豬繁殖與呼吸綜合征疫苗研究概況.docx

1、動物醫(yī)學(xué)進展,2013,34(1):115-118ProgressinVeterinaryMedicine豬繁殖與呼吸綜合征疫苗研究概況劉彪，成利，高云航，馬紅霞(吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，吉林長春130118)摘要：豬繁殖與呼吸綜合征是一種引起母豬繁殖障礙和新生仔豬呼吸道癥狀的急性熱性接觸性傳染病。該病是成脅養(yǎng)豬業(yè)的主要傳染病之一，給養(yǎng)豬業(yè)帶來極大危害。目前對該病缺乏有效的治療手段，疫苗免疫接種是主要的防控措施。盡管市場上的滅活疫苗和弱毒活苗具有一定的保護作用，但都存在一定局限性?；蚬こ桃呙缇哂猩a(chǎn)工藝簡單，安全高效等優(yōu)點，但仍處于實驗室研究階段。論文對豬繁殖與呼吸蜂合征疫苗研究進展進

2、行綜述，以供參考。關(guān)鍵詞：豬繁殖與呼吸綜合征；豬繁殖與呼吸綜合征病毒；疫.苗中圖分類號:S852.659.6文獻標(biāo)識四：A文章編號：1007-5038(2013)01-0115-04收稿日期：2012-09-05基金項目：吉林省重大科技攻關(guān)項目(09ZDGG008);吉林省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項，吉林省教育廳女點項目(吉教科合字2009第58號)作者簡介：劉彪(1987)，界.吉林梨樹人，碩士研允生，主要從亨動物疫病防治研究.*通訊作者EffectofCalciumSignalTransductiononApoptosisXUHuan-cheng«ZHENGMing-xue,G

3、UShao-peng»BAIRui(.CollegeofAnimalScienceandTechnology,ShanxiAgriculturalUniversity,Taigu,Shanxi,China)Abstract:Calciumionisoneofthemostcommonsignaltransducfactorsintheprocessofthelifethatplayanimportantroleintheregulationofapoptosis.Itsuggeststhattheintracellularcalciumconcentrationincreaseddu

4、etotheindirectresultinthelatestepofapoptosisinthepreviousstudies»butrecentstudieshavefoundthatcalciumplaysanimportantroleintheprocessofapoptosisatalllevelsthroughthefineregulationinavarietyofways,andconstitutescomplexregulatorynetworkofcalciumduringapoptosis.Thispapersummarizedtheresearchinthec

5、alciumsignaltransductionofapoptosisintherecentyears,fromtheperspectiveoftherelationshipbetweencalciumandendoplasmicreticulum,mitochondria*BeI-2familyproteinsandapoptosistodiscussandanalysetheeffectofthecalciumsignaltransductiononapoptosis.Keywords:calciummion；mitochondria；endoplasmicreticulum；Bcl-2f

6、amilyproteins；apoptosis豬繁殖與呼吸綜合征(Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome,PRRS)自20世紀(jì)80年代后期在美國發(fā)現(xiàn)以來，已菱延至世界各大豬場，給世界養(yǎng)豬業(yè)造成巨大損失。該病病原為豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus,PRRSV),屬于尼多病毒目(Nidovirales)動脈炎病毒科(Arteriviridae')。根據(jù)PRRSV基因的變異程度將毒株分成歐洲型(1型)和北美型(2型)由于這兩種亞型病毒核昔酸序列同源性只有60%左右，

7、所以在豬體內(nèi)很難產(chǎn)生交叉保護。PRRSV的抗原變異較快，能逃避免疫系統(tǒng)的監(jiān)視,繼發(fā)感染并形成長時間的病毒血癥，這些均給PRRS的免疫預(yù)防帶來困難。PRRS還會造成機體的免疫抑制.同時存在抗體依賴性增強作用，在一定程度上限制了疫苗的研究目前對PRRS尚無有效的治療措施，因此對PRRS的預(yù)防就顯得尤為重要，市場上現(xiàn)在主要銷售的是滅活疫苗和弱毒活疫苗，基因工程疫苗在實驗室研究也取得長足的進展，要想投入生產(chǎn)還需大量臨床試驗，急需生產(chǎn)出安全高效的新型疫苗來預(yù)防PRRS的流行。1滅活疫苗國內(nèi)外已經(jīng)成功研究出具有良好免疫效果的PRRS滅活疫苗，在臨床實踐中得到應(yīng)用。Plana-DuranJ等用西班牙毒株研制

