全自動(dòng)生化分析儀試劑存在的問(wèn)題及解決方法

1、醫(yī)藥類(lèi)期刊中國(guó)民族民間醫(yī)藥雜志一全自動(dòng)生化分析儀試劑存在的問(wèn)題及解決方法 張仲全【摘要】目前生化試劑種類(lèi)繁多 , 如何正確合理的使用 , 充分提高檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性 , 以便 更好的為臨床診斷服務(wù)?！娟P(guān)鍵詞】全自動(dòng)生化分析儀 ; 試劑 ; 問(wèn)題【中圖分類(lèi)號(hào)】 R446.61【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】 A 【文章編號(hào)】 1007-8517(200912-0071-02 1優(yōu)質(zhì)的儀器用水優(yōu)質(zhì)的儀器用水是使用好檢驗(yàn)試劑的一個(gè)十分重要環(huán)節(jié)之一。因?yàn)闇y(cè)定離子類(lèi)的項(xiàng)目 :比如銅、鐵、鋅、鈣、 Mg 、磷。這些項(xiàng)目在使用過(guò)程中 , 儀器用水的質(zhì)量相當(dāng)重要 , 雖然現(xiàn)在 一般醫(yī)院的生化儀都帶有制水系統(tǒng) , 但制水系統(tǒng)基本都

2、是制備去離子水 , 離子交換樹(shù)脂在使用 一段時(shí)間后交換能力明顯下降 , 需要定期進(jìn)行更換 , 否則制備的水離子含量多 , 電導(dǎo)率偏高。 使 用含離子超標(biāo)的水沖洗儀器 , 直接影響檢驗(yàn)結(jié)果。再如血氨、二氧化碳項(xiàng)目 , 如果水質(zhì)不好 , 儀器用水中本身含氨和二氧化碳就很高 , 則檢測(cè)該項(xiàng)目的結(jié)果也會(huì)受到嚴(yán)重的影響。還有如 果血清中含有 GLDH, 而儀器用水存在氨時(shí) , 可消耗 NADH, 使利用 NADH 的酶聯(lián)連續(xù)監(jiān)測(cè)法 結(jié)果偏高。 解決辦法 :定期監(jiān)測(cè)水質(zhì) , 當(dāng)儀器用水的電阻小于 1.0MQ 時(shí)要更換離子交換樹(shù)脂或 活性炭。2標(biāo)本的及時(shí)分離及測(cè)定標(biāo)本的及時(shí)分離及測(cè)定是用好檢驗(yàn)試劑的首要環(huán)節(jié)

3、因?yàn)榉彩抢?NADH 轉(zhuǎn)化為 NAD+變化率來(lái)檢測(cè)其物質(zhì)含量的試驗(yàn)都或多或少受到血液存放時(shí)間的影響。 原因是全血存放時(shí)間 越長(zhǎng) , 紅細(xì)胞利用血清中的糖進(jìn)行無(wú)氧酵解產(chǎn)生丙酮酸 , 丙酮酸使 NADH 轉(zhuǎn)化為 NAD+,這樣 使測(cè)定結(jié)果假性升高。 解決辦法 :作好與臨床的溝通 , 對(duì)抽血人員和標(biāo)本運(yùn)送人員 (傳遞人員 進(jìn)行培訓(xùn) ; 及時(shí)分離血清并及時(shí)檢測(cè) ; 也可將全自動(dòng)生化分析儀上的延遲時(shí)間設(shè)置大于 60秒 , 這樣試劑在延遲期內(nèi)消除丙酮酸的干擾 , 可完全避免假陽(yáng)性結(jié)果的出現(xiàn)。3交叉污染3.1生化分析儀本身的清洗問(wèn)題造成的交叉污染在使用全自動(dòng)生化分析儀時(shí) , 儀器的交 叉污染現(xiàn)象是引起實(shí)驗(yàn)

