分子生物學(xué)復(fù)習(xí)資料 絕對重點(diǎn)

1、分子生物學(xué)復(fù)習(xí)資料 （第一版） 一 名詞解釋1 Southern blot / Northern blot DNA斑跡法 / RNA轉(zhuǎn)移吸印技術(shù)。是為了檢測待檢基因或其表達(dá)產(chǎn)物的性質(zhì)和數(shù)量（基因拷貝數(shù)）常用的核酸分子雜交技術(shù)。二者均屬于印跡轉(zhuǎn)移雜交術(shù)，所不同的是前者用于檢測DNA樣品；后者用于檢測RNA樣品。2 cis-acting element / trans-acting factor 順式作用元件 / 反式作用因子。均為真核生物基因中的轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列。順式作用元件是與結(jié)構(gòu)基因表達(dá)調(diào)控相關(guān)、能被基因調(diào)控蛋白特異性識別和結(jié)合的特定DNA序列，包括啟動子和上游啟動子元件、增強(qiáng)子、反應(yīng)元件和po

2、ly（A）加尾信號。反式作用因子是能與順式作用元件特異性結(jié)合、對基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄起始過程有調(diào)控作用的蛋白質(zhì)因子，如RNA聚合酶、轉(zhuǎn)錄因子、轉(zhuǎn)錄激活因子、抑制因子。3 VNTR / STR 可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)序列 / 短串聯(lián)重復(fù)。均為非編碼區(qū)的串聯(lián)重復(fù)序列。前者也叫高度可變的小衛(wèi)星DNA，重復(fù)單位約924bp,重復(fù)次數(shù)變化大,變化高度多態(tài)性；后者也叫微衛(wèi)星DNA，重復(fù)單位約26 bp，重復(fù)次數(shù)約1060次，總長度通常小于150bp 。 （參考第7題）4 viral oncogene / cellular oncogene 病毒癌基因 / 細(xì)胞癌基因。病毒癌基因指存在于逆轉(zhuǎn)錄病毒中、體外能使細(xì)胞轉(zhuǎn)化、

3、體內(nèi)能導(dǎo)致腫瘤發(fā)生的基因；細(xì)胞癌基因也叫原癌基因，指存在于細(xì)胞內(nèi)，與病毒癌基因同源的基因序列。正常情況下不激活，與細(xì)胞增殖相關(guān)，是維持機(jī)體正常生命活動所必須的，在進(jìn)化上高等保守。當(dāng)原癌基因的結(jié)構(gòu)或調(diào)控區(qū)發(fā)生變異，基因產(chǎn)物增多或活性增強(qiáng)時，使細(xì)胞過度增殖，從而形成腫瘤。5 ORF / UTR 開放閱讀框 / 非翻譯區(qū)。均指在mRNA中的核苷酸序列。前者是特定蛋白質(zhì)多肽鏈的序列信息，從起始密碼子開始到終止密碼子結(jié)束，決定蛋白質(zhì)分子的一級功能；后者是位于前者的5端上游和3端下游的、沒有編碼功能的序列，主要參與翻譯起始調(diào)控，為前者的多肽鏈序列信息轉(zhuǎn)變?yōu)槎嚯逆溗匦琛?6 enhancer / sile

4、ncer 增強(qiáng)子 / 沉默子。均為順式作用元件。前者是一段含多個作用元件的短DNA序列，可特異性與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，增強(qiáng)基因的轉(zhuǎn)錄活性，可以位于基因任何位置，通常在轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)上游-100到-300個堿基對處；后者是前者內(nèi)含的負(fù)調(diào)控序列，結(jié)合特異蛋白因子時，對基因轉(zhuǎn)錄起阻遏作用。7 micro-satellite / minisatellite 微衛(wèi)星DNA / 小衛(wèi)星DNA 。衛(wèi)星DNA是出現(xiàn)在非編碼區(qū)的串聯(lián)重復(fù)序列，特點(diǎn)是有固定重復(fù)單位且重復(fù)單位首尾相連形成重復(fù)序列片段，串聯(lián)重復(fù)單位長短不等，重復(fù)次數(shù)大小不一。微衛(wèi)星DNA即STR；小衛(wèi)星DNA分為高度可變的小衛(wèi)星DNA（即VNTR）和端粒DNA

5、。 （參考第3題）8 SNP / RFLP 單核苷酸多態(tài)性 / 限制性片段長度多態(tài)性。 前者是指在基因組水平上由單個核苷酸的變異所引起的DNA序列多態(tài)性，它是人類遺傳變異中最常見的一種，占所有已知多態(tài)性的90%以上；后者是由于高度重復(fù)序列中的無間隔反向重復(fù)序列容易形成也容易突變產(chǎn)生或缺失一個酶切位點(diǎn)，所造成的限制性片段長度多態(tài)性，如果用同一種限制性內(nèi)切酶消化不同個體的同一段DNA，由于堿基組成的變化而改變限制性內(nèi)切酶識別位點(diǎn)，會產(chǎn)生長度不同的DNA片段。9 cloning vector/ expressing vector 克隆載體 / 表達(dá)載體。載體是與外源性DNA片段在體外連接構(gòu)成重組分子

