生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)習(xí)題及參考答案.

1、生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)習(xí)題及解答 一、名詞解釋1、pI;2、層析；3、透析；4、SDS-聚丙烯酰氨凝膠電泳；5、蛋白質(zhì)變性;6、復(fù)性；7、Tm 值；8、同工酶;9、Km值;10、DNA變性;11、退火;12、增色效應(yīng)二、基礎(chǔ)理論單項(xiàng)選擇題1、用下列方法測(cè)定蛋白質(zhì)含量，哪一種方法需要完整的肽鍵？（A、雙縮月尿反應(yīng)B、凱氏定氮C、紫外吸收D、竣肽酶法2、下列哪組反應(yīng)是錯(cuò)誤的？（A、葡萄糖Molish反應(yīng)B、膽固醇Libermann-Burchard反應(yīng)C、色氨酸坂口（Sakaguchi反應(yīng)D、氨基酸西三酮反應(yīng)3、SangerM齊1J是（A、苯異硫氟酸B、2,4-二硝基氟苯C、丹磺酰氯D、-琉基乙醇4、肽鍵在

2、下列哪個(gè)波長(zhǎng)具有最大光吸收？（A、 215nmB、 260nmC、 280nmD、 340nm5、下列蛋白質(zhì)組分中，哪一種在280nm具有最大的光吸收？（A、色氨酸的呷咪基B、酪氨酸的酚環(huán)C、苯丙氨酸的苯環(huán)D、半胱氨酸的硫原子6、SDS凝膠電泳測(cè)定蛋白質(zhì)的相對(duì)分子量是根據(jù)各種蛋白質(zhì)（A、在一定pH值條件下所帶的凈電荷的不同B、分子大小不同C、分子極性不同D、溶解度不同7、蛋白質(zhì)用硫酸俊沉淀后，可選用透析法除去硫酸俊。硫酸俊是否從透析袋中 除凈，你選用下列哪一種試劑檢查？（A、西三酮試劑B、奈氏試劑C、雙縮月尿試劑D、Folin-酚試劑8、蛋白質(zhì)變性是由于（A、一級(jí)結(jié)構(gòu)改變B、亞基解聚C、空間構(gòu)

3、象破壞D、輔基脫落9、用生牛奶或生蛋清解救重金屬鹽中毒是依據(jù)蛋白質(zhì)具有（A、膠體性B、粘性C、變性作用D、沉淀作用10、有關(guān)變性的錯(cuò)誤描述為（A、蛋白質(zhì)變性后，其一級(jí)結(jié)構(gòu)和空間結(jié)構(gòu)改變B、蛋白質(zhì)變性后，其理化性質(zhì)和生物學(xué)活性改變C、加熱、紫外線照射、超聲波等可以引起蛋白質(zhì)變性D、變性蛋白質(zhì)粘度增加，易被酶水解，易沉淀11、雙鏈DNA熱變性后（A、黏度下降B、沉降系數(shù)下降C、浮力密度下降D、紫外吸收下降12、酶的活化和去活化循環(huán)中，酶的磷酸化和去磷酸化位點(diǎn)通常在酶的哪一種 氨基酸殘基上？（A、大冬氨酸B、脯氨酸C、賴(lài)氨酸D、絲氨酸13、在生理?xiàng)l件下，下列哪種基團(tuán)既可以作為H+的受體也可以作為H+

4、的供 體？（A、His的咪唾基B、Arg的“瓜基C、Cys的琉基D、Trp的呷咪基三、填空1、脯氨酸和羥脯氨酸與西三酮反應(yīng)產(chǎn)生（色物質(zhì)，而其他氨基酸與西三酮產(chǎn)生 （色的物質(zhì)。2、通?？捎米贤夥止夤舛确y(cè)定蛋白質(zhì)的含量，這是因?yàn)榈鞍踪|(zhì)分子中的（、 （、（三種氨基酸的共腕雙鍵有紫外吸收能力。3、移液槍在每次實(shí)驗(yàn)后應(yīng)將刻度調(diào)至（，讓彈簧回復(fù)原型以延長(zhǎng)移液槍的使用 壽命，并嚴(yán)禁吸?。?。4、使用離心機(jī)時(shí)，如有噪音或機(jī)身振動(dòng)時(shí)，應(yīng)立即（，并且離心管須對(duì)稱(chēng)放入套管 中,防止機(jī)身振動(dòng)，若只有一支樣品管，則另外一支要用（代替。5、測(cè)定蛋白質(zhì)濃度的方法主要有（、（、（。6、利用蛋白質(zhì)不能通過(guò)半透膜的特性，使它和其