4、結(jié)果偏離的一個(gè)原因。 由于全自動(dòng)生化分析儀試劑針需要接觸各種試 劑 , 一般難以徹底清洗干凈 , 所以容易造成分析項(xiàng)目的攜帶污染 . 而生化項(xiàng)目的測(cè)定往往僅需 要幾微升樣本 , 試劑往往需要幾百微升 , 尤其在沒(méi)有自動(dòng)沖洗程序的流動(dòng)池式生化分析儀上 , 由于前帶現(xiàn)象的存在 , 如果前一個(gè)樣本為高值樣本 , 則接后的第一個(gè)低值標(biāo)本結(jié)果應(yīng)慎重報(bào) 告。不僅沒(méi)有沖洗程序的生化分析儀器上有這種現(xiàn)象 , 就是具有自動(dòng)沖洗程序的全自動(dòng)生化 分析儀也有交叉污染 , 例如 Beckman 全自動(dòng)生化分析儀 CX4, 它的試劑吸針 (Probe、 樣品吸針 及反應(yīng)攪拌棒是利用高壓沖洗液沖洗 , 然后用高壓壓縮空氣

5、吹干 , 有時(shí)由于洗液壓力和壓縮空 氣的壓力偏低 , 使試劑吸針、樣品吸針及反應(yīng)混勻棒沖不干凈、吹不干 , 從而導(dǎo)致反應(yīng)池之間 相互污染、試劑間交叉污染 , 使檢驗(yàn)結(jié)果偏離。另一個(gè)值得注意的問(wèn)題是許多生化儀器由于 長(zhǎng)期頻繁的利用 , 使加樣針和試劑針的注射器磨損加重或注射器的 " 特氟龍 " 吸頭不及時(shí)更換 , 使吸樣針或試劑針密封層增大 , 產(chǎn)生泄漏現(xiàn)象也是造成樣本間及試劑間相互污染的一個(gè)重要 原因。試劑吸樣或樣品吸樣不準(zhǔn)確 , 通常導(dǎo)致利用速率法測(cè)試的標(biāo)本系統(tǒng)偏低或偏高。眾所 周知 , 速率法計(jì)算因子是由加樣體積和試劑體積參與確定的 , 如果加樣體積或加試劑體積不準(zhǔn) ,

6、導(dǎo)致真正速率計(jì)算因子和理論計(jì)算因子偏離 , 從而使檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。解決辦法 :定期進(jìn)行 儀器維護(hù)保養(yǎng) ; 按要求及時(shí)更換零部件 ; 定期對(duì)儀器進(jìn)行校準(zhǔn) ; 全自動(dòng)生化分析標(biāo)本和 試劑用量少 , 殘存少量即會(huì)影響測(cè)試結(jié)果 , 每天應(yīng)用無(wú)水乙醇擦洗并定期更換干燥棒 , 保證比 色杯清洗后不留殘液 , 避免比色杯的交叉污染。3.2檢驗(yàn)項(xiàng)目間的交叉污染在全自動(dòng)生化分析儀的使用中 , 我們發(fā)現(xiàn)一個(gè)項(xiàng)目會(huì)影響緊 隨其后項(xiàng)目的測(cè)試結(jié)果 , 造成這種影響的原因之一是一種試劑中含有另一試驗(yàn)的測(cè)定物質(zhì)而 直接干擾其測(cè)試結(jié)果。 原因之二是一種試劑中含有改變另一試驗(yàn)反應(yīng)條件或影響其反應(yīng)進(jìn)程 的物質(zhì)而間接干擾其測(cè)試結(jié)果

7、。 比如 :在 TP 試劑中含有大量的 CuSO4, 如果將 Cu 放在 TP 項(xiàng) 目的后面檢測(cè) , 會(huì)使檢測(cè)結(jié)果偏高或重復(fù)性差。 再如 P 放在含有磷酸鹽的項(xiàng)目后面 ,TBA 放在 含有膽酸鹽的項(xiàng)目后面都會(huì)使檢測(cè)結(jié)果偏高或重復(fù)性差。 GLU 放在 CK 和 CK-MB 的項(xiàng)目后 面可能會(huì)使檢測(cè)結(jié)果偏高或重復(fù)性差。 LDH 放在 ALT 和 AST 的項(xiàng)目后面可能會(huì)使檢測(cè)結(jié)果 偏高或重復(fù)性差。 Mg 放在 ALP 等含有鎂離子項(xiàng)目后面可能會(huì)使檢測(cè)結(jié)果偏高或重復(fù)性差。 Ca 放在 a-Amy 項(xiàng)目后面可能會(huì)使檢測(cè)結(jié)果偏高或重復(fù)性差。 Mg 試劑 (CALMAGITE法 中 含有 EGTA, 會(huì)干

