穿心蓮種子蛋白質(zhì)電泳鑒定的初步研究

1、穿心蓮種子蛋白質(zhì)電泳鑒定的初步研究(1)    【摘要】  目的探討SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)對(duì)穿心蓮種子進(jìn)行鑒別的可行性，為穿心蓮種子鑒別及育種研究提供科學(xué)依據(jù)。方法 采用聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)，對(duì)廣東省幾種不同來源和不同采收期的穿心蓮種子進(jìn)行可溶性蛋白質(zhì)電泳研究。結(jié)果 不同產(chǎn)地的穿心蓮種子蛋白質(zhì)電泳圖譜之間在譜型和譜帶的強(qiáng)弱、蛋白質(zhì)相對(duì)含量上均有一定的差異，不同采收期穿心蓮種子蛋白質(zhì)電泳在蛋白質(zhì)譜帶的強(qiáng)弱上有一定差異。結(jié)論 聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)可用于穿心蓮種子鑒定。 【關(guān)鍵詞】  穿心蓮;聚丙烯酰胺凝膠電泳;種子;鑒

2、定Abstract:ObjectiveTo explore the feasibility of seed identification with SDS-PAGE,and provide scientific basis for breeding of Andrographis paniculata.Methods SDS-PAGE polyacrylamide gel electrophoresis technology was adopted for analyzing soluble proteins of several different sources and different

3、 collection time in Guangdong.Results Significant differences were observed in spectral pattern,contents of proteins and intensity of bands of Andrographis paniculata from different origins,and in spectral degree between various collection time.Conclusion Polyacrylamide gel electrophoresis technolog

4、y can be used for seed identification of Andrographis paniculata seeds.Key words:Andrographis paniculata; polyacrylamide gel electrophoresis; seed; identification穿心蓮Andrographis paniculata(Burm.f.)Nees為爵床科植物，具有清熱解毒、涼血消腫等功能,臨床上常用于急性菌痢、胃腸炎、感冒、流腦、氣管炎、高血壓等疾病的治療1。研究表明，不同產(chǎn)地、不同采收期的穿心蓮性狀、成分差異較大，種子混雜現(xiàn)象也較嚴(yán)重2。

5、中藥材種子所含蛋白質(zhì)的種類和數(shù)量攜帶了其長期演化的遺傳特征，具有很高的穩(wěn)定性和專屬性，其真?zhèn)魏推贩N鑒別是中藥集約化生產(chǎn)的重要環(huán)節(jié)和前提。1991年國際種子檢驗(yàn)協(xié)會(huì)將蛋白質(zhì)電泳方法正式定為標(biāo)準(zhǔn)的品種鑒定方法。目前，蛋白質(zhì)電泳技術(shù)迅速發(fā)展和日臻完善，但大多應(yīng)用于玉米、棉花等植物中3-4，應(yīng)用于藥用植物的研究尚為數(shù)不多5-7。筆者收集了幾種不同產(chǎn)地和不同采收期的穿心蓮種子，利用蛋白質(zhì)電泳技術(shù)對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，旨在為穿心蓮種質(zhì)資源的保護(hù)、評(píng)價(jià)，種子的鑒定及育種提供參考依據(jù)。1材料與方法1.1材料采集4個(gè)不同地區(qū)和同一地區(qū)3種不同采收期的成熟穿心蓮果實(shí)，室溫下陰干，待果皮自然裂開彈出種子。收集于種子瓶中置室

6、溫陰涼處保存，各種子來源見表1。1.2儀器與試劑DYY-11型電泳儀(北京市六一儀器廠)，DYCZ-24DN雙垂直平電泳槽(北京市六一儀器廠)，TDL80-2B臺(tái)式離心機(jī)、HK3300H超聲波清洗器(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司)，PHS-30酸度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司)，HC-TP12-2型架盤藥物天平(北京醫(yī)用天平廠)。表1穿心蓮種子來源2 mol·L-1 Tris-HCl(pH=8.8)，1 mol·L-1Tris-HCl(pH=6.8)，10%(質(zhì)量濃度)SDS，50%(體積分?jǐn)?shù))甘油，1%(質(zhì)量濃度)溴酚藍(lán)，考馬斯亮藍(lán)R-250染液(取0.04 g考馬斯亮藍(lán)R-