6、，然后導(dǎo)入宿主細(xì)胞，使外源性DNA擴(kuò)增或表達(dá)的分子。克隆載體是用于克隆和擴(kuò)增特定DNA片段的載體；表達(dá)載體是用于表達(dá)外源基因的載體。10 optional exon/ optional intron 外顯子選擇 / 內(nèi)含子選擇。均屬于mRNA的選擇剪接方式。選擇剪接指參加拼接的外顯子可以不按其在基因組的線性分布次序拼接，內(nèi)含子也可以不被切除而保留的剪接方式。外顯子選擇指在不同剪接方式中，某個或某幾個外顯子可以在成熟mRNA中保留，也可以通過剪接過程被去掉；內(nèi)含子選擇指在不同剪接方式中，內(nèi)含子可以被完全去掉，也可以有一個內(nèi)含子被保留在成熟mRNA中。11 promoter / terminato

7、r 啟動子 / 終止子。均為真核生物基因兩側(cè)不能被轉(zhuǎn)錄且對基因表達(dá)、調(diào)控有重要作用的序列。啟動子是能與RNA聚合酶結(jié)合并起始轉(zhuǎn)錄的核苷酸序列，包括TATA盒、CAAT盒、GC盒一組序列，一般位于基因轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)上游-100-200堿基對范圍；終止子是提供轉(zhuǎn)錄停止信號的DNA序列，當(dāng)mRNA轉(zhuǎn)錄到此部位后，產(chǎn)生poly(U),被結(jié)合在RNA聚合酶上的延長因子識別并與其結(jié)合，促使RNA聚合酶與DNA模板解離，終止轉(zhuǎn)錄。12 leader sequence / SD sequence 前導(dǎo)序列 / SD序列。前導(dǎo)序列指位于基因5端、第一個外顯子上游的序列，也叫5端序列，在加工過程中通常被最先剪切去除；

8、SD序列指位于原核生物mRNA5端，與核糖體16S rRNA結(jié)合的序列，一般位于mRNA的起始密碼AUG的上游510個堿基處,并且同16S rRNA 3端的序列互補(bǔ)，其順序及位置影響翻譯起始效率。 13 gene/ genome 基因 / 基因組?；蚴秦?fù)責(zé)編碼RNA或一條多肽鏈的DNA片段，即攜帶有遺傳信息的DNA序列，是控制性狀的基本遺傳單位；基因組是一個細(xì)胞或病毒的全部遺傳信息，真核生物基因組是一套完整單倍體DNA和線粒體DNA全部序列，某些病毒基因組由RNA組成。14 operon / operator 操縱子 / 操縱元件。操縱子是指按功能相關(guān)性成簇排列的結(jié)構(gòu)基因，連同上游調(diào)控區(qū)和下

9、游轉(zhuǎn)錄終止信號，共同組成的一個基因表達(dá)協(xié)同單位；操縱元件是一段能被不同基因表達(dá)調(diào)控蛋白識別和結(jié)合的DNA序列，是決定基因表達(dá)效率的關(guān)鍵元件。15 gene rearrangement / gene replacement 基因重排 / 基因置換?；蛑嘏攀荄NA水平調(diào)控的重要方式之一，指某些基因片段改變原來存在順序，通過調(diào)整有關(guān)基因片段的銜接順序，再重排位一個完整的轉(zhuǎn)錄單位；基因置換是重要的基因治療方式，指將特定的目的基因?qū)胩囟ǖ募?xì)胞，通過定位重組，以導(dǎo)入的正?；蛑脫Q基因組內(nèi)原有的缺陷。16 domain / motif 結(jié)構(gòu)域（功能域） / 基序（模序）。17 receptor / ad

10、aptor 受體 / 銜接蛋白。受體是信息分子的接收分子，是存在于細(xì)胞表面的或細(xì)胞內(nèi)的蛋白分子，其作用是識別配體并將配體信號進(jìn)行轉(zhuǎn)換，使之成為細(xì)胞內(nèi)分子可以識別的信號并傳遞至其他分子引起細(xì)胞應(yīng)答；銜接蛋白是信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中不同信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子的接頭，可將位于其上游與下游的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子連接起來。18 initiator caspase / effector caspase 起始者胱天蛋白酶 / 效應(yīng)者胱天蛋白酶。胱天蛋白酶是哺乳動物細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵酶。起始者胱天蛋白酶有較長原域，位于胱天蛋白酶級聯(lián)活化途徑上游，通過蛋白質(zhì)相互作用自我激活；效應(yīng)者胱天蛋白酶有較短原域，位于胱天蛋白酶級聯(lián)活化下游，前體能被起

