動(dòng)物細(xì)胞融合-實(shí)驗(yàn)報(bào)告(共4頁)

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上實(shí)驗(yàn)二：動(dòng)物細(xì)胞融合一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、了解動(dòng)物細(xì)胞融合的常用方法聚乙二醇誘導(dǎo)細(xì)胞融合的基本原理。2、學(xué)習(xí)化學(xué)融合的基本操作過程。二、實(shí)驗(yàn)用品1、材料雞血紅細(xì)胞2、試劑50%PEG、Hanks溶液（pH7.4）、Alsevers細(xì)胞保存液0.85%氯化鈉溶液。3、器材普通光學(xué)顯微鏡、離心機(jī)、量筒、載玻片、蓋玻片離心管、廢液缸等。三、實(shí)驗(yàn)原理細(xì)胞融合是指在自發(fā)或者誘導(dǎo)條件下，兩個(gè)或兩個(gè)以上細(xì)胞合并為雙核或者多核細(xì)胞的過程。目前人們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)有很多方法可以誘導(dǎo)細(xì)胞融合，包括病毒誘導(dǎo)融合、化學(xué)誘導(dǎo)融和和電激誘導(dǎo)融合。1、病毒誘導(dǎo)融和仙臺(tái)病毒、牛痘病毒、新城雞瘟病毒和皰疹病毒等可以

2、介導(dǎo)細(xì)胞的融時(shí)也可介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞的融合。用紫外線滅活后，這些病毒即可誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生融合。2、化學(xué)誘導(dǎo)融合很多化學(xué)試劑能夠誘導(dǎo)細(xì)胞融合，如聚乙二醇(PEG)、二甲基亞砜、山梨醇、甘油、溶血性卵磷脂、磷脂酰絲氨酸等。這些物質(zhì)能夠改變細(xì)胞膜脂質(zhì)分子的排列，在去除這些物質(zhì)之后，細(xì)胞膜趨向于恢復(fù)原有的有序結(jié)構(gòu)。在恢復(fù)過程中想接觸的細(xì)胞由于接口處脂質(zhì)雙分子層的相互親和與表面張力，細(xì)胞膜融合，胞質(zhì)流通，發(fā)生融合?；瘜W(xué)誘導(dǎo)方法，操作方便，誘導(dǎo)融合的概率比較高，效果穩(wěn)定，適用于動(dòng)、植物細(xì)胞，但對(duì)細(xì)胞具有一定的毒性。PEG是廣泛使用的化學(xué)融合劑。3、電激誘導(dǎo)融合包括電誘導(dǎo)、激光誘導(dǎo)等。其中，電誘導(dǎo)是先使細(xì)胞在電場(chǎng)中

3、極化成為偶極子，沿電力線排布成串，再利用高強(qiáng)度、短時(shí)程的電脈沖擊破細(xì)胞膜，細(xì)胞膜的脂質(zhì)分子發(fā)生重排，由于表面張力的作用，兩細(xì)胞發(fā)生融合。電誘導(dǎo)方法具有融合過程易控制、融合概率高、無毒性、作用機(jī)制明確、可重復(fù)性高等優(yōu)點(diǎn)。PEG，又名聚乙二醇，是目前應(yīng)用做多的一種化學(xué)促溶劑。其優(yōu)點(diǎn)是使用方便，活動(dòng)穩(wěn)定，容易制備和控制。四、實(shí)驗(yàn)步驟1、雞血細(xì)胞的制備與保存。2、取雞血1ml+0.85%的NaCl溶液4ml，在1000r/min的離心機(jī)內(nèi)離心5分鐘。3、將上一步的沉降血球（去上清液后，約0.1-0.2ml），加入GKN液至4ml，制成細(xì)胞懸液。4、取細(xì)胞懸液1ml稀釋到10倍，共10ml5、取上步得到的細(xì)胞懸液1ml，加0.5ml的PEG液，靜置5min后搖勻。6、吸取細(xì)胞懸液，在凹面載玻片上滴一滴，加入Janus green染液，用牙簽攪勻，染色3min后用滴管滴到蓋有蓋玻片的血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下觀察并計(jì)數(shù)。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)數(shù)結(jié)果：右上角：14個(gè)細(xì)胞核，6個(gè)融合右下角：20個(gè)細(xì)胞核，8個(gè)融合左上角：13個(gè)細(xì)胞核，7個(gè)融合左下角：10個(gè)細(xì)胞核，6個(gè)融合中間格：17個(gè)細(xì)胞核，8個(gè)融合融合率=47.3%六、 結(jié)果分析及討論1、實(shí)驗(yàn)速度較慢，雞血細(xì)胞失去活性。2、結(jié)果中由于PEG的作用，細(xì)胞變形情況較為嚴(yán)重。3、離心速度較小，時(shí)間較短使細(xì)胞融合不充分