骨橋蛋白在乳頭狀甲狀腺癌中的表達(dá)及其臨床意義

1、骨橋蛋白在乳頭狀甲狀腺癌中的表達(dá)及其臨床意義         09-09-20 14:37:00     作者：金沖 張啟瑜     編輯：studa20【摘要】  目的 探討骨橋蛋白在乳頭狀甲狀腺癌中的表達(dá)及意義，分析其與臨床病理特征的關(guān)系。方法 采用免疫組化SP法檢測70例乳頭狀甲狀腺癌和20例結(jié)節(jié)性甲狀腺腫中骨橋蛋白的表達(dá)。結(jié)果 骨橋蛋白在乳頭狀甲狀腺癌與結(jié)節(jié)性甲狀腺腫中的陽性表達(dá)率分別為72.86%、10.00%，兩者

2、陽性表達(dá)率有顯著性差異（P0.05），有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳頭狀甲狀腺癌中骨橋蛋白陽性表達(dá)率分別為86.11、58.82，兩者有顯著性差異（P0.05）結(jié)論 骨橋蛋白在乳頭狀甲狀腺癌中為過表達(dá)，且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。 【關(guān)鍵詞】  骨橋蛋白 乳頭狀甲狀腺癌 免疫組化【Abstract】  Objective  This study is designed to clarify the expression of osteopontin （OPN）in papillary thyroid carcinoma （PTC）and its significanc

3、e. The correlation between the expression of OPN and clinic pathologic feature of PTC is analyzed. Methods  The expression of OPN in 70 specimens of PTC and 20 specimens of nodular goiter were investigated by S-P immunohisochemistry. Result  Positive rate of OPN was significantly higher in

4、 PTC than nodular goiter (72.86% vs.10%, P0.05); The rate of OPN was significantly higher in PTC with lymph node metastasis than in PTC without lymph node metastasis (86.11% vs.58.82%, P0.05). Conclusion  OPN is over expressed in PTC closely relates with lymph node metastasis.   

5、 【Key words】  Osteopontin（OPN）  Papillary thyroid carcinoma  Immunohisochemistry    骨橋蛋白(osteopontin,OPN)是一種黏附蛋白,亦是一種細(xì)胞因子,是一個有多種功能的分泌型鈣結(jié)合磷酸化糖蛋白,相對分子質(zhì)量為41500。在不同的組織細(xì)胞中均有發(fā)現(xiàn),如腎、內(nèi)耳、蛻膜、胎盤、平滑肌、被激活的T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等。近年來報道OPN與各種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有密切關(guān)系，其在各種腫瘤中的相關(guān)作用已廣泛研究。而在乳頭狀甲狀腺癌中的表達(dá)國內(nèi)尚未見報道。作者自20

6、05年5月至2008年5月實(shí)驗通過免疫組化SP法對乳頭狀甲狀腺癌中OPN進(jìn)行檢測，以探討OPN在乳頭狀甲狀腺癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。    1  臨床資料    1.1  一般資料  選擇在臺州市中心醫(yī)院外科手術(shù)切除的乳頭狀甲狀腺癌標(biāo)本70例中男16例，女54例；年齡2576歲，平均56.6歲；其中伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移36例、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移34例；另取同期20例結(jié)節(jié)性甲狀腺腫作為對照組。    1.2  標(biāo)本制作及免疫組化染色  標(biāo)本均經(jīng)4%甲醛溶液固定,常規(guī)石臘包埋,

7、4m厚連續(xù)切片，一張行蘇木素-伊紅染色,復(fù)核病理檢查診斷，一張行免疫組化染色。鼠抗人OPN單克隆抗體（ZM0174）購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。采用免疫組化SP法檢測組織中OPN的表達(dá)。應(yīng)用鏈霉素抗生物素蛋白一過氧化酶法（SP法），DAB顯色，蘇木素復(fù)染。用已知OPN陽性乳腺癌切片作為陽性對照。    1.3  結(jié)果判定  OPN判斷陽性反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)：(1)按切片中顯色癌細(xì)胞數(shù)比例計分：0分無癌細(xì)胞顯色；1分顯色癌細(xì)胞占癌細(xì)胞總數(shù)25%；2分顯色細(xì)胞達(dá)到切片中癌細(xì)胞總數(shù)的25%50%；3分顯色細(xì)胞超過切片中細(xì)胞總數(shù)的50%。(2)按切片中

