甘露醇及甘露醇注射液有關(guān)物質(zhì)檢查的研究

1、甘露醇及甘露醇注射液有關(guān)物質(zhì)檢查的研究                    作者：徐燕 蘭婉玲 傅超美 何瑤 【摘要】  目的 建立甘露醇及甘露醇注射液有關(guān)物質(zhì)的檢查方法。 方法 采用高效液相色譜法（RID 檢測器）進行有關(guān)物質(zhì)檢查。色譜柱：phenomenex Rezex RCMMonosaccharide Ca+； 流動相：脫氣水；流速：1.0 ml/min。 結(jié)果 該試驗條件能有效分離主峰

2、與雜質(zhì)、降解產(chǎn)物峰，可用于甘露醇及甘露醇注射液的有關(guān)物質(zhì)檢查；甘露醇及甘露醇注射液均有很好的化學(xué)穩(wěn)定性，甘露醇注射液在滅菌后的儲藏過程中亦未見有降解產(chǎn)物產(chǎn)生。結(jié)論 HPLC法操作簡便、結(jié)果準確，可用于甘露醇及甘露醇注射液中有關(guān)物質(zhì)的檢測。 【關(guān)鍵詞】  甘露醇； 甘露醇注射液； 有關(guān)物質(zhì)檢查   【Abstract】  Objective  To establish a method for determination of related substances in mannitol and mannitol injection. Metho

3、ds  An HPLC method was established for the determination. The chromatography conditions were as follows: phenomenex   Rezex RCMMonosaccharide Ca+, mobile phase of degassing water；flow rate of 1.0 ml/min. Results  The test conditions could isolate the main peak and impurity peaks

4、effectively. It could be used to determine the related substances in mannitol and mannitol injection. Mannitol and mannitol injection both have good chemical stability. Mannitol injection has no degradation products after sterilization. Conclusions  HPLC is simple，accurate and suitable for the

5、determination of related substances in mannitol and mannitol injection.   【Key words】  mannitol; mannitol injection; determination of related substances   甘露醇(Mannitol)又稱D甘露糖醇，分子式C6H14O6，是一種六元醇，與山梨醇為同分異構(gòu)體，白色或無色的結(jié)晶粉未。其在醫(yī)藥工業(yè)中的應(yīng)用廣泛，可作為降壓劑、利尿劑、脫水劑，以及片劑的填充劑、直接壓片的賦形劑、咀嚼片的矯味劑、凍干粉針劑

6、的支架劑。甘露醇注射液為甘露醇的滅菌水溶液，是上世紀60年代初即開始在我國臨床上廣泛使用的脫水利尿藥，效果好，副作用小，經(jīng)濟安全可靠，應(yīng)用日益廣泛。   藥物中含有雜質(zhì)會降低療效和影響穩(wěn)定性，有的甚至對人體健康有害或產(chǎn)生其他副作用。因此，檢測有關(guān)物質(zhì)、控制純度是確保用藥安全、有效，保證藥物質(zhì)量的重要方面。英國藥典（BP2005）與歐洲藥典（EP 5.0）均收載了甘露醇原料的有關(guān)物質(zhì)檢查項1,2，而現(xiàn)行中國藥典（2005年版二部）中收載的甘露醇及甘露醇注射液質(zhì)量標準中卻未設(shè)有關(guān)物質(zhì)檢查項3。為有效控制甘露醇及甘露醇注射液中有關(guān)物質(zhì)的限量，保證臨床用藥的安全有效，作者參照英國藥

7、典（BP2005）與歐洲藥典（EP 5.0）對甘露醇及其注射液有關(guān)物質(zhì)的測定方法進行了研究。    1  儀器與試藥   1.1  儀器   Agilent 1200 系列高效液相色譜儀，Agilent RID 檢測器。   1.2  試藥   甘露醇（市售原料藥，收集了3個生產(chǎn)廠家，共5個批次樣品）；山梨醇（生化試劑）；甘露醇注射液（市售藥品，收集了11個生產(chǎn)廠家，共11個批次樣品）。   2  方法與結(jié)果 