5、他小分子物質(zhì)分開(kāi)的方法有 （和（等。7、核酸在260nm附近有強(qiáng)吸收，這是由于（。8、雙鍵DNA熱變性后，或在pH2以下，或在pH12以上時(shí)，其OD260（，同樣條件 下，單鍵DNA的OD260（。9、硝酸纖維素膜可結(jié)合（鏈核酸。將RNA變性后轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上再進(jìn) 行雜交，稱(chēng)（印跡法。10、常用二苯胺法測(cè)定（含量，用苔黑酚法測(cè)定（含量。11、變性DNA的復(fù)性與許多因素有關(guān) 包括（、卜（、«（。12、溫度對(duì)酶活力影響有以下兩方面：一方面（，另一方面（。13、維生素C是（酶的輔酶，另外還具有（作用。14、在分光光度計(jì)的使用或檢定中，（的準(zhǔn)確度是衡量?jī)x器工作性能的一項(xiàng)重要 指標(biāo)，它的準(zhǔn)

6、確程度直接關(guān)系到所測(cè)數(shù)據(jù)的可信性及科學(xué)性。（的誤差越大，測(cè)試結(jié)果的可信性越差，從而影響到測(cè)試數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。四、問(wèn)答1、紫外分光光度法測(cè)定核酸含量的原理。2、蛋白質(zhì)變性與沉淀的關(guān)系。3、牛乳中制備酪蛋白的原理和方法。4、試述凝膠成像系統(tǒng)操作時(shí)應(yīng)注意的事項(xiàng)。5、若樣品中含有蛋白質(zhì)和核甘酸等雜質(zhì)，如何排除干擾？6、體液血糖測(cè)定有哪些方法？7、DNA在電場(chǎng)中的遷移率取決于哪些因素 ？8、瓊脂糖凝膠有哪些注意事項(xiàng)？9、考馬斯亮藍(lán)G-250法測(cè)定蛋白質(zhì)含量的原理是什么？10、何謂Rf值?影響Rf值的主要因素是什么？11、蛋白質(zhì)分離和純化的一般方法？12、如何正確選擇核酸電泳指示劑？一、名詞解釋1、指氨基酸

7、的正離子濃度和負(fù)離子濃度相等時(shí)的 pH值,用符號(hào)pI表示。2、按照在移動(dòng)相和固定相（可以是氣體或液體之間的分配比例將混合成分分開(kāi) 的技術(shù)。3、通過(guò)小分子經(jīng)過(guò)半透膜擴(kuò)散到水（或緩沖液的原理，將小分子與生物大分子 分開(kāi)的一種分離純化技術(shù)。4、在去污劑十二烷基硫酸鈉存在下的聚丙烯酰氨凝膠電泳。SDS-PAGE只是按照分子的大小，而不是根據(jù)分子所帶的電荷大小分離的。5、生物大分子的天然構(gòu)象遭到破壞導(dǎo)致其生物活性喪失的現(xiàn)象。蛋白質(zhì)在受 到光照，熱，有機(jī)溶濟(jì)以及一些變性濟(jì)的作用時(shí)，次級(jí)鍵受到破壞，導(dǎo)致天然構(gòu)象的破壞，使蛋白質(zhì)的生 物活性喪失。6、在一定的條件下，變性的生物大分子恢復(fù)成具有生物活性的天然構(gòu)象

