有 關(guān) 。 通 過(guò) 血清 分型 和 分 子 生 物 學(xué) 分析 , 可 認(rèn) 為 相 同 樣 本 中 分 離 的 不 同 血 清 型 副 溶 血 性 弧菌 未 發(fā)現(xiàn) 遺傳 學(xué) 證 據(jù) , 為 遺傳 不相 關(guān) 菌株 ?！?關(guān)鍵詞 】 副 溶 血 性 弧菌 ; 食 物 中 毒 ;脈沖場(chǎng)凝膠電泳文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 :A文章編號(hào) :16715039(2014 03022906DOI :1013217/jscjpm20140229基金項(xiàng)目 :深圳市南山區(qū)科技計(jì)劃項(xiàng)目 (2012057作者單位 :深圳市南山區(qū)疾病預(yù)防控制中心 , 廣東 深圳 518054作者簡(jiǎn)介 :鞠長(zhǎng)燕 (1982 , 女

6、 , 碩士研究生 , 主管技師 , 主要從事微生物檢驗(yàn)工作 通訊作者 :俞慕華 , E-mail :yumuhuavip163com Genetic characterization of different serotypes of Vibrio parahaemolyticus isolated from food poison-ing casesJU Chang-yan , HUANG ui-min , DUAN Yong-xiang , YU Mu-huaShenzhen Nanshan Centerfor Disease Control and Prevention , Shenzh

7、en 518054, China【 Abstract 】 ObjectiveTo analyze the genetic characteristics of different serotypes of Vibrio parah-aemolyticus (Vp isolated from two food poisoning outbreaksMethodsThe first outbreak occurred in thecanteen of an electronic company in Shenzhen on May 17, 2010About 20people were infec

8、tedNine anal swabs from patients and 3suspicious food samples were collectedTwenty suspicious colonies were selected for each sample after cultureThe second outbreak occurred in a catering center in Shenzhen on July 1, 2010About 10persons were infectedSeven anal swabs from patients , 2suspicious foo

9、d and 3tray swabs samples were collectedTen suspicious colonies were selected for each sample after cultureEach suspi-cious colony was identified using salt tolerance test , biochemical test , and serotypingDifferent serotyping isolates were collected from both outbreaks , and characterized by tdh ,

10、 trh , GS-PC, orf 8gene detection and pulsed field gel electrophoresis (PFGE analysisesultsOne hundred and eighty Vp isolates were·922·20146403South China J Prev Med , June 2014, Vol. 40,collected from the first outbreak , of which , 107isolates were serotype O3:K6, 70were O2:K28, 1was O4:

11、K34, 1was O3:K25, and 1was O4:K12Eighty Vp isolates were collected from the 2nd outbreak , of which , 44isolates were serotype O3:K6, 10were O4:K8, 10was O11:K36, 10was O11:K19and 6were O1:K56All isolates of O3:K6, O1:K56, O4:K8, O11:K36were positive for tdh , while negative for trh gene detectionTh

12、e other isolates of O2:K28, O4:K12, O3:K25, O4:K34, and O11:K19were negative for both genesThe isolates of O3:K6and O11:K36showed positive for both GS-PCand orf 8gene detec-tion , while all the other isolates were negative for serotypesPFGE analysis indicated that the PFGE pattern of 2isolates (O2:K

13、28 from patients were identical with 3isolates (O2:K28 from food in the first out-break , and 4isolates (O3:K6 from patients were identical with 1isolate (O3:K6 from egg tray swab in the second outbreakPFGE patterns of isolates of O3:K6from both outbreaks were identicalVp isolates from the same samp

14、le with different serotypes were unrelatedConclusion The first food poisoning out-break was related to food contaminated by Vp and the second outbreak was related to egg tray contaminated by VpThe serotyping and genetic data suggests that Vp with different serotypes from the same sample be-long to d