8、60; 2.1  色譜條件   色譜柱： phenomenex   Rezex RCMMonosaccharide Ca（300 mm×7.8 mm  8 m）；檢測器：Agilent RID 檢測器（設(shè)置溫度：55）；柱溫：80；流動相：脫氣水；流速：1.0 ml/min。   2.2  系統(tǒng)適用性試驗   取甘露醇與山梨醇各0.5 g,置100 ml量瓶中,加水溶解并稀釋至刻度,作為系統(tǒng)分離度測試溶液。照高效液相色譜測定法(中國藥典2005年版二部附錄D)測定，將系統(tǒng)分離

9、度測試溶液20 l注入液相色譜儀，記錄色譜圖，見圖13.   甘露醇的出峰時間約為22 min，山梨醇的出峰時間約為27 min，相對保留時間約為1.25，兩者的分離度為4.59，色譜峰面積響應(yīng)值比約為1.0：0.93，本系統(tǒng)適用性試驗符合英國藥典（BP2005）方法的要求。   2.3  強制破壞試驗   取甘露醇5 g，置100 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液（約20%濃度）；取供試品溶液5 ml，加水稀釋至4倍體積(約5%濃度)，搖勻，按上述色譜條件，進樣20 l，記錄色譜圖，結(jié)果未經(jīng)破壞的供試品溶液

10、檢測出一個雜質(zhì)峰，出峰時間約為27 min，可確定為山梨醇，以歸一化法計算其含量為0.36%，見圖4.   光破壞試驗  取供試品溶液5 ml，置強光（4 500LX）下照射240 h，加水稀釋至4倍體積(約5%濃度)，搖勻，按上述色譜條件，進樣20 l，記錄色譜圖，色譜圖中除原有的山梨醇雜質(zhì)峰外，未產(chǎn)生新增雜質(zhì)峰，且山梨醇雜質(zhì)峰的量未見增加。見圖5.   酸破壞試驗  取供試品溶液5 ml，加入5 mol/L的鹽酸溶液2 ml，水浴加熱1 h，用5 mol/L的氫氧化鈉溶液中和后，加水稀釋至4倍體積(約5%濃度)，搖勻，按上述色譜條

11、件，進樣20 l，記錄色譜圖，色譜圖中除原有的山梨醇雜質(zhì)峰外，未產(chǎn)生新增雜質(zhì)峰，且山梨醇雜質(zhì)峰的量未見增加，見圖6。（注：出現(xiàn)在色譜圖中保留時間約10 min的峰為強酸強堿破壞空白試劑產(chǎn)生，見圖7）。   氧破壞試驗  取供試品溶液5 ml，加入過氧化氫溶液2 ml，在室溫放置1 h，100水浴加熱1 h，加水稀釋至4倍體積(約5%濃度)，搖勻，按上述色譜條件，進樣20 l，記錄色譜圖，可見在氧化破壞試驗中供試品溶液產(chǎn)生了少量雜質(zhì)，見圖9.   熱破壞試驗  取供試品溶液5 ml，100水浴加熱4 h，加水稀釋至4倍體積(約5%濃度)

12、，搖勻，按上述色譜條件，進樣20 l，記錄色譜圖，色譜圖中除原有的山梨醇雜質(zhì)峰外，未產(chǎn)生新增雜質(zhì)峰，且山梨醇雜質(zhì)峰的量未見增加，見圖10.   強制破壞試驗降解產(chǎn)物檢測結(jié)果表明，甘露醇溶液能耐受強酸、強堿、高熱及強光照射的破壞，記錄的色譜圖中均未產(chǎn)生新的雜質(zhì)峰，僅在氧化破壞試驗中產(chǎn)生少量雜質(zhì)；在該色譜系統(tǒng)中，雜質(zhì)峰能與主峰基線分離，說明該色譜系統(tǒng)能有效檢測降解雜質(zhì)。            2.4  最低檢出限   取0.01甘露醇的對照溶液，進樣