8、的現(xiàn) 象。7、核酸分子變性過(guò)程中，紫外吸收達(dá)到最大增量一半時(shí)的溶解溫度。8、能催發(fā)相同的反應(yīng)類(lèi)型但其理化性質(zhì)及免疫學(xué)性質(zhì)不同的酶。9、反應(yīng)速度為最大反應(yīng)速度一半時(shí)的底物濃度。是酶的特征物理學(xué)常數(shù)之 近似表示酶與底物的親和力。10、DNA雙鏈解鏈，分離成兩條單鏈的現(xiàn)象。11、既DNA由單鏈復(fù)性、變成雙鏈結(jié)構(gòu)的過(guò)程。來(lái)源相同的 DNA單鏈經(jīng)退 火后完全恢復(fù)雙鏈結(jié)構(gòu)的過(guò)程，同源DNA之間'DNA和RNA之間，退火后形成雜交 分子。12、當(dāng)雙螺旋DNA熔解（解鏈時(shí),260nm處紫外吸收增加的現(xiàn)象。二、基礎(chǔ)理論單項(xiàng)選擇題1、A;2、C；3、B;4、A;5、A;6、B;7、B；8、C;9、D;10

9、、A;11、A;12、D;13、A;三、填空1、黃、紫2、Trp、Tyr、phe3、最大、強(qiáng)揮發(fā)性、強(qiáng)腐蝕性的液體。4、切斷電源，即時(shí)排除故障；等質(zhì)量的水5、雙縮月尿法、Folin-酚試劑法、凱氏定氮法6、透析、超濾7、在喋吟堿基和喀呢堿基中存在共腕雙鍵8、增加、不變9、單、Northern10、DNA、RNA11、樣品的均一度、DNA的濃度、DNA片段的大小、溫度的影響、溶液的離 子強(qiáng)度12、溫度升高，可使反應(yīng)速度加快；溫度太高，會(huì)使酶蛋白變性而失活13、羥化、解毒14、透射比或吸光度、透射比或吸光度四、問(wèn)答1、答：核酸、核甘酸及其衍生物都具有共腕雙鍵系統(tǒng)，能吸收紫外光,RNA和DNA的 紫

10、外吸收峰在260nm波長(zhǎng)處。一般在260nm波長(zhǎng)下，每1ml含1由RNA溶液的光 吸收值為0.0220.024每1m1含1聞DNA溶液的光吸收值約為0.020,故測(cè)定未知濃 度RNA或DNA溶液在260nm的光吸收值即可計(jì)算出其中核酸的含量。此法操作 簡(jiǎn)便,迅速。若樣品內(nèi)混雜有大量的核甘酸或蛋白質(zhì)等能吸收紫外光的物質(zhì)，則測(cè)光誤差較大，故應(yīng)設(shè)法事先除去。6、答：沉淀可以是由蛋白質(zhì)變性從而產(chǎn)生沉淀，也可以是由于鹽析。蛋白質(zhì)變性是指 光照，熱，有機(jī)溶濟(jì)以及一些變性劑（如重金屬鹽的作用時(shí)蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)被破壞， 使得蛋白質(zhì)喪失活性，該過(guò)程不可逆。鹽析是指向蛋白質(zhì)的溶液中加入輕金屬鹽 ，使 得蛋白質(zhì)沉淀

11、析出，這是由于加入鹽降低了蛋白質(zhì)得溶解度而析出，該過(guò)程可逆，加水 蛋白質(zhì)又會(huì)溶解。二者本質(zhì)上是不同的。3、答：牛奶含有半乳糖、蛋白質(zhì)、脂肪成分。蛋白質(zhì)中的酪蛋白通過(guò)等電點(diǎn)沉淀，冉通過(guò)離心而獲得，糖類(lèi)小分子由于處于清夜中而分離，沉淀物中所含有的脂肪通過(guò)有 機(jī)溶劑抽提而去除，最終得到純白色、晶狀酪蛋白。方法:取新鮮牛乳，用酸堿調(diào)PH到酪蛋白的等電點(diǎn)沉淀析出酪蛋白，然后洗滌，醇 醴吸水至干燥得粉末稱(chēng)重，計(jì)算提取率。步驟：保溫一調(diào)PH沉淀一離心一洗滌一 干燥一稱(chēng)量4、答:1紫外凝膠照相時(shí)要防止EB污染儀器，在紫外透射燈樣品臺(tái)上墊上藍(lán)色和白色 膠片，開(kāi)關(guān)凝膠成像系統(tǒng)前面板那、操作GeneSna琳件之時(shí)都

