《硝化細(xì)菌的分離、培養(yǎng)和觀察》活動(dòng)課教案

1、硝化細(xì)菌的分離、培養(yǎng)和觀察活動(dòng)課教案一、活動(dòng)目的：硝化細(xì)菌是生物界中一類特殊的生產(chǎn)者，能進(jìn)行硝化作用參與氮素的轉(zhuǎn)化，在高中生物學(xué)教學(xué)中占有一定的地位。通過(guò)實(shí)驗(yàn)，既可增加學(xué)生對(duì)硝化細(xì)菌的認(rèn)識(shí)，又能培養(yǎng)學(xué)生的操作能力和科研能力，激發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣。二、活動(dòng)安排： 學(xué)生利用第二課堂分組活動(dòng)，活動(dòng)時(shí)間為34周。三、活動(dòng)器材：恒溫箱、高壓滅菌鍋、天平、量杯、玻棒、大試管、三角瓶（250毫升）、顯微鏡、白瓷板、萘胺試劑、二苯胺試劑、醋酸、磺胺酸，革蘭氏試劑、PH試紙、(NH4)2SO4、NaH2PO4、K2HPO4、Na2CO3、MnSO4·4H2O、MgSO4·7H2O、NaNO2、

2、NaOH(0.1N)、HCl(0.1N)、濃H2SO4、蒸餾水。四、活動(dòng)過(guò)程：（一） 配制硝化細(xì)菌培養(yǎng)液：NaNO21gMgSO4·7H2O0.03gMnSO4·4H2O0.01gK2HPO40.75gNa2CO31gNaH2PO40.25g 蒸餾水 1000ml（二）滅菌將配制好的培養(yǎng)液分裝在大試管中，每管約15毫升，堵上包有紗布的棉塞，放在高壓滅菌鍋中，15磅30分鐘滅菌備用。（三）樣品采集：采用公園下層湖水約100毫升即可（強(qiáng)調(diào)學(xué)生注意安全?。?。（四）接種：用吸管吸取樣品，每支試管接12毫升樣品。（五）培養(yǎng)：置于2830恒溫箱中靜置710天。（六）結(jié)果測(cè)定：1、配制試

3、劑：（1）萘胺試劑的配制：用天平稱取萘胺5克于100毫升醋酸(5N)中，用玻棒攪拌溶解。（2）二苯胺試劑的配制：用天平稱取0.5克二苯胺溶于100毫升濃濃H2SO4中，再加入20毫升蒸餾水中攪拌稀釋。2、NO2-的檢驗(yàn)： 在瓷盤小孔內(nèi)各加入1滴-萘胺試劑，然后加少許試驗(yàn)液，變紅色的為(+)，未變色(黃色)的為(-)。3、NO3-的檢驗(yàn)： （1）先除去培養(yǎng)物中的NO2-：方法是在培養(yǎng)物中加入醋酸58滴，使之酸化，再加入數(shù)?；前匪?，當(dāng)停止放出氣體時(shí)，再加入一?；前匪?，此過(guò)程中NO2-轉(zhuǎn)化為N2而逸出。用-萘胺試劑檢查，如不出現(xiàn)紅色，證明培養(yǎng)物中不含NO2-。（2）檢驗(yàn)NO3-的產(chǎn)生：方法是吸取培養(yǎng)物少許于白瓷板凹窩中，滴入二苯胺試劑，如有藍(lán)色出現(xiàn)，即證明有NO3-的積累。（七）富集培養(yǎng)：將測(cè)定為(+)的菌液接入裝有100毫升培養(yǎng)液的250毫升三角瓶中(培養(yǎng)液已滅過(guò)菌)，置2830恒溫箱中培養(yǎng)，待生長(zhǎng)后測(cè)定結(jié)果為(+)再接另瓶培養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng)。如此經(jīng)多次移接，可使培養(yǎng)液的亞硝化細(xì)菌和硝化細(xì)菌逐步增