磷酸川芎嗪微透析體內(nèi)回收率的研究

1、磷酸川芎嗪微透析體內(nèi)回收率的研究(1)                     作者：葉勇， 周莉玲， 晏亦林，黃秋潔【摘要】  目的測(cè)定磷酸川芎嗪微透析體內(nèi)回收率并對(duì)其穩(wěn)定性進(jìn)行考察。方法采用反透析法測(cè)定回收率，考察流速、濃度對(duì)回收率的影響。結(jié)果反透析法測(cè)定的體內(nèi)回收率與媒介中磷酸川芎嗪的濃度無(wú)關(guān)，穩(wěn)定性良好。結(jié)論微透析取樣技術(shù)可用于磷酸川芎嗪的藥動(dòng)學(xué)研究，體內(nèi)研究的反透析法可作為微透析研究中磷

2、酸川芎嗪回收率的測(cè)定方法。 【關(guān)鍵詞】  磷酸川芎嗪 微透析 體內(nèi)回收率Abstract:ObjectiveTo determine the in vivo recovery of tetramethylpyrazine phosphate(TMPP) in microdialysis probes and to study its stabilityMethods The recovery of TMPP was detected by retrodialysis methodThe effect of flow rates and concentrations on recove

3、ry was studiedResultsTMPP recovery was independent of TMPP concentration in the external medium by using retrodialysis methodTMPP recovery had good stabilityConclusionMicrodialysis sampling can be used for the pharmacokinetic study of TMPP and retrodialysis method can be used for the determination o

4、f TMPP recovery in vivoKey words:Tetramethylpyrazine phosphate(TMPP)；  Microdialysis；  In vivo recovery    微透析(Microdialysis，MD)技術(shù)是以透析原理作為基礎(chǔ)的在體取樣技術(shù)，是在非平衡條件(即流出的透析液中待測(cè)化合物的濃度低于它在探針膜周圍樣品基質(zhì)中濃度)下，灌注埋在組織中微透析探針，組織中待測(cè)化合物沿濃度梯度逆向擴(kuò)散進(jìn)入透析液，被連續(xù)不斷地帶出，從而達(dá)到從活體組織中取樣的目的,它是一種動(dòng)態(tài)連續(xù)的取樣方法1。近年來(lái)，它在藥代

5、動(dòng)力學(xué)研究領(lǐng)域，尤其是在藥物分布及代謝研究中有重要應(yīng)用，發(fā)展速度極快。川芎嗪(Tetramethylpyrazine，TMP)是中藥川芎中的主要活性生物堿，磷酸川芎嗪(Tetramethylpyrazinephosphate，TMPP)為其磷酸鹽，臨床上廣泛用于缺血性腦血管病的治療。作者擬采用微透析技術(shù)研究磷酸川芎嗪在體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)行為，因此有必要測(cè)定TMPP體內(nèi)回收率來(lái)評(píng)價(jià)其體內(nèi)微透析采樣的可行性，本試驗(yàn)采用微透析技術(shù)對(duì)磷酸川芎嗪在大鼠體內(nèi)的回收率進(jìn)行了相關(guān)研究，為進(jìn)一步采用微透析技術(shù)探討磷酸川芎嗪在體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)行為提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1  儀器與試藥   

6、高效液相色譜儀:Dionex Summit P680 (DIONEX公司)，微透析設(shè)備(Sweden CMA公司)：微透析探針CMA/12 Microdialysis Probe:膜外徑0.5 mm，活性透析膜長(zhǎng)度4 mm，分子量截留值為20kD；CMA/20 Microdialysis Probe：膜直徑0.5 mm,活性透析膜長(zhǎng)度為10 mm,分子量截留值為20kD;灌注器推進(jìn)泵(CMA 402 Syringe Pump),灌注器(CMA 1.0 ml Exmire Microsyringe，MS-GAN100)。磷酸川芎嗪對(duì)照品購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所(批號(hào)：100845-200501