15、ifferent clonal complex , and are unrelated isolates in genetics【 Key words 】 Vibrio parahaemolyticus ; Food poisoning ; Pulsed field gel electrophoresis副溶血性弧菌 (Vibrio parahaemolyticus , Vp 廣 泛存在于海水 、 魚(yú)蝦等海產(chǎn)品以及被污染的食品 、 外 環(huán)境中 , 嗜鹽 , 生長(zhǎng)受溫度影響較大 。 副溶血性弧菌 是導(dǎo)致人類急性胃腸炎的重要病原菌 , 尤其在沿海 地帶 , 它是細(xì)菌性食物中毒的重要病原菌 1。 以

16、往食物中毒檢測(cè)時(shí)存在著同 1份病例或食品 樣本中分離到的副溶血性弧菌往往有幾個(gè)血清型的 狀況 , 但這些血清型之間是否存在遺傳相關(guān)性 , 是否 屬于同 一 克 隆 組 (clone complex , 目 前 較 少 資 料 報(bào)道 。1996年后 O3:K6在全世界范圍內(nèi)流行 , 并出現(xiàn) 了 O4:K68、 O1:K25、 O1:KUT 等 脈 沖 場(chǎng) 凝 膠 電 泳 (PFGE 圖 譜 與 O3:K6十 分 接 近 的 菌 株 , 形 成 了 O3:K6克隆群 , 被稱為大流行株 (pandemic strain , 與 1996年以前的 O3:K6菌株在 toxS 基因上有 7個(gè)堿基的不同

17、 , 根據(jù)這一不同 , GS-PC方法被創(chuàng) 建起來(lái) , 用于區(qū)分新舊 O3:K6克隆群 2。 orf 8可能 編碼 1種粘附蛋白 , 能增加副溶血性弧菌粘附于人 類腸道細(xì)胞的能力或增加了其粘附于海生植物表面 的能力 , 也是大流行株的判斷標(biāo)志之一 3。副溶血性弧菌臨床分離株多數(shù)可產(chǎn)生 1種耐熱 直接溶血素 (TDH , 可以裂解我妻氏血平板上的紅 細(xì)胞 , 產(chǎn)生溶血環(huán) , 是目前所知的副溶血性弧菌主要 的毒力因子 , 另外一種 TDH 相關(guān)溶血素 TH被認(rèn) 為與脲酶的產(chǎn)生有關(guān) , 也被認(rèn)為是副溶血性弧菌的 毒力因子之一 。 資料顯示 4, 多數(shù)臨床分離株攜帶 tdh 基因 , 不攜帶 trh

18、基因 。本文從血清學(xué)分型 、 毒力基因攜帶情況 (tdh 和 trh 基因 、 大流行株判斷 (GS-PC和 orf 8基因陽(yáng) 性 、 PFGE 分型等多方面分析 56, 對(duì) 2起食物中毒 中相同樣本不同血清型的副溶血性弧菌進(jìn)行基因特 征分析 。1材料和方法1. 1材料1. 1. 1菌 種 來(lái)源 沙門菌 H9812, 作為 PFGE 的分 子量標(biāo)準(zhǔn) , 由中國(guó)疾病預(yù)防控制中心傳染病所惠贈(zèng) 。 1. 1. 2主 要 試 劑 副溶血性弧菌瓊脂 (上海市疾病 預(yù)防控制中心 , 副溶血性弧菌診斷血清 (日本生研 株式會(huì)社 , SeaKem Gold Agarose (美國(guó) Cambrex Bio Sc

19、ience ockland , Xba I 、 Not I 限制性內(nèi)切酶 (大連 寶生物公司 , 蛋白酶 K (上海生工 , 一步法 PC試 劑盒 (上海生工 。1. 1. 3主 要 儀器 及 分析 軟 件 VITEK DENSICHEK 濁度儀 (法國(guó) BioMérieux公司 , 恒溫水浴搖床 (英 國(guó) GANT公司 , 脈沖場(chǎng)凝膠電泳儀 (美國(guó) Bio-ad CHEF Mapper , 凝 膠 成 像 系 統(tǒng) (美 國(guó) Bio-ad公 司 , BioNumerics 圖像分析軟件 (比利時(shí) 。1. 2方法1. 2. 1副 溶 血 性 弧菌 分 離 鑒 定 第 1起食物中毒 發(fā)生