8、癌細(xì)胞顯色強(qiáng)度計分：0分細(xì)胞無顯色；1分呈淺黃色(弱染色)；2分呈棕黃色(中等染色)；3分呈棕褐色(強(qiáng)染色)。將這兩方面評分相加,計總分(06分);每例的評分均    圖1  OPN在PTC中的陽性表達(dá)(SP法×200)    為高倍鏡(×400)下,觀察5個視野,求得平均分。1+23分記為陽性，3分記為陰性。    1.4  統(tǒng)計學(xué)處理  應(yīng)用SPSS13.0軟件包對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理; 采用2檢驗;P0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。   

9、 2  結(jié)果    2.1  OPN的表達(dá)情況  70例乳頭狀甲狀腺癌中51例表達(dá)OPN，OPN表達(dá)主要定位于乳頭狀甲狀腺癌細(xì)胞胞漿中（見圖1）。對照組20例結(jié)節(jié)性甲狀腺腫中僅2例表達(dá)OPN，兩組間有顯著性差異（見表1）。    表1  乳頭狀甲狀腺癌與結(jié)節(jié)性甲狀腺腫中OPN表達(dá)的比較    nOPN陽性表達(dá)OPN陰性表達(dá)2P乳頭狀甲狀腺癌組705119結(jié)節(jié)性甲狀腺腫組202182=25.390.05     09-09-20

10、 14:37:00     作者：金沖 張啟瑜     編輯：studa20    2.2  OPN表達(dá)與乳頭狀甲狀腺癌有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系  在36例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳頭狀甲狀腺癌中31例OPN表達(dá)陽性，在34例無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳頭狀甲狀腺癌中20例OPN表達(dá)陽性。發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳頭狀甲狀腺癌組織中OPN的陽性表達(dá)率明顯高于未發(fā)生轉(zhuǎn)移的乳頭狀甲狀腺癌組織(P0.05)（見表2）。    表2  乳頭狀甲狀腺癌有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移標(biāo)本

11、中OPN表達(dá)的比較    nOPN陽性表達(dá)OPN陰性表達(dá)2P有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組36315無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組3420142=6.590.05    3  討論    骨橋蛋白(OPN)是一種含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp,簡稱RGD結(jié)構(gòu))殘基的磷酸化酸性糖蛋白分子。在不同的組織細(xì)胞中均有發(fā)現(xiàn),如腎、內(nèi)耳、蛻膜、胎盤、平滑肌、被激活的T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等。OPN在骨的重建、動脈硬化、血管重塑、血管形成、炎癥、免疫反應(yīng)等過程中均發(fā)揮重要作用。Senger于1979年首次報道OPN與腫瘤有密

12、切關(guān)系，發(fā)現(xiàn)在尿、乳汁及已發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的腫瘤患者血液中均可檢測到OPN。OPN與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移的關(guān)系逐漸受到廣大研究人員的關(guān)注，在各種腫瘤當(dāng)中得到了廣泛研究。大量研究證實(shí),OPN與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。Coppola等5采用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測350例患者腫瘤組織和113例不同部位的正常組織,結(jié)果發(fā)現(xiàn)100%胃癌細(xì)胞OPN表達(dá)陽性,85%結(jié)腸癌、82%腎盂移行細(xì)胞癌、81%胰腺癌、72%腎細(xì)胞癌、71%肺癌和子宮內(nèi)膜癌、70%食管癌、58%頭頸部鱗狀細(xì)胞癌和59%卵巢癌OPN表達(dá)陽性。并認(rèn)為OPN的表達(dá)與腫瘤的分期有關(guān)。    國外Takan