13、5 l，記錄色圖譜，此時信噪比約為31，計算出最低檢出限為25 ng，見圖11.   2.5  穩(wěn)定性試驗   取同1份供試品溶液，分別在0 h、150 h測定，采用歸一化法計算雜質(zhì)的含量，結(jié)果為0.36、0.35，說明測定溶液150 h內(nèi)穩(wěn)定。   2.6  甘露醇及甘露醇注射液有關(guān)物質(zhì)檢查   精密稱取甘露醇5 g或精密量取甘露醇注射液25 ml（相當于甘露醇5 g），置100 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；精密量取2 ml，置100 ml量瓶中，加水稀釋至刻度,作為對照

14、溶液（a）(2.0%)；精密量取對照溶液（a）5 ml，置100 ml量瓶中，加水稀釋至刻度,作為對照溶液（b）（0.1）。   取對照溶液（a）(2.0%)20 l注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)儀器靈敏度，使主成份色譜峰的峰高約為滿量程的50%；取供試品溶液與對照溶液（b）（0.1）各20 l注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的2倍，供試品溶液的色譜圖中如顯雜質(zhì)峰，量取各雜質(zhì)峰面積的和（雜質(zhì)峰峰面積小于對照溶液（b）（0.1）的主峰峰面積的不計），與對照溶液（a）(2.0%)相比較。   取3個廠家生產(chǎn)的甘露醇原料藥共5批以及11個廠家生產(chǎn)的甘露醇注射

15、液樣品共11批進行有關(guān)物質(zhì)測定，結(jié)果均只檢測出一個雜質(zhì)峰，即山梨醇，以歸一化法計算有關(guān)物質(zhì)含量，見表2、表3.表2  甘露醇有關(guān)物質(zhì)測定結(jié)果3  甘露醇注射液有關(guān)物質(zhì)測定結(jié)果   從檢測結(jié)果可見和廠家生產(chǎn)的甘露醇及甘露醇注射液中其有關(guān)物質(zhì)均未超過2%的限度，說明無論原料與制劑樣品的有關(guān)物質(zhì)均已達到英國藥典（BP2005）中對甘露醇原料的要求。從時間角度來分析，各廠家生產(chǎn)時間不同的原料與制劑有關(guān)物質(zhì)測定結(jié)果并未隨生產(chǎn)儲存時間發(fā)生顯著變化。說明甘露醇原料及其注射液制劑確有很好的化學(xué)穩(wěn)定性，甘露醇注射液在滅菌后的儲藏過程中亦未見有降解產(chǎn)物產(chǎn)生。 &#

16、160;  3  討論   3.1  關(guān)于輔料問題   當前試驗結(jié)果表明參照BP 2005方法的色譜條件, 特定雜質(zhì)山梨醇與甘露醇主峰的分離度達到規(guī)定標準，可以滿足甘露醇及甘露醇注射液有關(guān)物質(zhì)檢查的要求。由于甘露醇注射液為甘露醇的滅菌水溶液（甘露醇原料加注射用水溶解至20濃度的溶液），其處方中無輔料，且生產(chǎn)工藝簡單，僅有使用針用活性炭脫色、鹽酸（或氫氧化鈉溶液）調(diào)節(jié)pH值和高溫滅菌的過程（在本次收集到的全國范圍內(nèi)的11個廠家的處方及生產(chǎn)工藝均是如此），故此試驗研究的方法可直接應(yīng)用于甘露醇注射液的有關(guān)物質(zhì)測定，無需再補充進行輔料影響考察。   3.2  關(guān)于山梨醇   所收集的樣品測定結(jié)果和強制破壞試驗結(jié)果均表明，甘露醇供試品溶液僅對強氧化破壞稍有一些不穩(wěn)定，對常規(guī)測定過程沒有特殊要求。甘露醇及甘露醇注射液主要雜質(zhì)峰即為其同分異構(gòu)體山梨醇，幾乎未見其他雜質(zhì)峰。甘露醇與山梨醇在藥物書籍中兩者均劃屬為同類物質(zhì)，藥物類別均為脫水藥，在藥理上均具有利尿及脫水作用，只因山梨醇在體內(nèi)部分轉(zhuǎn)化為糖原而失去高滲作用，使藥理作用比甘露醇稍弱。   3.3  關(guān)于所測樣品質(zhì)量   國內(nèi)使用