保健食品中植物類功效成分鑒別試驗方法

1、保健食品中植物類功效成分鑒別試驗方法Distinguish method of plant function component inhealth food1范圍1本方法適用于保健食品中人參、西洋參、陳皮、甘草、大黃、銀杏葉、蘆薈、葛根等植物中的功效成分的鑒別。1本方法規(guī)定了保健食品中人參、西洋參、陳皮、甘草、大黃、銀杏葉、蘆薈、葛根等植物中的功效成分的鑒別方法。一. 陳皮1. 供試液制備1.1 片劑或膠囊稱取研細的試樣2g，加甲醇20mL水浴上回流20min或超聲處理15min，過濾，取濾液10mL濃縮 至干，加甲醇1mL溶解殘渣作為供試品溶液1.2 糖塊：取本品30g，加30mL水使溶解，

2、用稀鹽酸調(diào)節(jié)PH至5 6,以水飽和的正丁醇提取 3次(25、25、20mL) 合并正丁醇液，用水洗兩次(30mL 30mL)取正丁醇液的1/3 量置水浴上蒸干，殘留物用甲醇 1mL溶解制成供試品溶液。2. 對照液制備稱取陳皮對照藥材0.3g，同上處理。另取橙皮甙對照品加甲醇制成飽和溶液，作為對照品溶液。3. 薄層板 硅膠G加5%氫氧化鈉溶液的自制板 5X 20cm,厚300 11 m4點樣 供試液點樣241 L,對照液點樣21 L。5. 展開劑 S-1乙酸乙酯一甲醇一水(100:17:13 )S-2甲苯一乙酸乙酯一甲酸一水(20:10:1:1 ) 上 層溶液6. 展開方式 上行展開兩次展開：展

3、距：第一次3cm,第二次 8cm。7. 顯色 噴以3%三氯化鋁乙醇溶液后略加熱吹干，置紫外光燈365nm下檢視。8. 色譜識別供試品色譜除觀察到橙皮甙熒光斑點外，供試品與對照藥材在相同的位置上顯相同顏色的熒光點。在色譜的中部有明顯的 3個蘭-蘭白色熒光主斑點，為主要鑒別特征。10.艾得康牌立即俏膠囊11. 陳皮對照藥材12. 陳皮甙二. 大黃1.供試液制備取研細的片劑或膠囊粉末 0.1g，加甲醇20mL浸漬1h，過濾，取濾液5mL蒸干，加水10mL使溶解， 再加鹽酸1mL置沸水浴上加熱30min，立即冷卻，用乙醚提 取兩次，每次 20mL，合并乙醚液，蒸干，殘渣加三氯甲烷溶解使成1mL作為供試

4、品溶液溶液，另取大黃酸對照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液作為對照品溶液。3. 薄層板 硅膠H力口 0.3%羧甲基纖維素鈉自制板，5 X20cm,厚度 300 叢 m。4. 點樣分別點樣4卩L。5. 展開劑正己烷一乙酸乙酯一甲酸（30:10:0.5 ）6. 展開方式上行8cmo7. 顯色紫外光燈（365nm）下檢視，再置氨蒸氣中熏數(shù)分鐘后，日光下檢視。8. 色譜識別紫外光燈（365nm）下，供試品色譜中在與對照藥材色譜相應的位置上顯相同的5個橙黃色主斑點，在與大黃酸對照品色譜相應的位置上顯相同的橙黃色熒光斑點。經(jīng)氨蒸氣熏后，置日光下檢視斑點變?yōu)榧t色O1.大黃對照藥材2.三. 甘草1供試液制

5、備 1.1固體試樣片劑及不含油的膠囊稱取研細的試樣2g置于具塞錐瓶中，加乙醚40mL置水浴上加熱回流1h，過濾，藥渣加 甲醇30mL置水浴上加熱回流1h，過濾，濾液蒸干，殘渣加 水40mL使溶解，用水飽和的正丁醇提取3次，每次20mL合并正丁醇提取液，用水洗滌3次后置水浴上蒸干，殘渣加甲醇2mL使溶解作為供試品溶液。含油膠囊稱取試樣2g置于折疊濾紙上，用石油醚分數(shù)次洗去油脂，再將濾紙上的試樣轉(zhuǎn)入具塞錐瓶中，按項下自“加乙醚40mL ”起依法操作。1.2 液體試樣取樣10mL，加水稀釋至40mL。糖塊取適量試樣加水40mL溶解。按項下自“用水飽和的正丁醇提取 3次”起依法操 作。2 對照液制備取