8、的滅活疫苗免疫母豬.結(jié)果表明母豬繁殖水平、流產(chǎn)率、死胎數(shù)、產(chǎn)仔數(shù)等指標(biāo)都有明顯改善。但滅活疫苗滅活工藝有待提高，常規(guī)甲醛滅活劑由于自身的缺陷使之很難適應(yīng)新型疫苗的發(fā)展，新型滅活劑的研究工作已經(jīng)逐步引起科研工作者的注意，例如60Coy射線、二乙烯亞胺和鹽酸聚六亞甲基版等我國目前生產(chǎn)的主要有CH-la株和NVDC-JXAI株的PRRS滅活疫苗,臨床實踐中具有一定的免疫保護效果。隨著PRRS疫苗的研究發(fā)展，科研人員發(fā)現(xiàn)疫苗生產(chǎn)中加入佐劑能更好的促進滅活苗免疫效果，例如氫氧化鋁膠、弗氏佐劑、油佐削、多糖等。邵珊等力將黃英多糖和白花蛇舌草多糖作為免疫增強劑聯(lián)合豬高致病性PRRS滅活疫苗免疫仔豬，結(jié)果顯示

9、黃芷多糖和白花蛇舌草多糖均能顯著提高仔豬的CD3+、CD4LCD8-T淋巴細胞的百分比和特異性抗體滴度。王星晨等利用分離的PRRSV安徽株制備的PRRS油乳劑滅活疫苗進行免疫對比試驗，攻毒試驗表明自家苗的免疫效果整體要優(yōu)于市場上銷侈的疫苗。通過改善滅活方法，加入合適的佐劑，生產(chǎn)自家苗等措施,能有效提高PRRSV滅活疫苗保護率。滅活疫苗具有安全有效、不存在散布病毒和造成PRRS新疫源的危險、便于運輸和貯存等優(yōu)點o盡管滅活疫苗對母豬有較好的免疫效果，但存在免疫劑量大、免疫次數(shù)多、免疫產(chǎn)生周期長、對異源株免疫保護效果差等缺點3。而且滅活過程可能造成滅活疫苗抗原表位的缺失或免疫抗原減弱.以致不能產(chǎn)生足

10、夠的保護水平。因此，通過滅活疫苗難以控制和根除PRRS在豬場的存在和流行，滅活疫苗目前主要應(yīng)用于PRRSV陰性豬場的免疫。2弱毒活疫苗PRRS弱毒疫苗是將PRRSV強毒株接種易感細胞后經(jīng)多次傳代培養(yǎng)，使其毒力減弱至不具有致病性但能刺激機體產(chǎn)生免疫反應(yīng)，從而對機體產(chǎn)生保護作用的一種常規(guī)疫苗。自從1995年勃林格公司首次推出商品化PRRS減毒疫苗以來，PRRS弱毒苗以其免疫保護期長、保護率高、免疫劑量小等優(yōu)點備受專家學(xué)者和養(yǎng)殖業(yè)主的青睞。近年來國外學(xué)者對PRRS弱毒疫苗免疫保護效果進行不斷改進，成效顯著。EllingsonaJS等對以當(dāng)?shù)亓餍械腗N184毒株為親本構(gòu)建的嵌合體疫苗和勃林格的Inge