20、在 2010年 5月 17日深圳市南山區(qū)某電子有限 公司食堂 , 員工用餐后發(fā)生腹瀉 、 腹痛癥狀 , 感染人 數(shù)有 20人左右 , 采集到病人肛拭子 9份 , 可疑食品 3份 , 按照 GB /T4789. 7 2008食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢 驗(yàn) 副溶血性弧菌檢驗(yàn)的要求 , 分別接種 3%NaCl 堿 性胨水 , 37 培養(yǎng) 18h , 劃線副溶血性弧菌瓊脂 , 37 培養(yǎng) 24h , 每個(gè)平板上挑取 20個(gè)可疑菌落 , 進(jìn) 行鹽耐受試驗(yàn) 、 生化試驗(yàn)和血清學(xué)鑒定 。 第 2起食 物中毒發(fā)生在 2010年 7月 1日深圳市南山區(qū)某配 餐中心 , 客人用餐后發(fā)生腹瀉 、 腹痛癥狀 , 感染人數(shù)&#

21、183;032有 10人左右 , 采集到病人肛拭子 7份 , 可疑食品 2份 , 涂抹樣 3份 , 經(jīng)過(guò)上述相同的步驟 , 每個(gè)平板上 挑取 10個(gè)可疑菌落 。1. 2. 2毒 力 基 因 檢測(cè) 參考文獻(xiàn) 7進(jìn)行 。 每份 樣本挑選不同血清型的菌株各 1株 , 水煮法提取 DNA , 采用多重 PC擴(kuò)增 tdh 和 trh 基因 。 引物見(jiàn) 表 1。1. 2. 3GS-PC和 orf 8基 因 檢測(cè) 參考文獻(xiàn) 8進(jìn) 行 。 采用 1. 2. 2中提取的 DNA , 進(jìn)行以下試驗(yàn) 。 GS-PC在 25L 反應(yīng)體系中進(jìn)行 :5LDNA , 12. 5L 2 PC緩沖液 , 引物各 0. 25L

22、(10mmol /L , 以及 7L 滅菌蒸餾水 。 反應(yīng)條件 :96 預(yù)變性 5min , 96 變性 1min , 45 復(fù)性 2min , 72 延伸 3min , 25個(gè)循環(huán) , 最后延伸 72 7min 。 引物見(jiàn)表 1。表 1本試驗(yàn)中采用的引物序列目的基因 引物序列 (5'-3' 擴(kuò)增片段大小 (bp tdh GTAAAGGTCTCTGACTTTTGGACTGGAATAGAACCTTCATCTTCACC269trh TTGGCTTCGATATTTTCAGTATCTCATAACAAACATATGCCCATTTCCG500GS-PCTAATGAGGTAGAAACAACG

23、TAACGGGCCTACA651orf 8GTTCGCATACAGTTGAGGAAGTACAGCAGGAGTGAG7001. 2. 4PFGE 參考文獻(xiàn) 9進(jìn)行 。 從 2起食物中 毒中挑取代表菌株 , 每份樣本的每種血清型至少 1株 , 進(jìn)行 PFGE 。 采用 40U 限制性內(nèi)切酶 Not I 于 37 酶切 4h 。 H9812用 Xba I 50U 37 酶切 2h 作為分子量標(biāo)準(zhǔn) 。 電泳參數(shù) :電壓 6V /cm, 電場(chǎng)夾 角 120 , 起始轉(zhuǎn)換時(shí)間 10s , 終末轉(zhuǎn)換時(shí)間 35s , 電 泳 18h 。 用凝膠成像軟件 Quantity one-4. 4. 0獲取 圖像 ,

