細(xì)胞培養(yǎng)的注意事項(xiàng)

1、相關(guān)疾?。好刻鞂?duì)待細(xì)胞比孝敬爹媽還認(rèn)真，那真是捧在手里怕碎了，含在嘴里怕化了，看在眼里怕丟了 ，培育細(xì)胞時(shí)有哪些慘痛閱歷教訓(xùn)可以共享呢?早走早脫身，從今專注黑生物1. 嚴(yán)格無菌操作，多噴噴酒精，要是對(duì)滅菌的東西不放心，自己包自己送自己烘干。2. 不要和別人共用試劑耗材，自己預(yù)備一套。3. 有可能的話在拿到新細(xì)胞的時(shí)候做好支原體衣原體檢測(cè)。4. 水浴鍋很臟，生化培育箱要是得手動(dòng)加濕的話盤里的水也會(huì)很臟，勤換 (滅菌水加進(jìn)去)。5. 晚上離開的時(shí)候最好給細(xì)胞房照紫外，超凈臺(tái)是用完就開。6. 最好的是同一時(shí)間就你一個(gè)人在用細(xì)胞房在養(yǎng)細(xì)胞。非科班出身閱歷共享1. 別怕鋪張。槍頭什么的只要有可能污染就換

2、，假如用酒精燈就什么都略微烤一下，別直接放到火上，離一段距離。2. 動(dòng)作要既輕柔又有力。動(dòng)作太重會(huì)有一堆一堆的氣泡，動(dòng)作太輕就吹不下來. 剛開頭的時(shí)候吹細(xì)胞太苦痛了，略微一下就起泡。后來就是吹的時(shí)候槍里的培育基不要一次全都?jí)撼鰜?，留一點(diǎn)，槍的最頭部盡量深的在液面以下。3. 離開過操作臺(tái)的東西再進(jìn)操作臺(tái)之前肯定要用酒精噴一遍，包括一切試驗(yàn)耗材、儀器、以及你帶著手套的手。4. 試驗(yàn)結(jié)束后對(duì)試驗(yàn)臺(tái)的消毒。紫外什么的，用前用后都照個(gè) 30 分鐘。5. 身體的各個(gè)部分盡量的少接觸不需要接觸的地方的地方。比照試驗(yàn)臺(tái)，又比如培育箱內(nèi)部。6. 細(xì)胞的密度依據(jù)細(xì)胞的性質(zhì)、傳代的時(shí)間以及自己的心情來定。培育基的話

3、最多最多不要超過 2 天就要換一次。細(xì)胞可以不傳代，但是培育基是肯定要換的?；蛟S就是，不該碰的地方不碰，有影響的地方少碰; 該用勁的時(shí)候確定不模糊，不該用勁的地方肯定忍住。假如是比較簡(jiǎn)陋的操作臺(tái)就肯定要擺個(gè)酒精燈，全部操作緊密圍繞在酒精燈四周進(jìn)行。假如是高級(jí)臺(tái)子就多用酒精噴噴。感覺生物的試驗(yàn)，心疼錢就還是不要做了。最終一點(diǎn)點(diǎn)確定非科班的閱歷。癌細(xì)胞真是堅(jiān)挺。有一次實(shí)在是不想傳了，放了 5 天吧，感覺都長(zhǎng)了幾層出來，培育基都黃了。抱著試一試的心情傳了一次，又堅(jiān)強(qiáng)的活過來了。當(dāng)然，狀態(tài)確定也差的很了。換種心情，好好生活!養(yǎng)了三年細(xì)胞，各種腫瘤細(xì)胞，說一點(diǎn)自己的看法：1. 培育細(xì)胞前，可以看看細(xì)胞特

4、點(diǎn)說明書，包括細(xì)胞正常生長(zhǎng)的狀態(tài)圖、傳代、培育基的類型等。2. 不同細(xì)胞生長(zhǎng)周期不同，有的生長(zhǎng)很快，比如說 MDA-MB-231，傳代的時(shí)候取離心懸液的格外之一就已經(jīng)足夠了，有的又是特殊慢，等的人心焦，BT474 就是，傳代是一分二，復(fù)蘇起始的時(shí)候兩周多才能長(zhǎng)滿，所以就要在培育細(xì)胞的過程中多多摸索了。3. 對(duì)于嬌弱的細(xì)胞，就得細(xì)心呵護(hù)了，胰酶消化不能過久，吹得時(shí)候要輕柔，離心時(shí)候也要留意轉(zhuǎn)速和時(shí)間，每天都要去看一下細(xì)胞，肉眼觀看培育基狀況、顯微鏡下觀看細(xì)胞生長(zhǎng)狀況。4. 凍存細(xì)胞復(fù)蘇后其次天最好更換一次培育基。5. 培育箱隔一段時(shí)間徹底用酒精棉擦洗一次。6. 養(yǎng)細(xì)胞最大的教訓(xùn)：不能偷懶!細(xì)胞虐