11、始者胱天蛋白酶切割而活化，活化后能切割底物從而導(dǎo)致凋亡。19 transfection / transformation 轉(zhuǎn)染 / 轉(zhuǎn)化。均為重組DNA常用方法。前者指真核細(xì)胞主動攝取或被動導(dǎo)入外源性DNA片段而獲得新表型的過程；后者指將質(zhì)?；蚱渌庠碊NA導(dǎo)入處于感受態(tài)的宿主菌并使其獲得新表型的過程。20 gene family / gene superfamily 基因家族 / 基因超家族。基因家族指核苷酸序列或編碼產(chǎn)物結(jié)構(gòu)具有一定程度同源性的基因，其編碼產(chǎn)物常常有相似功能；超基因家族是由多基因家族及單基因組成的更大的基因家族，它們結(jié)構(gòu)有程度不等的同源性，但功能不一定相同。二 問答1 基因

12、的基本概念。答：基因的基本概念包括基因，基因組，結(jié)構(gòu)基因，模板鏈，編碼鏈，外顯子，內(nèi)含子，順式作用元件，反式作用元件，啟動子，增強(qiáng)子，終止子等。(參考名詞解釋)結(jié)構(gòu)基因 基因中編碼RNA或蛋白質(zhì)的DNA序列。模板鏈/編碼鏈 結(jié)構(gòu)基因雙鏈中一條作為合成RNA的模板鏈，另一條為編碼鏈。外顯子/內(nèi)含子 編碼序列 / 非編碼序列。2 基因的組織結(jié)構(gòu)。答：原核生物基因結(jié)構(gòu)簡單，通常是一條雙鏈環(huán)狀DNA分子，有操縱子結(jié)構(gòu)。真核生物基因結(jié)構(gòu)復(fù)雜，包括染色體DNA和線粒體DNA。染色體DNA位于細(xì)胞核內(nèi)，雙鏈盤繞在以組蛋白分子為核心的結(jié)構(gòu)表面構(gòu)成核小體，核小體組成染色單體；線粒體DNA是閉環(huán)雙鏈分子，位于核外

13、。 病毒基因可以由DNA或RNA組成。RNA病毒基因有單雙鏈和正負(fù)鏈之分，DNA病毒基因有環(huán)狀DNA和線性DNA之分。3 原核生物、真核生物、人類基因組結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。答：原核生物的基因組結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：環(huán)狀雙股鏈，有操縱子結(jié)構(gòu)，序列連貫，無內(nèi)含子，大多為結(jié)構(gòu)基因，無重疊序列，大多為單拷貝。 真核生物基因組結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：基因組大，核內(nèi)染色體，體細(xì)胞基因組為雙倍體，大量重復(fù)序列，結(jié)構(gòu)基因不連續(xù)，斷裂基因，含外顯子與內(nèi)含子，絕大多數(shù)為非編碼序列。 人類基因組結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：人類基因組除包括真核生物基因組結(jié)構(gòu)特點(diǎn)外，數(shù)量更大，非編碼序列更多。與細(xì)菌基因組相比，基因組大1000倍，基因數(shù)目多20倍，非編碼序列為10000倍

14、。4 重復(fù)序列種類、特征，人類基因多態(tài)性。 答：重復(fù)序列大部分是非編碼序列，功能主要與基因組穩(wěn)定性、組織形式及基因表達(dá)調(diào)控有關(guān)。根據(jù)重復(fù)序列出現(xiàn)頻率不同，可分為高重復(fù)序列DNA（105）、中重復(fù)序列DNA（10105）、單拷貝或低重復(fù)序列DNA（10）。 高重復(fù)序列可以集中在某一區(qū)域串聯(lián)排列。典型高重復(fù)序列DNA有衛(wèi)星DNA和反向重復(fù)序列。衛(wèi)星DNA出現(xiàn)在非編碼區(qū)呈串連重復(fù)排列，按照串連重復(fù)單位和重復(fù)次數(shù)，分為大衛(wèi)星DNA、小衛(wèi)星DNA、微衛(wèi)星DNA。反向重復(fù)序列指兩個順序相同的拷貝在DNA鏈上反向排列，中間可以有間隔序列，也可以串聯(lián)（回文結(jié)構(gòu)）。 中重復(fù)序列散在分布于基因組中，常與單拷貝基因