24、BioNumerics 4. 0分析圖像 , 聚類分析采用非加 權(quán)組平均法 (unweighted pair group method with aver-ages , UPGMA 方法和 Dice 系數(shù) , 按 tolerance 1. 5%, optimization 1. 5%繪制聚類圖 。2結(jié)果2. 1菌株分離情況 第 1起食物中毒共采集到 12份樣本 , 經(jīng)過(guò)分離培養(yǎng) , 每份樣本挑取 20個(gè)可疑菌 落 , 共挑取 240個(gè)可疑菌落進(jìn)行生化和血清學(xué)鑒定 , 副溶血性弧菌和非副溶血性弧菌分別為 180和 60株 , 其 中 O3:K6107株 , O2:K2870株 , O4:K34、

25、 O3:K25、 O4:K12各 1株 , 見(jiàn)表 2。 表 2第 1起食物中毒分離到的副溶血性弧菌血清型分布 (株 來(lái)源(樣本編號(hào) 不同血清型的副溶血性弧菌菌落數(shù)O3:K6O2:K28O4:K34O3:K25O4:K12非副溶血 性弧菌菌 落數(shù) a第 2起食物中毒共采集到 12份樣本 , 經(jīng)過(guò)分離 培養(yǎng) , 每份樣本挑取 10個(gè)可疑菌落 , 共挑取 120個(gè) 可疑菌落進(jìn)行生化和血清學(xué)鑒定 , 其中副溶血性弧 菌 80株 , 其 中 O3:K644株 , O4:K8、 O11:K36、 O11:K19各 10株 , O1:K566株 , 非副溶血性弧菌 40株 , 見(jiàn)表 3。2. 2tdh 和

26、trh 基因攜帶情況 第 1起食物中毒 中 , 11份樣本中挑出 17株菌進(jìn)行毒力基因檢測(cè) , 分 別是 8株 O3:K6、 6株 O2:K28、 1株 O4:K34、 1株 O3:K25、 1株 O4:K12, 結(jié)果顯示 , 8株 O3:K6攜帶 tdh 基因 , 不攜帶 trh 基因 , 其他血清型 tdh 和 trh 基 因都不攜帶 , 見(jiàn)圖 1。 第 2起食物中毒中 , 8份樣本 中挑出 10株 菌 進(jìn) 行 毒 力 基 因 檢 測(cè) , 分 別 是 5株 O3:K6、 2株 O1:K56、 1株 O4:K8、 1株 O11:K36、 1株 O11:K19, 結(jié)果顯示 , 除 O11:K1

27、9不攜帶 tdh 和 trh 基因外 , 其他 9株菌都攜帶 tdh 基因 , 不攜帶 trh 基因 , 見(jiàn)圖 2。2. 3GS-PC和 orf 8基因攜帶情況 第 1起食物 中毒中 , 8株 O3:K6GS-PC和 orf 8基因陽(yáng)性 , 其他 血清型 GS-PC和 orf 8基因陰性 (圖 1 。 第 2起食 物中毒中 , 5株 O3:K6和 1株 O11:K36GS-PC和 orf 8基因陽(yáng)性 , 其他血清型 GS-PC和 orf 8基因陰 性 (圖 2 。2. 4PFGE 結(jié)果2. 4. 1第 1起 食 物 中 毒 的 PFGE 結(jié)果 第 1起食 物中 毒 中 , 3份 食 品 樣 和

28、 3份 肛 拭 子 均 分 離 到 O2:K28, PFGE 顯 示 , 其 中 5株 O2:K28的 帶 型 一 ·132·致 ,1株 O2:K28(1103 的帶型與其他 5株不一 致 。 8份肛拭子中都分離到 O3:K6,PFGE 帶型一 致 , O3:K6與 O2:K28、O4:K12、 O3:K25的帶型均 不一致 , 見(jiàn)圖 1。 其中 O4:K34由于復(fù)蘇時(shí)污染 , 未做 PFGE 。表 3第 2起食物中毒分離到的副溶血性弧菌血清型分布 (株 來(lái)源 (樣本編號(hào) 不同血清型的副溶血性弧菌菌落數(shù)O3:K6O4:K8O1:K56O11:K36O11:K19非副溶血性

