氣活血方藥對(duì)D半乳糖擬衰老大鼠免疫器官質(zhì)量及大腦皮層SOD

1、氣活血方藥對(duì)D半乳糖擬衰老大鼠免疫器官質(zhì)量及大腦皮層SOD、MDA的影響【摘要】 目的 探討益氣藥、活血藥在抗衰老過程中發(fā)揮的不同作用及機(jī)制。方法 通過腹腔注射D半乳糖（Dgal）建立大鼠衰老模型，同時(shí)模型給藥組按不同劑量灌飼中藥。50 d后處死檢測(cè)其胸腺、脾臟的重量，大腦皮層超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量。結(jié)果 與模型組相比給藥各組胸腺和脾臟重量均有增加(P0.05)。與模型組相比各給藥組均顯著提高大腦皮層SOD活性(P0.01)，降低MDA的含量(P0.01)，但作用有差別。結(jié)論 益氣藥、活血藥在延緩衰老中發(fā)揮的作用各有側(cè)重，合理劑量、共同使用效果最佳。 【關(guān)鍵詞

2、】  益氣活血方藥；衰老；免疫；SOD；MDAEffect of Formula Benefiting Qi and Activating Blood Circulation on the weights of immune organs and the levels of SOD, MDA of cortex of aged ratsLIU Fang, JIN Hong, ZHANG YunZhi.Shaanxi University of Chinese Medicine, Xianyang 712046, Shaanxi, China    【Ab

3、stract】Objective  To observe the impact of the Formula Benefiting Qi and Activating Blood Circulation on playing different roles about antiaging and to investigate its mechanisms. Methods  The model groups were established by abdomen injection with Dgal. At the same time, the model dosage

4、groups were administered with Formula Benefiting Qi and Activating Blood Circulation according to different dosage. After treatment 50 d, the weights of spleen and thymus glands were tested, and the levels of SOD and MDA of cortex were measured. Results  The weights of spleens and thymus glands

5、 of rats in the dosage groups were increased compared with those in the model group  (P0.05).Compared with those of the model group, the levels of SOD were elevated more greatly (P0.01) and the levels of MDA were decreased(P0.01) in the dosage groups, but the function was different. Conclusions

6、  Benefiting Qi drug and Activating Blood drug plays the different role in the antiaging aspect, using the two kinds of medicine together in a proper dosage is more potent than using only one kind.    【Key words】Formula Benefiting Qi and Activating Blood Circulation; Aging; Immun

7、ity; SOD; MDA“氣血失調(diào)，氣虛血瘀”致衰老學(xué)說是近年來傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)提出的關(guān)于衰老機(jī)制的新學(xué)說。此學(xué)說一經(jīng)提出受到了醫(yī)學(xué)界的廣泛關(guān)注，一些學(xué)者也作了大量的相關(guān)研究，無論從動(dòng)物實(shí)驗(yàn)還是臨床實(shí)驗(yàn)都證明益氣活血方藥能夠改善機(jī)體各系統(tǒng)器官的功能狀態(tài)從而延緩衰老1。本研究根據(jù)此學(xué)說“益氣活血”的治則和中醫(yī)“以藥效證”的原理，通過拆方，選擇益氣、活血的代表藥物作用于D半乳糖（Dgal）擬衰老大鼠模型，觀察兩種辨證在延緩衰老過程中發(fā)揮的作用，探討益氣活血法抗衰老的機(jī)制并為科學(xué)組方提供理論依據(jù)。1  材料與方法1.1&nb

8、sp; 動(dòng)物 雄性健康SD大鼠，3月齡（體重200250 g），SPF級(jí)（由復(fù)旦大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：SDXK滬20020002）。將大鼠隨機(jī)分為空白組模型組益氣藥大劑量組益氣藥小劑量組活血藥大劑量組活血藥小劑量組益氣活血大劑量組益氣活血小劑量組，每組8只。1.2  試劑 藥物：人參、黃芪、丹參、川芎（上海順天堂藥業(yè)有限公司提供）。試劑：Dgal（美國Sigma公司生產(chǎn)，購于上海捷貝思基因技術(shù)有限公司）；丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)檢測(cè)試劑盒（購于南京建成生物工程研究所，批號(hào)：20050607）。1.3  方法1.3.1 

9、; 藥物制備 益氣藥：人參、黃芪水提，制成濃縮液（1 ml=1 g生藥材），4貯存?zhèn)溆??；钛帲捍ㄜ?、丹參，?5%濃度的乙醇回流提取1,回收乙醇，制成濃縮液(1 ml=1 g生藥材),4貯存?zhèn)溆谩Ｒ鏆馑?活血藥：人參、黃芪水提；川芎、丹參用75%濃度的乙醇回流提取，回收乙醇。合并濃縮液（1 ml=1 g生藥材）,4貯存?zhèn)溆?。Dgal溶液的制備:在天平上稱量Dgal，用生理鹽水溶解配成5% Dgal溶液。1.3.2  模型制備 組：腹腔注射生理鹽水0.1 ml/100 g,連續(xù)50 d；組：腹腔注射5% Dgal生理鹽水溶液，1 ml/100 g體重,1次/d,連