15、間隔排列。人類基因多態(tài)性是指人類個體之間基因組DNA的差異，這些差異產(chǎn)生的主要原因是基因組序列的變異。變異是生物遺傳基本特征之一，也是生物進(jìn)化和適應(yīng)環(huán)境的必然結(jié)果。基因多態(tài)性造成了生物特別是人類在生理及病理條件下對疾病、環(huán)境及應(yīng)激的易感性、對環(huán)境、毒素、藥物的耐受性和反應(yīng)性的千差萬別。5 病毒基因組、原核生物基因組、真核生物基因組核酸復(fù)制特點(diǎn)。答：DNA復(fù)制基本特點(diǎn)：復(fù)制都有固定起始點(diǎn)，復(fù)制過程中形成復(fù)制泡和復(fù)制叉，復(fù)制基本單位是復(fù)制子，復(fù)制是半保留復(fù)制，保證遺傳信息忠實傳遞，復(fù)制是半不連續(xù)復(fù)制，克服了DNA空間結(jié)構(gòu)對DNA新鏈合成的制約。 原核生物有特定復(fù)制起點(diǎn)和終點(diǎn)結(jié)構(gòu)，只有一個復(fù)制起點(diǎn)；

16、在起始點(diǎn)上可以連續(xù)開始新的復(fù)制；復(fù)制過程都是DNA雙鏈復(fù)制，也有復(fù)制、滾環(huán)復(fù)制、D環(huán)復(fù)制等方式。 真核生物復(fù)制需要解開和重裝核小體結(jié)構(gòu)；復(fù)制過程中的引物及岡崎片斷長度小于原核生物；有多個復(fù)制位點(diǎn)；需要特殊機(jī)制復(fù)制端粒，涉及逆轉(zhuǎn)錄；一次復(fù)制完成以前不會啟動新一輪復(fù)制；線粒體DNA以D環(huán)模式進(jìn)行復(fù)制。 不同病毒的基因組核酸以不同模式進(jìn)行復(fù)制。單鏈環(huán)狀DNA可通過成環(huán)滾環(huán)模式復(fù)制，雙鏈環(huán)狀DNA可通過不同方式復(fù)制，有些病毒雙鏈環(huán)狀DNA通過RNA中間體進(jìn)行復(fù)制，病毒線性DNA利用特殊末端起始引物復(fù)制，RNA病毒通過RNA復(fù)制過程復(fù)制。6 DNA損傷及其修復(fù)的主要方式。答：DNA損傷形式有：交聯(lián)、DN

17、A鏈斷裂、堿基突變、DNA重組等。 交聯(lián)包括鏈內(nèi)共價交聯(lián)(堿基之間)和鏈間共價交聯(lián)（鏈與鏈之間）。 DNA鏈斷裂指DNA鏈內(nèi)磷酸二酯鍵斷裂。 堿基突變包括單點(diǎn)突變和多點(diǎn)突變。點(diǎn)突變分為轉(zhuǎn)換（同型堿基替代）和顛換（異型堿基替代），此外還有缺失（核苷酸丟失）、插入（核苷酸增加）、倒位（核苷酸序列方向倒轉(zhuǎn)）。 DNA重組指DNA分子內(nèi)發(fā)生較大片段的交換。DNA損傷修復(fù)機(jī)制有： 直接修復(fù)。如：DNA斷裂口在鏈兩端未損傷情況下可由連接酶直接修復(fù)，二聚體可被光復(fù)活酶直接修復(fù)，烷基化堿基可直接修復(fù)。 切除修復(fù)。可分為單個核苷酸切除修復(fù)和核苷酸片段切除修復(fù)。 重組修復(fù)。即先進(jìn)行復(fù)制再進(jìn)行切除修復(fù)。 SOS修復(fù)

18、。是DNA損傷嚴(yán)重時的應(yīng)急性修復(fù)方式。 細(xì)胞周期檢查點(diǎn)控制是真核生物誘導(dǎo)修復(fù)的主要機(jī)制。7 原核生物基因表達(dá)轉(zhuǎn)錄環(huán)節(jié)的調(diào)控模式、調(diào)控方式。答：基因表達(dá)調(diào)控的環(huán)節(jié)，主要在轉(zhuǎn)錄水平。多種因素以特定的方式影響轉(zhuǎn)錄。 啟動子決定轉(zhuǎn)錄的效率與方向及模板鏈。 因子的種類與濃度調(diào)節(jié)基因的表達(dá)。 負(fù)調(diào)控：阻遏蛋白結(jié)合于DNA后抑制轉(zhuǎn)錄，分為誘導(dǎo)和阻遏2種情況。 正調(diào)控：調(diào)控蛋白結(jié)合于特定DNA序列后促進(jìn)基因的轉(zhuǎn)錄。CAP蛋白調(diào)節(jié)糖代謝相關(guān)基因的表達(dá)；ntrC蛋白調(diào)節(jié)氮代謝相關(guān)基因的表達(dá)。 倒位蛋白通過DNA重組倒位調(diào)節(jié)基因表達(dá)。 RNA聚合酶抑制物可與RNA結(jié)合并抑制轉(zhuǎn)錄。 衰減子減弱轉(zhuǎn)錄。8 真核生物基因表

