實(shí)驗血涂片的制作與血細(xì)胞的觀察

1、實(shí)驗 血涂片的制作與血細(xì)胞的觀察一、引言血涂片顯微鏡檢查是血液細(xì)胞學(xué)檢查的基本方法，臨床上應(yīng)用極為廣泛，特別是對各種血液病的診斷有很大價值，但血涂片制備和染色不良，常使細(xì)胞鑒別發(fā)生困難，甚至導(dǎo)致錯誤結(jié)論，因此，制備厚薄適宜，分布均勻，染色良好的血涂片是血液學(xué)檢查的重要基本技術(shù)之一。二、實(shí)驗?zāi)康恼莆昭科闹谱?，觀察血細(xì)胞的形態(tài)及在不同環(huán)境下的反應(yīng)。三、實(shí)驗器材與試劑器材：顯微鏡、醫(yī)用一次性采血針、酒精棉球、鑷子、經(jīng)脫脂洗凈的載玻片、蓋玻片等。試劑：瑞氏染液、0.9%Nacl溶液、蒸餾水等。四、 實(shí)驗步驟1、消毒與采血先按摩采血部位（人的指腹），使血流通暢，采血前用70%酒精消毒人的指腹，干燥后

2、用采血針刺破指腹，使血液自然流出（第一滴血不要）。取干凈載玻片，讓血滴在離玻片一端中4-5mm處，注意手指持載玻片的邊緣，不觸電及表面，也不能使載玻片接觸取血部位的皮膚。2、推片取一塊邊緣光滑的載玻片做推片。將其一端置于血滴前方，向后移動到接觸血滴，使血液均勻分散在推片與載玻片呈30-40º角，向另一端平穩(wěn)地推出（圖1）。涂片推好后，迅速在空氣中搖，使之自然干燥。 圖1 推片示意圖3、染色用特種玻璃鉛筆在血膜兩側(cè)畫兩條線，防止染液外溢。再將瑞氏染色液（伊紅-亞甲基藍(lán)）滴在血膜上，至染液淹沒全部血膜，染30秒。加等量蒸餾水與染色液混合后再染5分鐘。最后用蒸餾水把染色液洗掉，用吸水紙吸干

3、，自然干燥后，即可觀察。4、封片 經(jīng)染色的涂片完全干燥后，用中性樹膠封片保存。五、結(jié)果觀察 顯微鏡下觀察血涂片結(jié)果如圖2所示。血細(xì)胞包括紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板。1、紅細(xì)胞：小而圓，沒有細(xì)胞核，血涂片中最多，常被染成淡紅色，細(xì)胞的邊緣厚，中間薄，使細(xì)胞邊緣的顏色比中間的深。2、白細(xì)胞：分為有粒白細(xì)胞和無粒白細(xì)胞，有粒白細(xì)胞包括嗜酸性白細(xì)胞、嗜堿性白細(xì)胞和嗜中性白細(xì)胞；無粒白細(xì)胞包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。（1）嗜酸性白細(xì)胞：數(shù)量較少，但在血涂片中可以找到。細(xì)胞質(zhì)中存在粗大的嗜酸性顆粒，胞質(zhì)常被染成紅色或玫瑰花色，細(xì)胞核分葉形，染成紫紅色。（2）嗜堿性白細(xì)胞：數(shù)量最少，在血涂片中很難找到。細(xì)胞質(zhì)中存在

4、粗大的嗜堿性顆粒，胞質(zhì)常被染成蘭紫色，細(xì)胞核分葉形，染色較深，但常被粗大的蘭紫色顆粒掩蓋。（3）嗜中性白細(xì)胞：在有粒白細(xì)胞中，它的數(shù)量最多，很容易找到。細(xì)胞質(zhì)染成淡紅色，胞質(zhì)內(nèi)含有細(xì)小的顆粒，一般不易看清，細(xì)胞核為蘭紫色，核分桿狀、蹄形和分葉形。（4）淋巴細(xì)胞：在白細(xì)胞中數(shù)目是最多的，大小不等，可分為大淋巴細(xì)胞、中淋巴細(xì)胞、小淋巴細(xì)胞。大淋巴細(xì)胞較少，占中小淋巴細(xì)胞的1/41/18。細(xì)胞質(zhì)所占的比例較小，但隨細(xì)胞體積增大而相應(yīng)增多，核周圍細(xì)胞質(zhì)，染成天蘭色，細(xì)胞核大，圓形，染成紫蘭色。（5）單核細(xì)胞：數(shù)目不多，是血細(xì)胞中最大的細(xì)胞。核為腎形或馬蹄形，顏色比淋巴細(xì)胞較淡，細(xì)胞質(zhì)為淡灰蘭色。3、血

5、小板：為不規(guī)則的細(xì)胞質(zhì)小塊或碎片，形狀象雪花，在血小板中有細(xì)小的紫蘭色顆粒。血小板常聚集在紅細(xì)胞之間（注意：在觀察過程中注意染料、渣子和細(xì)胞及血小板等的區(qū)別）。圖2 血涂片中血細(xì)胞觀察結(jié)果五、注意事項：1、 載玻片的清洗：新玻片有游離堿質(zhì)，因此應(yīng)用10%鹽酸浸泡24小時，然后再清水和蒸餾水清洗。2、使用玻璃片時只能手持邊緣，切忌觸及玻片表面，以保持玻片清潔、干燥，無油膩。3、血涂片制好后，立即固定染色，以免細(xì)胞溶解和發(fā)生退行性變。3、血膜必須要干燥，以免在染色過程中容易脫落。5、染色時間應(yīng)視具體情況而定。染色與染液濃度、室溫高低、細(xì)胞多少有關(guān)。染色液濃度越淡，室溫越低，細(xì)胞越多，所需要的染色時間越長，或適當(dāng)增加染色液。6、染液不可過少，以防止蒸