I型跨膜糖蛋白在砷中毒大鼠腎小球細(xì)胞的表達(dá)

1、I型跨膜糖蛋白在砷中毒大鼠腎小球細(xì)胞的表達(dá)         【摘要】  目的： 探討I型跨膜糖蛋白（Fas）在砷中毒大鼠腎小球細(xì)胞表達(dá)的影響。方法： 復(fù)制砷中毒大鼠模型，測(cè)血砷、尿砷，免疫組織化學(xué)SABC方法檢測(cè)腎小球細(xì)胞Fas的表達(dá)，并圖像分析計(jì)數(shù)。結(jié)果： 慢性砷中毒高劑量組(25.6±3.99)和低劑量組(8.76±2.15)腎小球細(xì)胞Fas表達(dá)較對(duì)照組(1.30±1.57)明顯增多,P0.01。結(jié)論： 慢性砷中毒使腎小球細(xì)胞Fas表達(dá)明顯增加,提示Fas可能參與慢性砷中

2、毒腎小球細(xì)胞凋亡的調(diào)控。 【關(guān)鍵詞】  砷中毒； 腎小球； 糖蛋白類(lèi)； 腫瘤壞死因子； 大鼠，Sprague-Dawley； I型跨膜糖蛋白   Abstract Objective: To investigate Fas expression in renal glomerulus cells of chronic arsenic poisoned rats. Methods： Rats models of chronic arsenic poisoning were made by drinking AS2O3 water solution of high d

3、osage (10 mg·kg-1·d-1) and low dosage (0.4 mg·kg-1·d-1) respectively.Contents of arsenic in blood and urine in rats were meaeured.The expression of Fas in the glomerulus cells was detected with immunohistochemistry method, and numbers of positive cells were counted through image

4、pattern analysis. Results： The average Fas positive cell number in renal glomerulus of high-dose arsenic group (25.6±3.99) and low-dose arsenic group (8.76.±2.15 ) were much higher than that of control group (1.30±1.57)(P0.01). Conclusions:  Chronic arsenic poison obviously incre

5、ase Fas expression in renal glomerulus cell, which suggests that Fas might participate the regulation of apoptosis of chronic arsenic poisoned renal glomerulus cell.   Key words  arsenic poisoning； kidney glomerulus; glycoproteins; tumor necrosis factor; rats,Sprague-Dawley; transmemb

6、rane protein    砷可引起器官細(xì)胞凋亡已有報(bào)道，但砷中毒引起腎小球細(xì)胞凋亡少見(jiàn)報(bào)道13。2007-2008年通過(guò)建立大鼠亞慢性砷中毒模型，從砷中毒對(duì)腎臟損害的角度探討Fas在細(xì)胞凋亡調(diào)控中的作用，為砷中毒發(fā)病機(jī)理和防治提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。   1  材料與方法   1.1  動(dòng)物分組及染毒   選擇清潔級(jí)SD大鼠30只，體重為100120 g，貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，批號(hào)為SCXK(黔)2002-0001，隨機(jī)分為3組，高劑量組、低劑量組、對(duì)照組，每組10只，雌雄各半，用三氧化二砷（

7、AS2O3）溶于水中自由飲水染毒，（AS2O3由省公安廳審批，貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院設(shè)備處提供）。低劑量組（L組）AS2O3每天按0.4 mg/kg，高劑量組（H組）每天10 mg/kg。每周稱(chēng)體重，調(diào)節(jié)并維持給藥量，連續(xù)染毒4個(gè)月。   1.2  砷中毒大鼠尿砷、血砷的測(cè)定    染毒結(jié)束后，采用代謝籠收集染毒大鼠的24 h尿液，股動(dòng)脈取血并放血處死大鼠，測(cè)定前樣品用濃酸氧化消化處理、碘化鉀還原、去離子水定容，由貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院檢測(cè)中心采用“氫化物發(fā)生電感耦合等離子發(fā)射光譜法測(cè)定尿砷、血砷的含量。   1.3 

8、; 取材制片及免疫組織化學(xué)染色   股動(dòng)脈放血?dú)⑹螅?0%中性福爾馬林心臟灌注固定。迅速取下右腎，10%中性福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片4 m，HE染色，免疫組織化學(xué)SABC法觀察腎小球細(xì)胞Fas表達(dá)情況。試劑盒由武漢博士德生物有限公司提供，嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，DAB顯色，PBS液代替一抗作陰性對(duì)照。   1.4  細(xì)胞計(jì)數(shù)及圖像分析   每組標(biāo)本隨機(jī)觀察10張切片，每張切片隨機(jī)觀察10個(gè)腎小球，光鏡下觀察細(xì)胞質(zhì)顯示為棕黃色是陽(yáng)性細(xì)胞并計(jì)數(shù)。用Biomias圖像分析軟件（四川大學(xué)），計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)測(cè)定Fas陽(yáng)