19、達(dá)各環(huán)節(jié)的基本要素。真核生物基因表達(dá)調(diào)控的環(huán)節(jié)及其主要特征。答：真核生物基因表達(dá)共有7個環(huán)節(jié)： 轉(zhuǎn)錄起始。RNA聚合酶在轉(zhuǎn)錄因子幫助下識別和結(jié)合啟動子，形成轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物。 RNA延伸。RNA聚合酶開始依堿基配對關(guān)系按模板鏈堿基序列加入核糖核苷酸。 轉(zhuǎn)錄終止。RNA聚合酶均有對應(yīng)的終止信號，RNA聚合酶沒有明確中止信號。 轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的加工。mRNA前體加工：5端加帽3端加尾剪接化學(xué)修飾編輯;tRNA前體加工：剪接去除內(nèi)含子剪切5端先導(dǎo)序列添加或修復(fù)3端CCA化學(xué)修飾。rRNA前體加工：前體剪接化學(xué)修飾。 RNA跨核膜運(yùn)輸。mRNA與多種蛋白質(zhì)合成核蛋白顆粒，rRNA前體在核仁合成并被加工成熟后，

20、與核糖體蛋白形成核糖體，從胞核運(yùn)到胞質(zhì)。 翻譯。翻譯起始階段：起始復(fù)合物前體形成起始復(fù)合物前體與mRNA結(jié)合形成起始復(fù)合物40亞基MettRNA復(fù)合物沿mRNA掃描40亞基MettRNA復(fù)合物識別密碼子。延長階段：氨基酸活化與搬運(yùn)延長因子肽鏈延伸（進(jìn)位、轉(zhuǎn)態(tài)、移位）。 終止階段：釋放因子RF識別終止子。 翻譯后加工。肽鏈折疊、肽鏈中氨基酸共價修飾、肽鏈水解修飾、亞單位聚合。真核生物基因表達(dá)的調(diào)控是多級調(diào)控，可發(fā)生在：DNA水平、轉(zhuǎn)錄水平、轉(zhuǎn)錄后水平、翻譯水平、翻譯后水平。 DNA水平：基因丟失、基因擴(kuò)增與放大、基因重排、低甲基化、轉(zhuǎn)座與致癌基因的表達(dá)。 轉(zhuǎn)錄水平：轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成是轉(zhuǎn)錄可調(diào)

21、控環(huán)節(jié)、反式作用因子是真核細(xì)胞重要基因表達(dá)調(diào)控蛋白、轉(zhuǎn)錄起始是由多種激活的反式作用因子復(fù)合調(diào)控。 轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控：5端加帽和3端加尾有調(diào)控意義、mRNA的選擇剪接可調(diào)控基因表達(dá)、mRNA運(yùn)輸控制調(diào)節(jié)進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)的mRNA量。 翻譯水平：某些mRNA翻譯起始可受特定因素調(diào)控、mRNA穩(wěn)定性調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)合成水平、小分子mRNA可調(diào)控翻譯效率。 翻譯后水平：新生肽鏈水解影響蛋白質(zhì)含量、肽鏈中氨基酸共價修飾是快速調(diào)節(jié)方式、通過信號肽分揀、運(yùn)輸、定位影響蛋白質(zhì)功能發(fā)揮。9 蛋白質(zhì)翻譯后修飾方式及其生物學(xué)意義。答：蛋白質(zhì)翻譯后需要不同形式的共價修飾，才能有生物學(xué)活性。 新生肽鏈N端的甲硫氨酸在翻譯后被切除。

22、蛋白前體經(jīng)酶切修飾，激活成為功能蛋白質(zhì)。 磷酸化去磷酸化修飾，決定磷蛋白的活性狀態(tài)。 糖基化修飾，包括N糖基化和O糖基化，是許多真核蛋白質(zhì)產(chǎn)生生物學(xué)活性必要條件。 脂?；揎棧固囟ǖ鞍踪|(zhì)定位于膜的周邊。 乙?；ヒ阴；揎?，可調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的活性。 二硫鍵的形成，使蛋白質(zhì)的立體結(jié)構(gòu)更穩(wěn)定。 金屬離子的結(jié)合，通常是酶活性中心的必需部分，參與酶的催化作用。 蛋白質(zhì)異常修飾，與疾病密切相關(guān)。如：組蛋白乙酰化異常與腫瘤密切相關(guān)。10 蛋白質(zhì)分子在細(xì)胞內(nèi)降解的決定性因素、降解途徑。答：蛋白質(zhì)分子在細(xì)胞內(nèi)的降解取決于其末端和內(nèi)部序列。N末端有選擇性降解信號，即N末端氨基酸，分為去穩(wěn)定殘基和穩(wěn)定殘基，決定著蛋