7、)。SD大鼠（廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)SCXK粵2006-003）。色譜甲醇(DIMA公司)，水為純水，其他試劑為分析純。2  方法2.1  色譜條件色譜柱為Phenomenex Luna C18(4.6 mm×250 mm,5 m);流動(dòng)相為甲醇水（32,V/V）;流速為1.0 ml·min-1;檢測(cè)波長(zhǎng)：295 nm;柱溫室溫；進(jìn)樣量20 l。2.5  體內(nèi)微透析試驗(yàn)    結(jié)果表明，隨著流速的增加，TMPP體內(nèi)回收率呈降低趨勢(shì)，這為反透析法測(cè)定TMPP體內(nèi)回收率提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。本篇論文由網(wǎng)友投稿，

8、讀書人只給大家提供一個(gè)交流平臺(tái)，請(qǐng)大家參考，如有版權(quán)問(wèn)題請(qǐng)聯(lián)系我們盡快處理。4  討論    微透析取樣技術(shù)可以在許多活體組織及細(xì)胞外液中在體取樣，在藥物動(dòng)力學(xué)及藥效學(xué)研究中具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。相對(duì)于其他生物取樣技術(shù)，微透析技術(shù)具有以下幾個(gè)方面的顯著特點(diǎn)：時(shí)間分辨性，可連續(xù)跟蹤體內(nèi)多種化合物量隨時(shí)間的變化；空間分辨性，取樣無(wú)需勻漿過(guò)程，可真實(shí)代表取樣位點(diǎn)目標(biāo)化合物的濃度，同時(shí)在體內(nèi)不同部位插入探針可研究目標(biāo)化合物的體內(nèi)分布;提供不含蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)的游離態(tài)小分子化合物，對(duì)藥物研究具有重要意義；樣品因不含蛋白質(zhì)、酶等大分子物質(zhì)，可不經(jīng)預(yù)處理直接用于測(cè)定。此外

9、，應(yīng)用MD技術(shù)研究藥動(dòng)學(xué)勿需采血即可從同一動(dòng)物收集大量樣本而不損失體液量，避免了傳統(tǒng)研究方法中因采血后血容量減少所造成對(duì)藥物分布及消除的影響，其時(shí)間分辨性可使藥動(dòng)學(xué)資料更準(zhǔn)確1,2。    在微透析取樣方法中，探針回收率是將微透析技術(shù)應(yīng)用于藥動(dòng)學(xué)研究的一個(gè)關(guān)鍵問(wèn)題，其大小受探針的性質(zhì)(如有效膜的長(zhǎng)度、膜孔大小等)、待測(cè)物的性質(zhì)(脂溶性、蛋白結(jié)合率、分子大小等)、灌流液的組成(親脂性、pH值等)、流速等諸多因素的影響3。探針回收率的測(cè)定主要有零凈流量法、反向透析法、外推至零流速法等1，應(yīng)用反向透析法校正微透析探針回收率的原理是探針的回收率和釋放率相等，在兩者相等的條

10、件下，用藥物自身的釋放率校正相對(duì)回收率可以減少實(shí)驗(yàn)誤差，是一種準(zhǔn)確的校正方法。但是探針對(duì)藥物的相對(duì)回收率和釋放率是否相等取決于藥物本身的性質(zhì)，并非所有藥物都可以應(yīng)用，作者所在課題組已經(jīng)對(duì)TMPP的體外回收率進(jìn)行了相關(guān)研究4，結(jié)果證明探針對(duì)TMPP的體外回收率和釋放率相等，因此，體內(nèi)試驗(yàn)測(cè)定的微透析探針對(duì)TMPP的釋放率即為探針的體內(nèi)回收率。    由于TMPP在體內(nèi)的半衰期較短，在回收率滿足要求的前提下、應(yīng)盡可能的提高時(shí)間分辨性，故本研究在體內(nèi)試驗(yàn)中最終選擇2.5 l·min-1的流速，本文的研究結(jié)果為微透析技術(shù)用于TMPP的體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)研究提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)和方法支持?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1N. Plock,C. Kloft. Microdialysis theoretical background and recent implementation in applied life-sciencesJ.Eur. J. Pharm. Sci,2005,25:12Tsai THAssaying protein unbound dru