8、擾 Ca 的測(cè)定結(jié)果。另外我們發(fā)現(xiàn)相鄰兩個(gè)項(xiàng)目的 PH 值相差太大或反應(yīng)對(duì) PH 要求嚴(yán)格的項(xiàng)目 , 也會(huì)對(duì)測(cè)定的結(jié)果產(chǎn)生影響 , 比如 TP 和 Alb 之間 PH 相差較大 , 會(huì)互相干 擾 ,TBA 放在 Alb 后面測(cè)定 , 會(huì)使測(cè)定結(jié)果偏低等等。 解決辦法 :調(diào)整實(shí)驗(yàn)的前后順序來(lái)消除 這種影響 ; 在造成污染的項(xiàng)目和受污染的項(xiàng)目之間設(shè)置清洗劑并設(shè)定進(jìn)行清洗的次數(shù)。 4正確的參數(shù)設(shè)置也是用好檢驗(yàn)試劑的一個(gè)關(guān)鍵因素現(xiàn)代化分析儀上通常有分析程序供用戶(hù)設(shè)定 , 包括樣品量、試劑量、波長(zhǎng)、分析方式和 延遲時(shí)間、 測(cè)試時(shí)間的設(shè)定等。 下面我們就延遲時(shí)間和加樣程序的設(shè)定來(lái)說(shuō)明正確使用分析 參數(shù)對(duì)于

9、正確運(yùn)用試劑的作用。比如肌酐苦味酸測(cè)定法 , 我們?cè)谠O(shè)定延遲時(shí)間時(shí)應(yīng)注意到苦 味酸在堿性條件下 50秒前首先快速與如乙酰乙酸等快反應(yīng)物質(zhì)產(chǎn)生紅色化合物 , 而在 120秒 后堿性苦味酸又能與慢反應(yīng)物質(zhì)產(chǎn)生陽(yáng)性干擾 , 解決辦法 :最好設(shè)定延遲時(shí)間為 5060秒之間 , 測(cè)定時(shí)間小于 60秒 , 這樣就充分消除了快反應(yīng)和慢反應(yīng)干擾 , 從而檢測(cè)到真正肌酐含量。5校準(zhǔn)液的正確使用由于目前生產(chǎn)廠家提供的校準(zhǔn)液并非通用的 , 只適用于某一特定的分析系統(tǒng)。同一項(xiàng)目 不同方法學(xué)之間有很大差異 , 同一項(xiàng)目不同方法學(xué)的校準(zhǔn)液更不能混用 , 但是在臨床檢驗(yàn)中經(jīng) 常會(huì)發(fā)生膽紅素釩酸鹽法用重氮法的校準(zhǔn)液校準(zhǔn) ,

10、乳酸脫氫酶 L-P 法用 P-L 法校準(zhǔn)液校準(zhǔn)。 TBA 循環(huán)酶法用比色法校準(zhǔn)液校準(zhǔn)等都會(huì)造成測(cè)定結(jié)果不準(zhǔn)確。另外同一方法學(xué) , 不同廠家 的校準(zhǔn)品和試劑都會(huì)有所差異。解決辦法 :建議結(jié)合各實(shí)驗(yàn)室條件選擇適合自已實(shí)驗(yàn)室的 校準(zhǔn)品 , 如有條件可進(jìn)行系統(tǒng)溯源 ; 建立滿(mǎn)足在同一方法學(xué)、同一測(cè)定條件、與理論計(jì)算的 factor 值差異不大 , 沒(méi)有發(fā)現(xiàn)有明顯影響因素 , 方可進(jìn)行校正測(cè)定 ; 建立一個(gè)可靠的參考系統(tǒng) 作為準(zhǔn)確性基礎(chǔ) , 然后將準(zhǔn)確性轉(zhuǎn)移到 " 使用方法 " 測(cè)定中去 , 使 " 使用方法 " 測(cè)定結(jié)果可溯源到 參考系統(tǒng)所提供的準(zhǔn)確性基礎(chǔ)上來(lái)。