23、白質(zhì)的半衰期，有些降解信號可能是一段保守序列。 降解途徑有：溶酶體途徑、特殊細(xì)胞器內(nèi)水解系統(tǒng)、細(xì)胞膜表面水解體系、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)蛋白降解途徑（ERAD）、泛素蛋白酶體途徑（UPP）。ERAD和UPP稱為泛素蛋白酶復(fù)合體途徑。在UPP途徑中，蛋白質(zhì)降解前要泛素化，然后被26S蛋白酶體降解；在ERAD途徑中，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)正確識別錯誤折疊的蛋白質(zhì)，將其逆向轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞漿，再被泛素蛋白體酶體系降解。11 細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)基本概念、主要途徑、主要特點(diǎn)，G蛋白偶聯(lián)受體信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑基本要素。答：細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)是細(xì)胞針對外源信息發(fā)生的細(xì)胞應(yīng)答反應(yīng)全過程，即細(xì)胞識別各種外來理化信號，將其轉(zhuǎn)變?yōu)榧?xì)胞內(nèi)各種分子活性的變化，從而改變細(xì)

24、胞內(nèi)某些代謝過程、影響細(xì)胞生長速度甚至誘導(dǎo)死亡的過程。信號轉(zhuǎn)導(dǎo)主要途徑：G蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑：腺苷酸環(huán)化酶途徑，IP3、Ca 2+-鈣調(diào)蛋白激酶途徑，DG-蛋白激酶C途徑。 酪氨酸蛋白激酶介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。核受體及其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。 鳥苷酸環(huán)化酶信號途徑。G蛋白偶聯(lián)受體信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑基本模式：配體與受體結(jié)合受體活化G蛋白G蛋白激活或抑制效應(yīng)分子效應(yīng)分子改變第二信使含量與分布第二信使作用于相應(yīng)靶分子改變其構(gòu)象，改變細(xì)胞代謝及基因表達(dá)。 12 細(xì)胞周期基本概念，Cyclin、CDK、CKI的主要種類及其在細(xì)胞周期調(diào)控中的作用。答：細(xì)胞周期是指細(xì)胞從一次有絲分裂結(jié)束到下一次有絲分裂完成所經(jīng)歷的

25、一個有序過程。包括間期和分裂期，間期包括G1 期、S期、G2 期；分裂期包括前期、中期、后期、末期。Cyclin種類ABCDE功能S期和G2/M轉(zhuǎn)換G2/MG1期 G1/S轉(zhuǎn)換CDK功能CDK1G2/M轉(zhuǎn)換 、有絲分裂CDK2G1 期 、S期 、G1/S轉(zhuǎn)換CDK3G1/S轉(zhuǎn)換CDK4G0/ G1轉(zhuǎn)換 、G1/S轉(zhuǎn)換CDK5神經(jīng)纖維磷酸化CDK6G0/ G1轉(zhuǎn)換 、G1/S轉(zhuǎn)換CDK7CDK26活化所需要CDK8轉(zhuǎn)錄CDK9轉(zhuǎn)錄CKIINK4家族功能CIP/KIP家族功能INK4a(p16)維持細(xì)胞正常生長必需、腫瘤抑制、誘導(dǎo)復(fù)制衰老、抑制端粒酶活性、抑制細(xì)胞生長。P21DNA損傷反應(yīng)時G1期

26、停滯、G2/M轉(zhuǎn)換INK4b(p15)誘導(dǎo)復(fù)制衰老、抑制端粒酶活性、抑制細(xì)胞生長。P27G1期停滯、抑癌INK4c(p18)P57生長發(fā)育中起細(xì)胞增長相反作用INK4d(p19)13 細(xì)胞凋亡的基本概念、主要功能形態(tài)特征、幾種主要的凋亡誘導(dǎo)信號通路及其特點(diǎn)。答：細(xì)胞凋亡是機(jī)體細(xì)胞在正常生理或病理狀態(tài)下發(fā)生的一種自發(fā)的程序化死亡過程，其發(fā)生受到機(jī)體嚴(yán)密調(diào)控。形態(tài)特征為細(xì)胞皺縮、胞漿失水濃縮，胞膜完整、泡狀，凋亡后期內(nèi)裹核物質(zhì)和細(xì)胞器形成凋亡小體，核膜完整、核皺縮，染色質(zhì)固縮聚集核膜下、最后裂解為碎片，細(xì)胞器大多完整、線粒體腫脹、通透性增加、釋放細(xì)胞色素。生物化學(xué)特征為DNA在核小體連接處斷裂形成

27、連續(xù)階梯狀小片段；凋亡相關(guān)蛋白質(zhì)和酶活化；凋亡早期磷脂酰絲氨酸外翻；ATP正常合成并分解供能。 細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)信號通路有外源性死亡受體途徑和內(nèi)源性線粒體途徑。前者由死亡受體與相應(yīng)配體結(jié)合組裝DISK，誘發(fā)caspase 8前體活化，導(dǎo)致下游效應(yīng)者光天蛋白酶活化，切割底物使細(xì)胞凋亡；后者是由于生長因子不足，細(xì)胞脫離原來環(huán)境或DNA損傷等誘發(fā)，由Bcl2家族中促凋亡因子使細(xì)胞色素C從線粒體釋放入胞漿，與Apaf1、ATP/dATP形成凋亡體，凋亡體活化caspase 9前體，caspase 9下游途徑與死亡受體途徑相同。14 原癌基因的概念、分類、激活機(jī)制，抑癌基因的基本概念、常見抑癌基因的基本功能