6、甘草對照藥材同法制成對照藥材溶液。再取甘草酸銨對照品，加甲醇制成每1mL含2mg的溶液，作為對照品溶液3 薄層板 硅膠G加1%氫氧化鈉溶液的自制板，5 X20cm,厚度 300 叢 m。4 點樣供試液與對照液分別點樣1 2卩L。5 展開劑乙酸乙酯一甲酸一冰乙酸一水(30:2:2:4 )6 展開方式展開箱用展開劑預平衡 15min，上行展開，展距8cm。7 顯色噴以硫酸乙醇(1 - 10),105 C加熱數(shù)分鐘至斑點顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視。8 色譜識別供試品色譜與對照藥材色譜基本相符，甘 草酸位于色譜的下部1供試液制備1.1固體試樣1. 鷹牌川貝枇把糖2. 甘草對照藥材3. 甘

7、草酸四.人參、西洋參片劑及不含油的膠囊稱取研細的試樣2g置于具塞錐瓶中，加三氯甲烷 40mL，置水浴上加熱回流 1h，棄去三 氯甲烷液，藥渣揮干殘留溶劑，加水0.5mL攪勻濕潤后，加水飽和的正丁醇10mL，超聲處理30min，吸取上清液，加氨 試液(400-1000) 3倍量，搖勻，放置分層，取上層液蒸干， 加甲醇溶解使成1mL，作為供試品溶液。含油膠囊稱取試樣2g置于折疊濾紙上，用石油醚分數(shù)次洗去油脂，再將濾紙上的試樣轉(zhuǎn)入具塞錐瓶中，自“加三氯甲烷40mL ”起同上操作。1.2 液體試樣 取樣液10mL，加水飽和正丁醇 20mL , 振搖提取，分取正丁醇層，加氨試液( 4001000) 3倍

8、量， 搖勻，放置分層，取上層液蒸干，加甲醇溶解使成1mL ,作為供試品溶液。2對照液制備 取人參或西洋參對照藥材約1g,依上法同樣處理，為藥材對照液。另取人參皂甙Rb1 Re Rg1 F11對照品，加甲醇溶解，使成每1mL各含2mg的混合溶液，作為對照品溶液3 薄層板 硅膠G自制板，5X 20cm,厚度300 500卩m。4點樣 供試液210卩L,對照液2卩L,點樣后的薄層 板置硅膠干燥器中過夜。5 展開劑 三氯甲烷一乙酸乙酯一甲醇一水（15:40:22:10 ）置于100mL具塞量筒中混勻， 置4C冰箱中 放置，待分層至上層體積為 5mL時，將上層液體吸出，棄去， 搖勻后使用。6展開方式 展

9、開槽內(nèi)加入展開劑10mL,槽內(nèi)用硫酸控制相對濕度為42%硫酸57mL+水 100mL）。室溫25C,平衡15min后，上行展開12 14cm,取出揮干溶劑。7 顯色硫酸乙醇溶液（1-10） 105 C加熱數(shù)分鐘至斑點顯色清晰，分別置日光和紫外光燈（365nm）下觀察8色譜識別供試品的可見光色譜及熒光色譜與對照藥材色譜基本相符，主斑點自下而上為Rb1 Re Rgi。西洋參用與人參相同方法制備供試液，在薄層色譜上，西洋參含 有的人參皂甙F11,人參不含，而人參含有的人參皂甙Rf，西洋參不含，可作為人參與西洋參鑒別的依據(jù)，人參皂甙Rf位于Rg1的上方，F(xiàn)11位于人參皂甙Rf的上方。1. 二參含片（含

10、人參、西洋參）1.虎哥牌生力膠囊（含人參）2. 人參對照藥材2.人參對照藥材3. 西洋參對照藥材3.人參皂甙Rb1、Re、Rg1、 F11五. 銀杏葉1供試液制備片劑及不含油的膠囊稱取研細成粉末的試樣 4g置于250mL具塞錐瓶中，加50%的丙酮100mL，加熱回流2.5h， 放冷。用濾紙過濾，濾液蒸去丙酮，放冷，殘液用乙酸乙酯提取2次，每次50mL，合并提取液，蒸干。殘渣用2mL15% 乙醇溶解，加于聚酰胺柱上（30 60目2.5g，柱內(nèi)徑1.5cm， 干法裝柱），用5%乙醇洗脫，收集洗脫液 200mL，濃縮至 50mL，放冷。濃縮液用乙酸乙酯提取 2次，每次50mL，合 并提取液，蒸干，用