9、性細(xì)胞平均灰度值，經(jīng)SPSS11.50軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)經(jīng)單因素方差分析檢驗(yàn)判斷顯著性意義。             2  結(jié)果   2.1  大鼠尿砷及血砷測(cè)定結(jié)果   大鼠尿砷、血砷測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。表1  大鼠血、尿砷值(1)與對(duì)照組比較，P0.01；(2)與低劑量組比較，P0.01   2.2  腎小球細(xì)胞Fas表達(dá)的檢測(cè)結(jié)果   對(duì)照組大鼠腎小球細(xì)胞未見(jiàn)F

10、as表達(dá)的細(xì)胞（圖1），砷中毒低劑量組腎小球有少量細(xì)胞Fas陽(yáng)性表達(dá)(圖2)，高劑量組腎小球細(xì)胞Fas表達(dá)明顯增多（圖3），和對(duì)照組、低劑量組比較，F(xiàn)as表達(dá)細(xì)胞計(jì)數(shù)以及平均灰度值(表2)，經(jīng)One-Way ANOVA檢驗(yàn)，P0.01，差異有顯著性。    3  討論   砷是一種基因毒物，無(wú)機(jī)砷對(duì)腎臟的損害，可引起尿中-微球蛋白明顯增高，腎小球發(fā)生病理學(xué)改變，這已從流行病學(xué)角度得以提示4,5。但這些損害是否與細(xì)胞凋亡調(diào)控基因及細(xì)胞凋亡有關(guān)，少見(jiàn)報(bào)道。從動(dòng)物模型角度探討Fas在砷中毒腎小球細(xì)胞的表達(dá)，探討砷對(duì)腎臟損害是否與細(xì)胞凋亡調(diào)控

11、基因Fas有關(guān)，以期為砷中毒的發(fā)病機(jī)理和表2  I型跨膜糖蛋白陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)及平均灰度值 (1)與對(duì)照組比較，P0.01；(2)與低劑量組比較，P0.01   防治提供形態(tài)學(xué)依據(jù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，血砷和尿砷在高劑量組和低劑量組明顯高于對(duì)照組，砷中毒高劑量組和低劑量組腎小球細(xì)胞Fas表達(dá)較對(duì)照組明顯增高。   Fas（CD95）為型跨膜糖蛋白，屬于腫瘤壞死因子（TNF）和神經(jīng)生長(zhǎng)因子（NGF）受體家族，廣泛分布于各種組織和器官，如：肝臟、心臟、腎臟等6。Fas在各種疾病和細(xì)胞凋亡的發(fā)生中起到首要作用7。Fas基因和配體Fasl不光介導(dǎo)了細(xì)胞凋亡的效應(yīng)機(jī)

12、制，還參與了免疫自穩(wěn)、腫瘤逃逸等，AS2O3可上調(diào)Fas的表達(dá)8。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，慢性砷中毒導(dǎo)致腎小球細(xì)胞Fas表達(dá)增強(qiáng)，推測(cè)上調(diào)的Fas與Fasl結(jié)合，導(dǎo)致了Fas相關(guān)死亡決定簇（FADD）的募集，啟動(dòng)了caspase家族酶鏈反應(yīng)，通過(guò)激活caspase-8，到caspase-3最終引起腎小球細(xì)胞損傷和凋亡。關(guān)于砷中毒引起腎小球細(xì)胞凋亡有待于深入研究?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1 張愛(ài)華，洪峰，黃曉欣，等.燃煤型砷中毒患者遺傳損傷及癌變機(jī)理J.中國(guó)地方病學(xué)雜志，2003（1）：12-15.劉曉立，孫殿軍.砷的致癌機(jī)制J.中國(guó)地方病學(xué)雜志，2004（6）：624-626.楊東焱，梁超軻，金銀龍,等.砷對(duì)原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡的研究J.中國(guó)地方病學(xué)雜志，2003（3）：204-206.洪峰，金泰廙，張愛(ài)華.應(yīng)用基準(zhǔn)劑量法探討砷、鎘接觸人群腎功能損害危險(xiǎn)性評(píng)價(jià)J.中華預(yù)防醫(yī)醫(yī)學(xué)雜志，2004（6）：374-378.楊運(yùn)旗，孫蘭英，黃曉欣，等.慢性燃煤