28、。答：原癌基因，指存在于細(xì)胞內(nèi)，正常情況下不激活，與細(xì)胞增殖相關(guān)，是維持機(jī)體正常生命活動所必須的，在進(jìn)化上高等保守的序列。當(dāng)原癌基因的結(jié)構(gòu)或調(diào)控區(qū)發(fā)生變異，基因產(chǎn)物增多或活性增強(qiáng)時，使細(xì)胞過度增殖，從而形成腫瘤。原癌基因按生化功能分為三類：蛋白激酶類生長因子，G蛋白、及與其活性相關(guān)的蛋白質(zhì)，核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子?；罨瘷C(jī)制有5種：點(diǎn)突變，基因擴(kuò)增，基因重排，染色體易位，病毒基因啟動子及增強(qiáng)子的插入。抑癌基因是一類抑制細(xì)胞增生，從而抑制腫瘤形成的隱性基因。抑癌基因功能：RB和p53基因調(diào)節(jié)細(xì)胞周期關(guān)卡，抑癌基因通過調(diào)節(jié)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)而抑制細(xì)胞生長，DNA修復(fù)基因維持基因組穩(wěn)定。15 重組DNA技術(shù)中常用工具酶的

29、主要特點(diǎn)和用途，RE的命名、分類及其活性影響因素。答：基因克隆中最主要的工具酶有：限制性核酸內(nèi)切酶，用于切割DNA，識別雙鏈DNA分子內(nèi)部特異位點(diǎn)裂解磷酸二酯鍵。DNA聚合酶，用于合成DNA。 逆轉(zhuǎn)錄酶，以RNA為模板合成cDNA。T4 DNA連接酶，催化DNA片斷連接。 堿性磷酸酶，去除核酸末端磷酸。限制酶第一個字母(大寫，斜體)代表該酶的微生物(寄主菌)屬名；第2、3個字母(小寫，斜體)代表微生物種名。接下來的字母代表寄主菌的株或型。如果從一種菌株中發(fā)現(xiàn)了幾種限制酶，則根據(jù)發(fā)現(xiàn)和分離的順序用羅馬字母表示。16 基因工程載體基本概念、基本條件，基因工程常用載體的特點(diǎn)及主要用途。答：載體：攜帶

30、靶DNA片段（外源DNA片段）進(jìn)入宿主細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增和表達(dá)的工具?？寺≥d體：主要用來獲得大量純化的目的DNA片段（目的基因），以便進(jìn)一步研究其結(jié)構(gòu)和功能。表達(dá)載體：主要用來產(chǎn)生插入基因和mRNA，進(jìn)而合成相關(guān)蛋白質(zhì)。載體基本條件： 能自主復(fù)制； 具備篩選標(biāo)記；適當(dāng)大小的分子量和適當(dāng)限制性內(nèi)切酶酶切位點(diǎn)； 在細(xì)胞中拷貝數(shù)高；應(yīng)配備有與宿主細(xì)胞相適應(yīng)的啟動子、前導(dǎo)順序、加尾信號、增強(qiáng)子等調(diào)控DNA元件常用的載體：質(zhì)粒、噬菌體、病毒載體等質(zhì)粒載體。用途：保存和擴(kuò)增片段小于2kb的DNA、構(gòu)建cDNA文庫、目的DNA測序、制備探針。 特點(diǎn)：分子量較小，能在細(xì)菌內(nèi)穩(wěn)定存在；具有多個遺傳標(biāo)志，能對宿主細(xì)胞選

31、擇；具有多個限制性內(nèi)切酶單一切點(diǎn)，便于外源基因插入。 缺點(diǎn)：所能接受的DNA片段容量??；轉(zhuǎn)化效率低。噬菌體載體，包括插入型載體和置換型載體。用途：重要的基因組文庫和cDNA文庫克隆載體。 優(yōu)點(diǎn)：能攜帶的外源DNA片段更長，感染能力也大于質(zhì)粒載體。缺點(diǎn)：進(jìn)行真核基因組文庫構(gòu)建時，其容量仍然受到一定的限制。粘粒載體。用途：根據(jù)載體攜帶的抗藥性標(biāo)記篩選陽性克隆細(xì)胞株。 特點(diǎn)：含質(zhì)粒抗藥性標(biāo)記和自主復(fù)制成分，可在細(xì)菌內(nèi)大量擴(kuò)增；帶粘性末端區(qū)，可體外包裝；有多個限制性內(nèi)切酶酶切位點(diǎn)；本身不大；重組體的本底很低，有利于篩選。 BAC。特點(diǎn)：與標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒載體相似，但有不同的ori和編碼ori蛋白的F因子、可容