29、弧菌菌落數(shù) a總計(jì) 鹵雞蛋 (21 000010010鹵雞腿汁 (22 000001010羅雞腿汁涂抹樣 (23 000001010切雞蛋刀涂抹樣 (24 000001010鹵雞蛋盤涂抹樣 (25 70300010病人肛拭子 (26 7310病人肛拭子 (27 1010病人肛拭子 (28 1010病人肛拭子 (29 1010病人肛拭子 (210 1010病人肛拭子 (211 1010病人肛拭子 (212 1010合計(jì)44106101040120注 :a 非 副 溶 血 性 弧菌 是 通 過(guò) 鹽 耐受試 驗(yàn) 、生 化 試 驗(yàn) 和 血清 學(xué) 鑒 定 排 除副 溶 血 性 弧菌 的 可能 , 為 未

30、 檢出 注 :菌株編號(hào) 為食 物 中 毒號(hào) 、樣 本 號(hào) 和 可 疑菌落號(hào) 的 組 合 , 如 上 圖 中 197為 第 1起 食 物 中 毒 中 第 9號(hào) 病人 肛拭子 中 挑 取 的 第 7個(gè)可 疑菌落圖 1第 1起食物中毒中分離的副溶血性弧菌的 PFGE 聚類分析圖2. 4. 2第 2起 食 物 中 毒 的 PFGE 結(jié)果 第 2起食物中毒中 ,4份肛拭子和 1份涂抹樣中分離到 O3:K6, PFGE 帶型一致 , 涂抹樣分離的 O1:K56(252 與肛拭子分離的 O1:K56(262 有 1條帶的差異 , 屬高度相關(guān)菌株 , 肛拭子中分離到的 O11:K36(2121 與 O3:K6

31、有 4條帶的差異 。 O4:K8、 O11:K19的帶型與 O3:K6有 7條以上條帶差異 。見(jiàn)圖 2。2. 4. 32起 食 物 中 毒 中 O3:K6的 PFGE 結(jié)果 2起 食物中毒中共有 13個(gè)樣品檢出 O3:K6, 每個(gè)樣品取 1株 O3:K6進(jìn)行 PFGE , 發(fā)現(xiàn) 13株 O3:K6的 PFGE 帶型基本一致 , 只有 145比其他菌株多 1條帶 , 屬于高度相關(guān)菌株 。 見(jiàn)圖 3。·232·20146403South China J Prev Med , June 2014, Vol. 40, 注 :菌株編號(hào) 為食 物 中 毒號(hào) 、樣 本 號(hào) 和 可 疑菌落

32、號(hào) 的 組 合 , 如 上 圖 中 252為 第 2起 食 物 中 毒 中 第 5號(hào)鹵雞 蛋 盤涂抹 樣 挑 取 的 第 2個(gè)可 疑菌落圖 2第 2起食物中毒中分離的副溶血性弧菌的 PFGE 聚類分析圖注 :菌株編號(hào)原則 同 圖 1和 圖 2圖 32起食物中毒中分離的副溶血性弧菌 O3:K6的 PFGE 聚類分析圖3討論本研究中同 1份食品樣本最多分離到 3種血清型的副溶血性弧菌 , 同 1份肛拭中最多分離到 2種 血清型 , 說(shuō)明副溶血性弧菌是多血清型混合存在于 食品和感染者身上 , 如果僅挑取 1個(gè)可疑菌落容易 造成漏檢 。 以第 1起食物中毒為例 , 共有 17個(gè)不同 的血清型 (不同樣