11、丙酮 5mL溶解殘渣，作為供試品溶液。1.12含油膠囊稱取膠囊內(nèi)容物 4g置于折疊濾紙上，用石油醚分數(shù)次洗去油脂后，揮干溶劑，將濾紙上的試樣轉(zhuǎn)入250mL具塞錐瓶中按項下自“加50%的丙酮100mL ” 起，依法操作。1.1.3 沖劑稱取研細成粉末的試樣4g，力口 50%丙酮100mL使溶解，用濾紙過濾，濾液蒸去丙酮，放冷，殘渣用 乙酸乙酯提取2次，每次50mL，合并提取液，蒸干，用丙 酮5mL溶解殘渣，作為供試品溶液2對照液制備取銀杏內(nèi)酯 A、B、C及白果內(nèi)酯對照品加丙酮制成每1mL含0.5mg的混合溶液，作為對照品溶液。3薄層板 用含4%醋酸鈉的羧甲基纖維素鈉溶液制備的硅膠H板，5X 20

12、cm,厚度300卩m4點樣 供試品溶液和對照品溶液各點樣 5卩L,可增加供 試品溶液的點樣量以確定試樣中是否含有銀杏。5展開劑 甲苯一乙酸乙酯一丙酮一甲醇(10:5:5:0.6)6 展開 在15C以下展開，上行12cm,取出晾干。7 顯色 在140160 C加熱 30min，置紫外燈(365nm) 下檢視。上，顯相同顏色的熒光斑點1.試樣 Gincosan4.西洋參銀杏葉茶6.日和素未檢出銀杏葉 4 pL2.益智靈5.銀杏內(nèi)酯 A、B、C7.日和素8 p L3.GIMKGOPOWER8. 日和素12 p, L4. 銀杏內(nèi)酯 A、 B、 C、 白果內(nèi)酯9. 銀杏內(nèi)酯A、B、C白果內(nèi)酯六. 葛根1

13、 供試液制備1.1片劑或膠囊1.1.1 稱取研細的試樣2g加甲醇30mL,放置2h，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇溶解使成1mL作為供試品溶液。1.1.2 按制備的供試品溶液如果含有較多雜質(zhì)，影響薄層色譜分離，可改用下述方法制備供試品液：稱取研細的試樣2g,加乙醇40mL加熱回流30min，濾過，濾液蒸干， 殘渣加0.3%氫氧化鈉溶液20mL溶解后移入分液漏斗中，用 稀鹽酸（2341000）調(diào)節(jié)pH5 6后用乙酸乙酯 20mL振搖 提取，分取乙酸乙酯層，用無水硫酸鈉脫水，過濾，再用乙 酸乙酯20mL提取一次，合并濾液，蒸干，殘渣加2mL乙酸乙酯溶解，離心后取上清液作為供試品溶液。1.2 液體試樣取

14、搖勻的試樣20mL置分液漏斗中，加乙酸乙酯20mL振搖提取，分取乙酸乙酯層，用無水硫酸鈉脫 水，濾過，再用乙酸乙酯 20mL提取一次，合并兩次濾液， 蒸干，殘渣加乙酸乙酯 1mL溶解，作為供試品溶液。2對照液制備 取葛根素對照品加甲醇制成每1mL含 1mg的溶液，作為對照品溶液。3 薄層板硅膠G加0.5%羧甲基纖維素鈉為粘和劑的自制板，5X 20cm,厚度300卩m4 點樣 供試液510卩L,對照液5卩L,使成條狀 如果試樣中葛根素含量較低可增加點樣量。5 展開劑三氯甲烷一甲醇一水（28+7+1）展開方式上行12cm,取出，晾干顯色將展開后的薄層板置氨蒸氣中熏15min ,置紫外燈（365nm）下檢視8 色譜識別供試品色譜中在與對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的熒光條斑。1. 喜悅血燕美肌較囊2. 葛根素七. 蘆薈1供試液制備固體試樣或膠囊取本品粉末2g,加甲醇30mL至水浴上加熱至沸，振搖數(shù)分鐘，濾過,濾液作為供試品溶液.2對照液制