11、在實(shí)現(xiàn)溯源性目標(biāo)過(guò)程中 , 永遠(yuǎn)以患者新鮮標(biāo)本為實(shí)驗(yàn) 對(duì)象 , 以方法學(xué)對(duì)比試驗(yàn)方法為驗(yàn)證手段。 采用回歸方程進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析 , 斜率接近 1, 截距較小 , 說(shuō)明 " 使用方法 " 對(duì)標(biāo)本測(cè)定結(jié)果和溯源目標(biāo)參考系統(tǒng)對(duì)標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果非常接近 , 檢測(cè)結(jié)果可 靠。6抗凝劑的使用目前臨床上常用的抗凝劑有 EDTA.2K 、肝素、草氨酸鈉等 ,TBA 和 AFU 不能用肝素抗凝劑 , 因?yàn)楦嗡貢?huì)使 TBA 和 AFU 試劑發(fā)生混濁 , 導(dǎo)致吸光度假性偏高 , 從而使檢測(cè)結(jié)果偏高。 解決辦法 :認(rèn)真參閱試劑說(shuō)明書(shū) ; 作好與抽血人員之間的溝通和培訓(xùn) , 使抽血人員知道什 么項(xiàng)目用何種標(biāo)

12、本。7混成單一試劑的問(wèn)題比如酶法肌酐試劑 , 第一步 R1中的酶要消除樣品中內(nèi)源性肌酸的干擾 , 如果混成單一試 劑 , 則會(huì)使檢測(cè)結(jié)果偏高 , 消除法 HDL 、 LDL 也不能混成單一試劑 , 因?yàn)樗鼈兌家謩e清除 HDL 和 LDL 以外的脂蛋白 , 從而達(dá)到檢測(cè)的目的 , 如果混成單一試劑 , 則會(huì)使測(cè)定的 HDL 和 LDL 不準(zhǔn)確。 另外 , 有的試劑混成單一試劑后 , 穩(wěn)定性和抗干擾能力也會(huì)明顯下降。 解決辦法 :在儀器通道或試劑位允許的情況下盡量使用雙試劑 ; 如一定要使用單一試劑 , 最好選擇試 劑廠家針對(duì)部份項(xiàng)目專(zhuān)門(mén)生產(chǎn)好的單一試劑。8試劑開(kāi)瓶的問(wèn)題隨著全自動(dòng)生化分析儀的普

13、及 ," 開(kāi)瓶穩(wěn)定性 " 也隨之受到了大家的重視 , 但是就目前有的 試劑方法學(xué)來(lái)講 , 還達(dá)不到人們所要求的試劑開(kāi)瓶后在儀器內(nèi)放很長(zhǎng)時(shí)間不需要定標(biāo) , 比如 ALP 、 TP 、 GSP 等 PH 為堿性的試劑 , 開(kāi)瓶后試劑會(huì)吸收空氣中的二氧化碳 , 使試劑本身的 PH 值下降 , 如果長(zhǎng)時(shí)間開(kāi)瓶不定標(biāo)或校準(zhǔn) , 會(huì)使檢測(cè)結(jié)果發(fā)生偏離 , 在國(guó)外有的項(xiàng)目有明文規(guī)定 , 必須 72小時(shí)之內(nèi)定標(biāo) , 比如 BUN 。但是在國(guó)內(nèi)的某些實(shí)驗(yàn)室為了方便 , 很長(zhǎng)時(shí)間都不作校準(zhǔn) , 導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果的不準(zhǔn)確。解決辦法 :了解試劑的特性 , 及時(shí)對(duì)部份項(xiàng)目進(jìn)行校準(zhǔn) ,2. 對(duì)于每天標(biāo) 本

14、量不多的醫(yī)院 , 可按 12天的用量取用試劑放入儀器。9不同批號(hào)試劑相混的問(wèn)題目前將不同批號(hào)的試劑混合在一起使用的現(xiàn)象在檢驗(yàn)中經(jīng)常發(fā)生 , 當(dāng)然這一方面是為了 節(jié)省成本 , 另一方面為了方便。但是不管是什么品牌、什么試劑 , 由于不同批號(hào)的試劑生產(chǎn)時(shí) 間不同 , 試劑中工具酶的活性會(huì)有差異 , 會(huì)發(fā)生水解的底物濃度隨時(shí)間長(zhǎng)短也會(huì)不同。因此混 在一起使用而又不定標(biāo) , 可能會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果的不準(zhǔn)確。還有如果有的試劑開(kāi)瓶時(shí)間太長(zhǎng) , 空 氣中的灰塵或細(xì)菌會(huì)進(jìn)入瓶中 , 由于有的試劑含有大量的蛋白質(zhì)和鹽 , 是細(xì)菌生長(zhǎng)的最好條件 , 雖然有的試劑添加了防腐劑 , 但防腐劑的防腐也是有一定限度的 , 而且絕大多數(shù)廠家的試劑中 是沒(méi)有加防霉劑的。 解決辦法 :不同批號(hào)試劑建議不要混用