33、本中血清型個(gè)數(shù)相加 , 如果每份 標(biāo)本僅挑取 1個(gè)可疑菌落 , 將分離到 11個(gè)血清型 , 血清型漏檢率 35. 3%(6/17 , 以此類推 ,如果每份 標(biāo)本分別挑取 2、 3、 4、 5個(gè)可疑菌落 , 將分離到 11、 13、 14、 16個(gè)血清型 , 血清型漏檢率分別為 35. 3%(6/17 、 23. 5%(4/17 、 17. 6%(3/17 、 5. 8%(1/17 , 只有每份標(biāo)本挑取 12個(gè)可疑菌落 , 才能分 離到目前已知的所有血清型 , 綜合成本 -效益分析 , 本研究認(rèn)為每份樣本可以考慮挑取 5個(gè)可疑菌落 。本研究發(fā)現(xiàn) , 副溶血性弧菌是多血清型混合存 在于食品和感染者

34、身上 , 那么 , 相同樣本中分離的不 同血清副溶血性弧菌是否有遺傳關(guān)系 , 其遺傳特征 是否一致 ? 現(xiàn)對(duì)基因特征分析如下 。第 1起食物中毒中 ,3份肛拭子中 (18, 19, 110 同時(shí)檢 出 O3:K6和 O2:K28。 結(jié) 果 顯 示 , O3:K6攜帶 tdh 基因 , 不攜帶 trh 基因 , GS-PC和 orf 8基因陽(yáng)性 , 屬大流行株 , O2:K28不攜帶 tdh 和 trh基因 , GS-PC和 orf 8基因陰性 , 不屬于大流行株 。 PFGE 顯示 O3:K6和 O2:K28有 7個(gè)以上條帶變化 , 根據(jù) Tenovar 原則 10,O3:K6和 O2:K28

35、為遺傳 不相關(guān)菌株 。 水煮魚(yú) (13 分離到 3種血清型的 副溶血性弧菌 , O2:K28, O3:K25和 O4:K12, 它們不攜帶 tdh 和 trh 毒力基因 ,GS-PC和 orf 8基因陰 性 ,PFGE 顯示 , 3種不同血清型的菌株有 7個(gè)條帶 以上的變化 , 為遺傳不相關(guān)菌株 。 第 2起食物中毒中 , 餐盤涂抹樣 (25 和肛拭 子 (26 都 檢 出 O3:K6和 O1:K56, O3:K6和 O1:K56都攜帶 tdh 基因 , 不攜帶 trh 基因 , 但 O3:K6的 GS-PC和 orf 8基因陽(yáng)性 , 屬大流行株 , O1:K56的 GS-PC和 orf 8基

36、因陰性 , 不屬于大流行株 , PF-GE 顯示 O3:K6和 O1:K56有 7個(gè)以上條帶變化 , 為 遺傳不相關(guān)菌株 。就本次研究顯示 , 來(lái)自相同樣本不同血清型的·332·20146403South China J Prev Med , June 2014, Vol. 40,· 234· 華南預(yù)防醫(yī)學(xué) 2014 年 6 月第 40 卷第 3 期 No.3 South China J Prev Med ， June 2014 ， Vol. 40 ， 副溶血性弧菌屬于不同克隆， 為遺傳不相關(guān)菌株。 1 2、 1 3） 和 第 1 起食物中毒中， 食品

37、（ 1 1 、 1 9、 1 10 ） 中都分離到 O2 ： K28 ， 肛拭（ 1 8 、 它們 GSPC 和 orf 8 基 因 陰 都不攜帶 tdh 和 trh 基 因， 性， 且 PFGE 帶型基本一致， 屬于高度相關(guān)菌株。 結(jié) 合流行病學(xué)資料， 可以證明患者是食用了該食品受 到感染。雖然 O2 ： K28 不攜帶 tdh 和 trh 毒力基因， 但細(xì)菌的大量繁殖也會(huì)導(dǎo)致腹瀉等癥狀， 或者 O2 ： K28 有尚未發(fā)現(xiàn)的致病因子。 即使每份樣本挑取 20 個(gè)菌落， 仍然不能找到病 人肛拭中 O3 ： K6 的感染來(lái)源， 說(shuō)明單純靠多挑可疑 菌落是不行的， 或者感染來(lái)源并不限于這 3 種