12、不可以戴手套。白光透射光 源放置在紫外透射光源上面時(shí)要把藍(lán)色和白色膠片取出。2注意開(kāi)機(jī)順序，先開(kāi)凝膠成像系統(tǒng)，再打開(kāi)電腦進(jìn)入GeneSna解件。3在使用紫外光源照相的過(guò)程中，不可以打開(kāi)凝膠成像系統(tǒng)前面板。5、答：用去垢劑（如SDS,十二烷基磺酸鈉使蛋白質(zhì)變性，RNA通過(guò)RNase消化清除。測(cè)定血糖的方法常用的有三種：靜脈血漿葡萄糖(VPG,毛細(xì)血管全血葡萄糖 (CBG和靜脈全血葡萄糖(VBG。7、答:1DNA的分子大小及構(gòu)型：？8 A不同構(gòu)型DNA的移動(dòng)速度次序?yàn)椋汗﹥r(jià)閉環(huán) DNA(covalentlyclosed circular,cccDNA直線DNA開(kāi)環(huán)的雙鏈環(huán)狀 DNA。2瓊脂糖濃度：

13、一個(gè) 給定大小的線狀DNA分子，其遷移速度在不同濃度的瓊脂糖凝膠中各不相同。DNA電泳遷移率的對(duì)數(shù)與凝膠濃度成線性關(guān)系。凝膠濃度的選擇取決于DNA分子的大小。3DNA分子的構(gòu)象：當(dāng)DNA分子處于不同構(gòu)象時(shí)，它在電場(chǎng)中移動(dòng)距離不 僅和分子量有關(guān)，還和它本身構(gòu)象有關(guān)。相同分子量的線狀、開(kāi)環(huán)和超螺旋 DNA在 瓊脂糖凝膠中移動(dòng)速度是不一樣的，超螺旋DNA移動(dòng)最快，而線狀雙鏈DNA移動(dòng)最 慢。"4電源電壓:瓊脂糖凝膠分離大分子 DNA實(shí)驗(yàn)條件的研究結(jié)果表明，在低濃 度、低電壓下，分離效果較好。5嵌入染料的存在：熒光染料澳化乙噬用于檢測(cè)瓊脂 糖凝膠中的DNA,染料會(huì)嵌入到堆積的堿基對(duì)之間并拉長(zhǎng)

14、線狀和帶缺口的環(huán)狀 DNA,使其剛性更強(qiáng)，還會(huì)使線狀DNA遷移率降低15%。6離子強(qiáng)度影響：電泳緩沖液的組成及其離子強(qiáng)度影響 DNA的電泳遷移率。8、答：1緩沖液的使用要正確，長(zhǎng)時(shí)間高壓電泳時(shí)，常更新緩沖液或在兩槽間進(jìn)行緩沖 液的循環(huán)是可取的。2瓊脂糖的影響。3凝膠中所加緩沖液應(yīng)與電泳槽中的相一致。4樣品加入量的多少。5電泳系統(tǒng)的變化會(huì)影響DNA的遷移，加入DNA標(biāo)準(zhǔn)參照物進(jìn)行判定是必要 的。6DNA樣品中的鹽濃度也影響DNA的遷移率。7DNA遷移率取決于瓊脂糖凝膠的濃 度、遷移分子的形狀及大小。9、答：考馬斯亮藍(lán) G-250(Coomassie brilliant blue G-250染料，在游離狀態(tài)下溶液呈棕 紅色，當(dāng)它與蛋白質(zhì)結(jié)合后變?yōu)樗{(lán)色。蛋白質(zhì)含量在01000小碘圍內(nèi)，蛋白質(zhì)-色素結(jié)合物在595nm下的吸光度與蛋白質(zhì)含量成正比，故可用比色法進(jìn)行定量分析?？?馬斯亮藍(lán)G-250法(Bradford法是比色法與色素法相結(jié)合的復(fù)合方法，簡(jiǎn)便快捷，靈敏 度高，穩(wěn)定性好，是一種較好的蛋白質(zhì)常用分析方法。10、答：Rf為氨基酸的比移值。 影響紙層析遷移率Rf值的主要因素：1、樣 品本身的性質(zhì)和結(jié)構(gòu)；2、溶劑的性質(zhì)；3、PH值；4、溫度；5、濾紙性質(zhì)。11、答：主要有以下一些方法：透析及超濾法；丙酮沉淀、鹽析及免疫沉淀；電 泳