10、續(xù)50 d；組：在組基礎(chǔ)上，同時(shí)用制備好的益氣藥大劑量（4.44 g·kg-1·d-1）,益氣藥小劑量（0.74 g·kg-1·d-1），活血藥大劑量（3.91 g·kg-1·d-1），活血藥小劑量（0.65 g·kg-1·d-1），益氣活血大劑量（8.34 g·kg-1·d-1），益氣活血小劑量（1.39 g·kg-1·d-1）灌胃,每10天測(cè)體重1次，調(diào)整灌胃劑量，連續(xù)50 d。1.3.3  胸腺、脾重量的測(cè)定&n

11、bsp;最末1次給藥2 h后處死實(shí)驗(yàn)大鼠，摘取胸腺、脾臟電子天平稱重。1.3.4  大腦皮層SOD、MDA的測(cè)定 在冰臺(tái)上剝?nèi)〈竽X皮層，用冷生理鹽水沖洗標(biāo)本，用冷勻漿介質(zhì)研磨配成組織勻漿，按試劑盒所述操作。1.4  統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)以x±s表示，顯著性檢驗(yàn)用方差分析（多個(gè)樣本均數(shù)的兩兩比較），用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。2  結(jié)  果2.1  胸腺、脾臟重量的測(cè)定 與模型組相比給藥各組胸腺和脾臟重量均有增加(P0.05)。其中益氣藥加活血藥的大劑量組的作用明顯優(yōu)于其他給藥組(P0.01)。見表1。

12、2.2  大腦皮層SOD、MDA的測(cè)定 與模型組相比各給藥組均顯著提高大腦皮層SOD活性(P0.01)。其中小劑量的益氣藥加活血藥的作用優(yōu)于大劑量(P0.05)，其余各給藥組之間作用無差別(P0.05)。說明單獨(dú)使用益氣藥或活血藥均有一定的提高機(jī)體SOD活性的作用，但其效果不如二者同時(shí)使用顯著。與模型組相比給藥各組均能降低機(jī)體MDA的含量(P0.01)，但作用有差別，其中益氣藥加活血藥的作用優(yōu)于其他藥物組，益氣藥加活血藥的小劑量組比大劑量組明顯，其他各給藥組之間統(tǒng)計(jì)學(xué)上作用無差別。見表1。表1  各組胸腺、脾臟重量、大腦皮層SOD、MDA的測(cè)定(略)3 討 論&n

13、bsp;   胸腺是免疫系統(tǒng)的中樞器官，對(duì)維持細(xì)胞免疫和調(diào)解免疫反應(yīng)起重要作用。機(jī)體的細(xì)胞免疫、體液免疫及非特異性免疫都和脾臟有密切關(guān)系。胸腺和脾臟的功能都和其質(zhì)量呈正相關(guān)性,且有增齡性萎縮的變化，模型組胸腺、脾臟的變化與此相符。因此，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)胸腺和脾臟的質(zhì)量可用于機(jī)體免疫功能的評(píng)價(jià)2。通過該實(shí)驗(yàn)對(duì)比觀察發(fā)現(xiàn)益氣藥和活血藥在“益氣活血”法延緩衰老中發(fā)揮著不同效用，益氣藥對(duì)免疫器官的影響大于活血藥，主要表現(xiàn)為使胸腺、脾臟增重明顯。益氣活血藥合用的效果優(yōu)于單獨(dú)使用益氣藥。益氣活血藥對(duì)免疫器官的增重作用表明二者對(duì)提高免疫力，延緩衰老有明顯效果。益氣活血藥對(duì)

14、免疫功能的影響主要表現(xiàn)為細(xì)胞免疫還是體液免疫有待進(jìn)一步的研究。    大鼠大量連續(xù)注射Dgal，可出現(xiàn)與自然衰老相似的改變，并證實(shí)Dgal誘發(fā)的自由基氧化應(yīng)激損傷是擬衰老的主要原因，可引起體內(nèi)尤其是腦組織內(nèi)自由基含量升高3。大腦皮層SOD、MDA可以反映大腦自由基產(chǎn)生和老化程度，從而反映大腦的功能狀態(tài)。實(shí)驗(yàn)表明，模型組大鼠大腦皮層SOD活性降低，MDA含量升高，說明衰老大鼠確實(shí)存在自由基代謝紊亂，抗氧化系統(tǒng)功能降低，氧化產(chǎn)物增加。單獨(dú)使用益氣藥或活血藥對(duì)提高SOD活性，減少M(fèi)DA的作用都不如二者共同使用效果明顯，且小劑量的益氣加活血藥比大劑量作用強(qiáng)。這說明適當(dāng)?shù)膭┝坎拍苁箍寡趸c氧化系統(tǒng)達(dá)到平衡，方藥中為加大療效一味增加君藥劑量是不可取的。其機(jī)制可進(jìn)一步從細(xì)胞分子水平分析。    總之，合理適量搭配益氣、活血藥可以提高機(jī)體免疫力，改善自由基代謝從而達(dá)到延緩衰老的目的。由于衰老是機(jī)體復(fù)雜綜合的生理現(xiàn)象