11、lvac®PRRSMLV疫苗進行豬免疫對比試驗，通過臨床癥狀、剖檢變化、抗體含量、平均增重械等進行比較，結(jié)果表明rMN184嵌合體疫苗免疫效果優(yōu)于Ingelvac®PRRSMLV疫苗。國外最新研究還表明豬群接種PRRS弱毒疫苗可改善環(huán)境中PRRSV的含量,LinharesDL等將陽性豬群分為免疫組和對照組各自飼養(yǎng)在獨立密閉的豬舍，利用PRRS弱毒疫苗免疫試驗豬，結(jié)果表明免疫豬群血清和豬舍空氣中病毒含量明顯低于對照組。我國在弱毒疫苗研究方面也取得了突破性進展，冷雪等M將高致病性PRRSV致弱株TJM與耐熱凍干保護劑混合制備弱毒活疫苗免疫豬，攻毒試驗結(jié)果顯示4周齡5周齡仔豬接種

12、該疫苗后對強毒攻擊的保護率達80%以上。DwivediV等板應(yīng)用結(jié)核分枝桿菌全細胞裂解液為佐劑聯(lián)合PRRS弱毒疫苗滴鼻免疫豬，結(jié)果表明接種佐劑疫苗組的特異性中和抗體水平高于單獨接種疫苗組的。盡管弱毒疫苗有以上優(yōu)點，但也存在一定缺點，疫苗易被污染，需冷凍真空干燥和低溫保存，不便運輸，產(chǎn)生抗體水平高低不齊，疫苗毒株易變異，可能持續(xù)散播疫苗病毒,使得病毒在豬場中循環(huán)返祖，甚至引發(fā)PRRSV的傳播。因此，許多國家建議在非疫區(qū)不得使用弱毒疫苗,只能在PRRSV陽性豬群中使用。3基因工程疫苗基因工程疫苗的優(yōu)點是安全可靠、可人為地進行修飾、針對性強并且訶同時誘導(dǎo)體液免疫和細胞免疫等并°目前，學(xué)者們

13、主要是圍繞PRRSV具有良好免疫原性的（）RF5（E蛋白）、（）RF6（M蛋白）、ORF7（N蛋白）基因進行研究。PRRS基因工程疫苗主要有DNA疫苗、亞單位疫苗和活載體疫苗。3.1DNA疫苗DNA疫苗不僅具有生產(chǎn)工藝簡單、免疫劑量小、安全性相對較高等優(yōu)點而且還對不同血清型毒株具有交叉保護作用，因此是PRRS疫苗重要的研究方向。溫建新等們篩選出對豬具有較強免疫剌激活性的CpG-ODN,將成功構(gòu)建的CpG-PVAX1-ORF5真核重組質(zhì)粒免疫仔豬，試驗結(jié)果表明免疫豬抗體長時間保持較高水平。近年來研究人員將保護性基因進行融合表達獲得新的成就，ChiaMY等將ORF5-ORF6全基因和ORF5Lin

14、kerORF6分別連接pcDNA3.1真核表達載體進行免疫攻毒試驗，結(jié)果顯示pcDNA-（）RF5LinkerORF6質(zhì)粒產(chǎn)生的免疫效果更顯著，因此多個保護性抗原基因的融合表達有望成為我們的一個研究方向。由于DNA疫苗本質(zhì)就是含有外源抗原基因的真核表達質(zhì)粒，可能存在免疫效果的不確定性、個體差異性以及受到母源抗體的影響，而且外源基因刺激機體不斷產(chǎn)生抗體，引起機體產(chǎn)生免疫耐受、免疫抑制等現(xiàn)象。DNA疫苗的研究面臨著諸多挑戰(zhàn)，還需進一步研究和詮釋。3.2亞單位疫苗廣義的亞單位疫苗是利用微生物的某種表面結(jié)構(gòu)成分(抗原)制成不含有核酸、能誘發(fā)機體產(chǎn)生抗體的疫苗。新型亞單位疫苗主要是將病原體保護性抗原基因

