植物組織中可溶性糖與淀粉的測(cè)定

1、植物組織中可溶性糖與淀粉的測(cè)定一、意酮法測(cè)定可溶性糖【儀器與用具】分光光度計(jì)；電爐；鋁鍋；20ml刻度試管；刻度吸管5ml1支，1ml2支；記號(hào)筆；吸水紙適量?！驹噭? .慈酮乙酸乙酯試劑：取分析2酮1g,溶于50ml乙酸乙酯中，貯于棕色瓶中，在黑暗中可保存數(shù)星期，如有結(jié)晶析出，可微熱溶解。2 .濃硫酸（比重）?！痉椒ā? .標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作取20ml刻度試管11支，從010分別編號(hào)，按表24-1加入溶液和水。表1各試管加溶液和水的量管號(hào)012345678910100pg/ml蔗糖液(ml)0水(ml)蔗糖量（Hg）020406080100然后按順序向試管內(nèi)加入1ml9%茶酚溶液，搖勻，再?gòu)墓?/p>

2、液正面快速加入5ml濃硫酸，搖勻。比色液總體積為8ml,在恒溫下放置30min,顯色。然后以空白為參比，在485nm波長(zhǎng)下比色測(cè)定，以糖含量為橫坐標(biāo)，光密為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出標(biāo)準(zhǔn)直線方程。按表1加入標(biāo)準(zhǔn)的蔗糖溶液，然后按順序向試管中加入慈酮乙酸乙酯試劑和5ml濃硫酸，充分振蕩，立即將試管放入沸水浴中，逐管均準(zhǔn)確保溫1min,取出后自然冷卻至室溫，以空白作參比，在630nm波長(zhǎng)下測(cè)其光密度，以光密度為縱坐標(biāo)，以糖含量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并求出標(biāo)準(zhǔn)線性方程。2 .可溶性糖的提取取新鮮植物葉片，擦凈表面污物，剪碎混勻，稱取0.30g,共3份，或干材料。分別放入3支刻度試管中，加入510m

3、l蒸儲(chǔ)水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min（提取2次），提取液過(guò)濾入25ml容量瓶中，反復(fù)沖洗試管及殘?jiān)ㄈ葜量潭取? .顯色測(cè)定吸取樣品提取液于20ml刻度試管中（重復(fù)2次），加蒸儲(chǔ)水，以下步驟與標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定相同，測(cè)定樣品的光密度。4 .計(jì)算可溶性糖的含量可溶性糖含量（mg/g尸W103式中C標(biāo)準(zhǔn)方程求得糖量（pg）;a V n W吸取樣品液體積（ml）;提取液量（ml）;-稀釋倍數(shù)；組織重量（g）四、淀粉含量的測(cè)定【儀器與用具】電子天平；容量瓶：100mlX4,50mlx2;漏斗；小試管若干支；電爐；刻度吸管X1,X3,5mlX4;分光光度計(jì)；記號(hào)筆。【試劑】（1）濃硫酸（比重）；（

4、2） LHCQ;（3） 2嫄酮試劑：同意酮法（或9豚酚，同方法一）；（4）淀粉標(biāo)準(zhǔn)液：準(zhǔn)確稱取100mgM淀粉，放入100ml容量瓶中,加6070ml熱蒸儲(chǔ)水，放入沸水浴中煮沸，冷卻后加蒸儲(chǔ)水稀釋至刻度，則每ml含淀粉1mg吸取此液，加蒸儲(chǔ)水稀釋至50ml,即為每ml含淀粉100wg的標(biāo)準(zhǔn)液?！痉椒ā?.標(biāo)準(zhǔn)曲線制作取小試管11支從010編號(hào)，按表2加入溶液和蒸儲(chǔ)水以下步驟按苯酚法或慈酮法均可，繪制相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。表2各試管加入標(biāo)準(zhǔn)液和蒸儲(chǔ)水量管號(hào)012345678910淀粉標(biāo)準(zhǔn)液（ml）0蒸儲(chǔ)水（ml）0淀粉含量（mg»040801201602002.樣品提取將提取可溶性糖以后的殘

5、渣，移入50ml容量瓶中，力口20ml熱蒸儲(chǔ)水，放入沸水浴中煮沸15min,再加入L高氯酸2ml提取15min,冷卻后，混勻，用濾紙過(guò)濾，并用蒸儲(chǔ)水定容（或以2500r/min離心10min）。3.測(cè)定可采用苯酚法或慈酮顯色法測(cè)定按下式計(jì)算淀粉的含量。淀粉水解時(shí)，在單糖殘基上加了1分子水，因而計(jì)算時(shí)所得的糖量乘以才為扣除加入水量后的實(shí)際淀粉含量。淀粉含量（%c V a_ =W 106100式中C標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的淀粉含量（wg）;V提取液總量（ml）;a一顯色時(shí)取液量（ml）;W-樣品重（g）。注：淀粉水解完全度試驗(yàn)樣品測(cè)定中可同時(shí)作1份用于淀粉水解完全度檢驗(yàn)的樣品，在酸解過(guò)濾后，將其殘?jiān)由?ml