紅曲菌株的分離純化和鑒定

1、紅曲菌株的分離純化和鑒定    【摘要】  目的對紅腐乳中的紅曲菌進行分離純化和鑒定。方法根據(jù)紅曲菌嗜酸、耐乙醇的生長特性，用含乙醇的麥芽汁、含乳酸的大米培養(yǎng)基分離紅腐乳汁中的紅曲菌，并用對數(shù)稀釋平板法進行純化。純化后的紅曲菌顯微觀察確定其屬別。依照其在MEA培養(yǎng)基上25培養(yǎng)的菌落形態(tài)特征鑒定到種。結果從紅腐乳中分離的兩個菌株經(jīng)鑒定M-1屬叢毛紅曲菌（M.pilosus），M-3屬紅曲紅曲菌（M.anka）。結論紅腐乳中分離的純培養(yǎng)為紅曲屬真菌。 【關鍵詞】  紅曲菌；分離；純化；鑒定Abstract：O

2、bjectiveTo isolate，purify and identify Monascus strains from red furu.MethodBased on eosinophilic and ethanol tolerant characteristics of Monascus，stains were isolated from red furu by 

3、culturing on malt juice medium containing alcohol and rice medium containing lactic acid.Strains were purified using logarithmic plate dilution method，and then determined genera accordi

4、ng to their micro-morphological characteristics.By culturing on malt extract agar medium with temperature of 25 degrees Celsius，strains were identified to species based on the morp

5、hological characteristics of colonies.ResultM-1strain isolated from red furu was identified as Monascus pilosus and M-2 Monascus anka.ConclusionStrains isolated from red furn are Monascus

6、60;fungi.Key words：Monascus；isolation；purification；identification    紅曲菌隸屬真菌界（Eumycophyta）子囊菌門（Ascomycota）真子囊菌綱（Euascomycetes）散子囊菌目（Eurotiales）紅曲菌科（Monascaceae）紅曲屬（Monascus）1，具有防腐，解毒；消食活血、健脾燥胃之功效2。我們根據(jù)紅曲菌嗜酸、耐乙醇的生長特性1，對市售紅腐乳中的紅曲菌進行分離純化，并對它們進行了形態(tài)學鑒定，為進一步發(fā)掘紅曲菌生物資源做了有益探索。1 

7、 材料和方法1.1  實驗材料 1.2  方法無菌條件下，紅腐乳汁經(jīng)2層紗布過濾，取0.1ml濾液于5ml麥芽汁，一式3管，空白對照1管。32培養(yǎng)，觀察。挑取麥芽汁上長出的紅色菌體少許，置于大米培養(yǎng)基中，一式3皿，空白對照1皿。32培養(yǎng)，觀察。從大米培養(yǎng)基上挑取紅色菌體少許于1ml無菌生理鹽水（NS）中，用對數(shù)稀釋平板法3，4獲得純培養(yǎng)。取純化后的紅曲菌種，點種到MEA培養(yǎng)基32培養(yǎng)成熟。在載玻片上滴加一滴蒸餾水，用解剖針挑取少許菌絲，用50乙醇浸潤，再用蒸餾水清洗一下，然后放入載玻片上的液滴中，仔細地用解剖針將菌絲分散開來，蓋上蓋玻

8、片(勿使產(chǎn)生氣泡，且不要再移動蓋玻片)，制成水浸標本片，用顯微鏡觀察。取純化后的紅曲菌種，點種到MEA培養(yǎng)基25培養(yǎng)，觀察紅曲菌落大小、形態(tài)、色澤，氣生菌絲的產(chǎn)生情況。2  結果2.1  分離 接種紅腐乳汁的麥芽汁在34d后可見白色團狀菌絲，7d后菌絲轉為紅色，培養(yǎng)液亦呈紅色，而CK管中始終無菌體生長。3d后，接種分離菌的大米培養(yǎng)基上有微量無色菌體生長，6d后菌落明顯，呈白色，7d后菌落長大，粉紅色，8d后菌落更大，紅色。2.2  純化 將來自大米培養(yǎng)基的真菌稀釋液涂布于麥芽汁平板培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)菌體生長良好、無雜菌，并

9、出現(xiàn)明顯的單菌落，編號為M-1M-3。2.3  形態(tài)學鑒定 顯微鏡觀察所分離的菌絲具不規(guī)則分枝，多核，有橫隔，含油滴，透亮或有深淺不一的紅、褐色色素，分生孢子著生在菌絲及其分枝的頂端，孢子單生或鏈狀，閉囊殼球形，有柄（圖1）。    純化后的M-1菌株點種到MEA培養(yǎng)基，25培養(yǎng)，初期為圓形白色小菌落，7d后菌落圓形，直徑28mm，米色，氣生菌絲叢毛狀，菌落背面紅色，有放射狀條紋（圖2）。    純化后的M-3菌株接種到MEA培養(yǎng)基，25培養(yǎng)，菌落初期為圓形，白色，7d后菌落直徑8mm

10、，鐵銹色，中間裂開，邊緣較整齊，質(zhì)地致密；25d后，菌落直徑22mm，深銹色，中間隆起，裂開，邊緣有缺刻，無氣生菌絲，菌落背面深赭色，有放射狀條紋（圖2）。3  結論    紅腐乳汁接種到含乙醇的麥芽汁中長出的菌產(chǎn)紅色色素、菌絲致密、成團生長，初步判斷為紅曲菌，再用含乳酸的大米培養(yǎng)基篩選祛除雜菌。這與紅曲菌的生態(tài)習性有關，同時也證實了在PH2.5和高達10%乙醇的培養(yǎng)條件下一般只有紅曲菌才能生長。將分離菌株的顯微形態(tài)特征與紅曲菌(Monascus)的屬征1相對比，兩者基本吻合，進一步證實我們所分離的純培養(yǎng)M-1、M-3確為紅曲屬真菌。將純化后的分離菌株點種到MEA培養(yǎng)基，25培養(yǎng)，觀察其菌落生長形態(tài)特征，對照李鐘慶等的紅曲菌屬分類檢索表1，將M-1菌株鑒定為叢毛紅曲菌（Monascus.pilosus），M-3菌株鑒定為紅曲紅曲菌（Monascus.anka）。這不僅豐富了紅曲菌種庫，而且為進一步發(fā)掘紅曲菌生物資源奠定基礎。