32、納大于300kb的外源DNA、重組子可通過電脈沖穿孔高效導(dǎo)入細(xì)菌細(xì)胞、進(jìn)入細(xì)胞的拷貝數(shù)低。YAC。用途：人類基因組計劃中作物理圖的工具。 優(yōu)點(diǎn)：酵母是真核細(xì)胞能克隆真核基因序列尤其是重復(fù)序列、能克隆很大的DNA片段（2Mb）。 缺點(diǎn)：轉(zhuǎn)化效率低，形成的克隆數(shù)少，每個細(xì)胞僅含一個拷貝。17 真核生物基因轉(zhuǎn)染的常用方法及其原理。答：磷酸鈣共沉淀法。將外源DNA或重組質(zhì)粒DNA與CaCl2溶液混合后形成DNA-磷酸鈣微小顆粒加入到宿主細(xì)胞培養(yǎng)基，顆粒沉淀到細(xì)胞表面被宿主攝取，將DNA導(dǎo)入細(xì)胞。電穿孔法。將外源DNA與宿主細(xì)胞混合于電穿孔杯中，在高頻電流作用下，細(xì)胞膜出現(xiàn)很多小孔，使外源DNA進(jìn)入宿主

33、細(xì)胞。DEAE-葡聚糖法。將外源DNA或重組質(zhì)粒DNA與DEAE葡聚糖混合，DEAE葡聚糖帶大量正電荷化學(xué)基團(tuán)，可與DNA帶負(fù)電荷磷酸基團(tuán)結(jié)合，黏附于細(xì)胞表面，借助細(xì)胞內(nèi)吞過程促進(jìn)外援DNA進(jìn)入細(xì)胞。脂質(zhì)體。陽離子脂質(zhì)體試劑與DNA混合后形成穩(wěn)定脂質(zhì)雙層復(fù)合物，加入培養(yǎng)細(xì)胞，脂質(zhì)體可直接與細(xì)胞融合，DNA被釋放到胞漿。顯微注射法。將外源基因通過毛細(xì)玻璃管在顯微鏡下直接注射到受精卵的細(xì)胞核。18 PCR技術(shù)的基本原理、反應(yīng)體系構(gòu)成及其優(yōu)化，PCR優(yōu)化的條件，主要應(yīng)用。答：PCR是在試管中進(jìn)行的DNA復(fù)制反應(yīng)，是以擬擴(kuò)增的DNA分子為模板，以一對分別與模板5端和3端互補(bǔ)的寡核苷酸片段為引物，在DN

34、A聚合酶作用下，按半保留復(fù)制的機(jī)制沿著模板鏈延伸直至完成新的DNA合成，反復(fù)重復(fù)這一過程，可使目的DNA片段得到擴(kuò)增。參與PCR反應(yīng)體系的因素：模板核酸；引物；緩沖液Tag DNA聚合酶；Mg 2；dNTP；反應(yīng)溫度與循環(huán)次數(shù)；PCR儀等。應(yīng)用：目的基因克隆，基因體外突變，DNA微量分析mRNA含量分析。可應(yīng)用于遺傳病的基因診斷；腫瘤的診斷、轉(zhuǎn)移確定；組織器官移植的配型選擇等等。 優(yōu)化條件: Mg2+降低濃度阻止非特異和不想要的PCR產(chǎn)物。增加濃度贏得更多的產(chǎn)量。EDTA螯合Mg2+，因而可以改變Mg2+的濃度。DNA模板濃度為了減少Taq DNA聚合酶的產(chǎn)生錯誤的可能性，使用更高濃度的DNA

35、。但是使用太多可能增加污染物的量，降低反應(yīng)效率。聚合酶與Pfx相比較，TaqDNA聚合酶具有更高的錯配率（沒有可以進(jìn)行校正的3到5外切酶活性）。如果需要高保真度，可以使用Pfx。Taq酶傾向在3末端增加非模板的A.為了提高效率，可以額外增加酶的量（由于Taq酶可能在重復(fù)的循環(huán)中損耗），然而這可能增加非特異的PCR產(chǎn)物.dNTP可以使用高達(dá)1.5mM dNTP。dNTP螯合Mg。過高dNTP可能增加錯配率。降低dNTP的濃度（10-50M）可以減少錯配率。大PCR片段比小的片段要求更多的dNTP。引物可以使用高達(dá)3M的引物。高引物模板比可能導(dǎo)致非特異擴(kuò)增和引物二聚體的形成。小批量分裝儲存引物，以避免多次反復(fù)凍融。熱循環(huán)如果模板GC含量高，增加變性的時間。對于較大的PCR片段應(yīng)該增加延伸的時間，但是這