38、食品， 還有其 他 感 染 來(lái) 源 未 找 到。 另 一 原 因 可 能 是， 非 O3 ： K6 菌株進(jìn)入人體后， 發(fā)生了基因水平轉(zhuǎn)移， 轉(zhuǎn) 11 O3 ： K6 。 Bhoopong 6 變成 等 發(fā)現(xiàn) 株副溶血性弧 菌分 別 在 小 鼠 體 內(nèi) 傳 代 50 次， 其中有 3 株菌從 O11 ： KUT 轉(zhuǎn)變成 O11 ： K15 ， 但毒力不發(fā)生改變， 而 在體外傳代 50 次， 血清型和毒力都不會(huì)發(fā)生改變， 說(shuō)明副溶血性弧菌在體內(nèi)復(fù)制過(guò)程中血清型的變異 是可能發(fā)生的。 第 2 起食物中毒中， 從鹵雞蛋盤涂抹樣 （ 2 5 ） 中 分 離 到 了 O3 ： K6 和 O1 ： K56

39、， 與病例分離的 O3 ： K6 和 O1 ： K56 各有 1 條帶的差異， 屬高度相關(guān)菌 株， 推測(cè) 是 本 次 食 物 中 毒 的 污 染 源。 肛 拭 子 （ 2 10 ） 分離到 O4 ： K8 ， 攜帶 tdh 毒力基因， 不屬于大流 行株， 推測(cè)屬于不同傳染源的感染。O11 ： K36 攜帶 tdh 毒力基因， GSPC 和 orf 8 的結(jié)果顯示屬于大流 PFGE 顯示， 行株， 與 O3 ： K6 有 5 條帶的差異， 為可 能相關(guān)菌株。鹵雞蛋（ 2 1 ） 中分離到的 O11 ： K19 ， PFGE 帶型 不攜帶 tdh 和 trh 基因， 不屬于大流行株， O4 ： K

40、8 等也不一致， 與 O3 ： K6 、 屬于不相關(guān)菌株， 不 能證明與本次食物中毒有關(guān)。 綜上所述， 前后 2 起食物中毒分離的 O3 ： K6 都 trh 陰性、 GSPC 和 orf 8 陽(yáng)性， PFGE 帶 是 tdh 陽(yáng)性、 型一致， 屬于大流行株。 ( 致謝: 感謝中國(guó) 疾病 預(yù) 防控 制 中 心 傳 染 病研究所 熱 心 提供 技 術(shù)指導(dǎo)及惠贈(zèng) H9812 標(biāo)準(zhǔn)菌株 中國(guó)食品衛(wèi) 產(chǎn)品中副溶血性弧菌污染狀況的主動(dòng)監(jiān)測(cè)J 2005 ， 17 （ 2 ） ： 97 99 生雜志， 2 Matsumoto C，Okuda J，Ishibashi M，et， al Pandemic spr

41、ead of an O3K6 Clone of Vibrio parahaemolyticus and emergence of related strains evidenced by arbitrarily primed PC and toxS sequence analysesJ Journal of Clinical Microbiology， 2000 ， 38 （ 2 ） ： 578 585 3 Nasu H，Iida T，Sugahara T，et， al A filamentous phage associated with recent pandemic Vibrio par

42、ahaemolyticus O3 ： K6 strains J Journal of Clinical Microbiology， 2000 ， 38 （ 6 ） ： 2156 2161 4 潘勁草， 陳坤 副溶血性弧菌的分子流行病學(xué)研究進(jìn)展 張蔚， J 國(guó)外醫(yī)學(xué)： 流行病學(xué) 傳染病學(xué)分冊(cè)， 2004 ， 31 （ 3 ） ： 182 184 ， 190 5 Nair GB，amamurthy T，Bhattacharya SK，et， al Global dissemination of Vibrio parahaemolyticus serotype O3 ： K6 and its serovariants J Clinical Microbiology eview ， 2007 ， 20 （ 1 ） ： 39 48 6 Kam KM，Luey CK，Parsons MB， et， al Evaluation and val