13、o等6通過實(shí)驗研究證實(shí)了OPN在甲狀腺分化型與未分化型癌中均有表達(dá)。Tunio等7用Northern blot、原位雜交、免疫組化等技術(shù)檢測,提出OPN在甲狀腺癌組織表達(dá)，而不表達(dá)于正常甲狀腺組織。本研究顯示乳頭狀甲狀腺癌組織中OPN陽性表達(dá)率明顯高于結(jié)節(jié)性甲狀腺腫組織中OPN陽性表達(dá)率，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),說明OPN在乳頭狀甲狀腺癌中為過表達(dá)，OPN參與乳頭狀甲狀腺癌的發(fā)生。提示可利用OPN在兩者表達(dá)的差異性，有利于臨床病理良惡性組織的鑒別診斷。    大量動物實(shí)驗說明OPN與腫瘤的轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系, Aritia等8研究發(fā)現(xiàn)阻斷肝細(xì)胞生長因子(HG

14、F)誘導(dǎo)OPN在腫瘤細(xì)胞的表達(dá)后,腫瘤細(xì)胞在大鼠體內(nèi)的生長受到抑制轉(zhuǎn)移灶的形成數(shù)量也明顯減少。本研究顯示發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳頭狀甲狀腺癌組織中OPN的陽性表達(dá)率明顯高于未發(fā)生轉(zhuǎn)移的乳頭狀甲狀腺癌組織(86.11、58.82，P0.05), 與Guarino9等報道OPN在甲狀腺癌組織中過量表達(dá),而且OPN表達(dá)的程度與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、腫瘤大小均有密切關(guān)系。本研究結(jié)果與之相一致，說明OPN陽性表達(dá)的乳頭狀甲狀腺癌更易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移, OPN與乳頭狀甲狀腺癌的轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系。    在腫瘤生長、侵襲及轉(zhuǎn)移過程中,大量研究表明OPN與新生血管床形成的關(guān)系密切。Hirama等

15、10發(fā)現(xiàn),用OPN基因轉(zhuǎn)染的C1300細(xì)胞能明顯刺激靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的遷移和新生血管的形成,通過CD31的免疫組化染色發(fā)現(xiàn),利用OPN基因轉(zhuǎn)染的腫瘤,其新生血管的生長速度明顯地較對照組迅速。OPN影響乳頭狀甲狀腺癌發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移的機(jī)制有可能與腫瘤的新生血管形成有著密切關(guān)系，此有待進(jìn)一步的研究。    本研究表明OPN參與了乳頭狀甲狀腺癌的發(fā)生、發(fā)展。由于OPN廣泛存在腫瘤患者的體液中,可作為一種無損傷性的腫瘤診斷及治療標(biāo)記，因此OPN可作為乳頭狀甲狀腺癌病情預(yù)后判斷的臨床指標(biāo)，并作為乳頭狀甲狀腺癌基因治療的靶點(diǎn)，值得進(jìn)一步的深入研究?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1 S

16、enger DR, Wirth DF,Hynes RO. Transformation specific secreted phosophoproteins. Nature,1980,286(5773):619621.2 Ue T, Yokozaki H, Kitadai Y,et al. Co expression of osteopontin and CD44v9 in gastric cancer. Int J Cancer, 1998,79,127132.3 Jens Koopmann, Neal S, Fedar ko, et al. Evaluation of Osteoponti

17、n as Biomarker for Pancreatic Adenocarcinoma. Cancer Epidemiology Biomarkers & Prevention,2004,13:487491.4 Nemoto H, Rittling SR, Yoshitake H,et al. Osteopontin deficiency reduces experimental tumor cell metastasis to bone and soft tissues. J Bone Miner Res, 2001,16(4):652659.5 Coppola D,Szabo M

18、,Bolware D，et al. Correlation of osteopontin expression and pathological stage across a wide variety of tumor histologies. Clin Cancer Res,2004,10(1):184190.6 Takano T,Haseqawa Y,Matsuzuka F,et al. Gene expression profiles in thyroid carcinomas.Br J Cancer,2000,83(11):14951502.7 Tunio GM,Hirota S,Nomura S, et al. Possible relation of osteopontin to development of psammoma bodies in hum