15、導(dǎo)人體外表達系統(tǒng)高效表達后提取的保護性抗原蛋白。該疫苗便于規(guī)?；a(chǎn)，安全性高，副反應(yīng)減少等優(yōu)點。PrietoC等物用大腸埃希菌為宿主的PRRSVGP5亞單位疫苗進行免疫攻毒試驗，結(jié)果表明免疫組豬群臨床癥狀明顯減輕、中和抗體含址有所提高。但是大腸埃希菌中的目的基因表達后易形成包涵體，目的蛋白得不到修飾加工，限制了大腸埃希菌表達系統(tǒng)的發(fā)展。目前桿狀病毒表達系統(tǒng)和酵母真核表達系統(tǒng)應(yīng)用于PRRSV亞單位疫苗研究的主要表達系統(tǒng)。錢洪喜回將構(gòu)建的pPIC9k-ORF7重組質(zhì)粒電轉(zhuǎn)入酵母細胞GS115中進行堂白表達，SDSPAGE結(jié)果顯示表達產(chǎn)物大小約為15ku,Dotblot結(jié)果表明N蛋白能與陽性血清發(fā)

16、生反應(yīng)，具有良好的反應(yīng)原性。最近研究人員將目的基因轉(zhuǎn)入植物中制備出有效的新型亞單位疫苗。HuZJ等S研制的含有PRRSVM蛋白的轉(zhuǎn)基因玉米口服小鼠，試驗結(jié)果表明小鼠產(chǎn)生較高水平的中和抗體和細胞因子。以上研究表明業(yè)單位疫苗具有很好的免疫效果和很大的發(fā)展前景，值得進一步研發(fā)。3.3活載體疫苗'將病原微生物的免疫相關(guān)基因整合到活載體病毒或細菌基因蛆中，然后將其接種到動物體內(nèi)，外源基因在動物體內(nèi)表達，刺激機體產(chǎn)生針對外源基因編碼產(chǎn)物的特異性免疫應(yīng)答，即活載體疫苗基于這種構(gòu)想，對于PRRS活載體疫苗的研究也變得非?；钴S。目前使用較多的活載體有豬傳染性胃腸炎病毒、痘病毒、沙門菌等。CruzJLG等

17、用豬傳染性胃腸炎病毒為載體表達野生型PRRSV的GP5和M蛋白，結(jié)果表明接種疫苗的動物比未接種動物產(chǎn)生更快、更強的體液免疫反應(yīng)和細胞免疫反應(yīng)。ShenGS等構(gòu)建了能表達PRRSV0RF5-ORF3和IL-18-ORF5-ORF3重組雞痘病毒活載體疫苗，對豬初免后21d加強免疫，初免后60d進行攻毒試驗，結(jié)果表明重組病毒能有效刺激豬外周血中T淋巴細胞的增殖和干擾素的產(chǎn)生，通過ELISA檢測和病毒中和試驗都可以檢測到針對PRRSV的特異性抗體。HanYW等他研制出能表達PRRSVORF7的重組減毒沙門菌活載體疫苗對豬進行免疫試驗，利用蛋白印跡、酶聯(lián)免疫吸附試驗等方法檢測抗體，結(jié)果表明試驗豬口服OR

18、F7沙門菌活載體疫苗后產(chǎn)生了ORF7特異性IgG抗體和黏膜IgA抗體；同時減毒沙門菌活載體還可以產(chǎn)生自身的免疫原性?；钶d體疫苗在免疫效果方面可以同時啟動機體細胞免疫和體液免疫，更具吸引力的是可以同肘構(gòu)建多價以至多聯(lián)疫苗，達到一苗防多病的效果。4展望PRRS疫苗已成為當(dāng)下研究的熱門領(lǐng)域。新興的基因工程疫苗在實驗室研究中取得飛躍性的進展，為臨床應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。但研制安全高效的PRRS疫苗仍存在很多問題，如病毒的易變異性，保護性抗原的不確定性，活載體的不穩(wěn)定性，免疫效果的評價指標(biāo)不健全等1,未來PRRS疫苗的發(fā)展仍然艱辛。希望通過研究人員的不懈努力，在不久的將來能夠用高效的疫苗控制PRRS的流行。參

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