7、250，加入甲醇18 mL、蒸餾水18 mL和冰醋酸4 mL，即得)，考馬斯亮藍(lán)脫色液(10 mL甲醇、10 mL冰醋酸和80 mL蒸餾水混勻)，30%(質(zhì)量濃度,下同)丙烯酰胺，0.8%N，N-甲叉雙丙烯酰胺，10%SDS，10%過硫酸銨，1%溴酚藍(lán)。1.3方法本篇論文由網(wǎng)友投稿，讀書人只給大家提供一個(gè)交流平臺(tái)，請(qǐng)大家參考，如有版權(quán)問題請(qǐng)聯(lián)系我們盡快處理。2結(jié)果與分析2.1電泳結(jié)果不同產(chǎn)地和不同采收期的穿心蓮種子蛋白的SDS-PAGE電泳結(jié)果見圖1，根據(jù)此繪制的電泳圖譜見圖2。結(jié)果顯示，不同來源、同一產(chǎn)地不同采收期的穿心蓮種子可溶性蛋白質(zhì)電泳圖譜共有11條共有特征帶，且譜帶清晰，Rf值分別為

8、：0.460、0.471、0482、0.495、0.512、0.524、0.538、0.825、0.921、0937，表示其具有的共同遺傳基礎(chǔ)，可作為鑒定穿心蓮種子的重要標(biāo)記。以一級(jí)帶、二級(jí)帶作為主要分析特征，不同產(chǎn)地及不同采收期的穿心蓮種子蛋白質(zhì)譜帶具有多條共同譜帶，但廣東省農(nóng)科院白云基地采收種子的電泳譜帶數(shù)目與其他種子有較大差異，有10條特征帶。在三級(jí)帶、四級(jí)帶和五級(jí)帶上，一些譜帶的數(shù)目、遷移率有一定差異。2.2 蛋白相對(duì)百分含量為了分析蛋白表達(dá)量，利用凝膠圖像分析軟件Band Scan對(duì)電泳蛋白圖譜進(jìn)行分析，其中由于有部分譜帶的灰度值太低，難以測(cè)出其所在區(qū)域的蛋白含量?？蓽y(cè)得的目的蛋白占

9、總蛋白的百分?jǐn)?shù)結(jié)果見表2。PSa6121af.分別是編號(hào)為af的穿心蓮種子圖1穿心蓮種子可溶性蛋白電泳圖譜PSa6122;S*2圖2穿心蓮種子可溶性蛋白電泳圖譜分析圖結(jié)果表明，不同來源地和不同采收期的穿心蓮種子蛋白表達(dá)量亦存在差異。3討論穿心蓮?fù)ǔＪ欠N子繁殖,故種子的鑒定及其品質(zhì)極為重要。蛋白質(zhì)是基因表達(dá)產(chǎn)物，具有一定的穩(wěn)定性，但亦會(huì)受環(huán)境的影響而發(fā)生基因的變異，形成不同的生態(tài)型甚至變種。本研究首次利用SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)，對(duì)廣東省4個(gè)不同來源地的穿心蓮種子及同一產(chǎn)地不同采收期的穿心蓮種子水溶性蛋白進(jìn)行了蛋白質(zhì)電泳的初步研究。研究結(jié)果表明，SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝膠電泳技

10、術(shù)可作為鑒定穿心蓮種子的生物指征。此外，同一來源不同采收期的穿心蓮種子蛋白質(zhì)電泳圖譜在譜帶數(shù)目、遷移率上具有較高相似性，在蛋白質(zhì)相對(duì)含量上則呈現(xiàn)出一定的差異，提示可以作為穿心蓮種子成熟以及最佳采收期的生化標(biāo)記，相關(guān)的研究將在下一步工作開展。表2穿心蓮種子可溶性蛋白電泳的蛋白表達(dá)量本研究表明了利用聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)對(duì)穿心蓮種子進(jìn)行鑒定及種子品質(zhì)研究的可行性，為進(jìn)一步研究穿心蓮種質(zhì)資源的保護(hù)、評(píng)價(jià)及育種提供參考依據(jù)。【參考文獻(xiàn)】  1 張濤.穿心蓮的研究進(jìn)展J.中藥材,2000,23(6):366-368.2 陳元生,王振華,羅戰(zhàn)勇,等.穿心蓮優(yōu)良種質(zhì)篩選研究J.現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐,2006,20(4):3-7.3 張春慶,伊燕枰,高榮岐,等.棉花種子蛋白多態(tài)性與品種鑒定方法的研究J.中國農(nóng)業(yè)科學(xué),1998,31(4):16-19.4 蘇萍,戴常軍,任紅波,等.玉米蛋白質(zhì)組分電泳特性的比較研究J.黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué),2002(1):7-9.5 石俊英,孫儈俐,荊雪梅.16 種中藥及其不同炮制品的電泳分析J.中國中藥雜