5、我千百遍，我待細(xì)胞如初戀。1. 不管買的細(xì)胞、惠贈(zèng)的細(xì)胞，剛拿到手抓緊做兩件事：檢測(cè)是否有支原體污染; 快速擴(kuò)增凍存。2. 發(fā)覺有污染快速處理掉，特殊是當(dāng)你養(yǎng)了很多種細(xì)胞時(shí); 細(xì)菌污染，真菌污染很簡(jiǎn)潔發(fā)覺，支原體污染的話，細(xì)胞會(huì)長(zhǎng)的慢，買個(gè)支原體檢測(cè)的 kit 定期檢測(cè)一下。3. 細(xì)胞房日常的值日清潔是必需的，此外還要定期熏蒸。4. 細(xì)胞的傳代肯定要規(guī)律，保持相同的 confluency 和傳代時(shí)間間隔，不要隨心所欲或者拖延。5. 留意個(gè)人衛(wèi)生?？?jī)?nèi)心感動(dòng)細(xì)胞1. 自己的細(xì)胞自己養(yǎng)，血的教訓(xùn)。2. 在生物平安柜 (或者超凈臺(tái))，槍頭，血清管，血清，培育基，瓶子都足夠好，并且細(xì)胞房有良好的衛(wèi)生措

6、施 (比如隔離服，手套，口罩，清潔，HEPA 等等) 且不違法操作原則的狀況下，你其實(shí)很難污染。3. 上述條件不完備的狀況下，就要多留意無菌操作了：比如要用的東西提前拿到臺(tái)子里照啊 (不過這個(gè)其實(shí)也不大好，由于會(huì)攔住紫外線)，使用前 SDS+酒精擦臺(tái)子，進(jìn)出超凈臺(tái)肯定要酒精擦手。4. 少對(duì)細(xì)胞說話，多靠?jī)?nèi)心來感動(dòng)它們 (是的! 心不誠是不行以的!) 至少 1 天看 1 次。養(yǎng)細(xì)胞很簡(jiǎn)潔養(yǎng)細(xì)胞真的不難，最關(guān)鍵幾點(diǎn)：1. 全部的東西使用最好的，假如你用的血清、培育皿、培育基、胰酶什么的都是進(jìn)口的，真的很難信任你會(huì)把細(xì)胞養(yǎng)壞。2. 動(dòng)作要快，胰酶消化，換液什么，細(xì)胞暴露在空氣中的時(shí)間越少越好。另外，

7、要把握好胰酶消化時(shí)間，所謂的細(xì)胞狀態(tài)差，很多時(shí)候是傳代的緣由。3. 有時(shí)間的話，需要細(xì)胞計(jì)數(shù)，傳相應(yīng)數(shù)目的細(xì)胞到培育皿中，可以大致清楚細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線，不會(huì)臨時(shí)要處理，手足無措。4. 要做什么心里要格外清楚，合理支配時(shí)間，細(xì)胞房的試驗(yàn)穿插進(jìn)行，可以節(jié)省很多時(shí)間，也不會(huì)耽擱別人的試驗(yàn)。5. 個(gè)人的試驗(yàn)器具自己收一套，不要和別人混用，最近換了什么新的東西略微記一下，試劑一旦懷疑污染，馬上丟。6. 細(xì)胞房不能進(jìn)去太多人，避開相互干擾。細(xì)胞養(yǎng)不好，自掛東南枝現(xiàn)在一大型藥企養(yǎng)細(xì)胞做檢測(cè)，工作量很大，很多地方都沒方法格外認(rèn)真的做。但是兩年下來只消滅過一次污染，總結(jié)一下心得：1. 好的潔凈室，空調(diào)系統(tǒng)跟得上。

8、2. 好的生物平安柜，硬件跟的上。3. 瓶子移液器吸頭大都是進(jìn)口，耗材跟的上。除了這些就是自己的操作習(xí)慣了。4. 任何東西不要從放開的瓶口上面經(jīng)過。5. 雖然酒精燈會(huì)干擾平安柜氣流但是還是需要一盞用來勤燒瓶口。6. 試驗(yàn)時(shí)所用材料的位置擺放要順手，污染源和已滅菌物品要分開放置。養(yǎng)細(xì)胞就像打仗細(xì)胞飼養(yǎng)涵蓋的內(nèi)容太廣了，而且不同種類細(xì)胞的飼養(yǎng)難度以及技術(shù)要求不同，腫瘤細(xì)胞，成纖維細(xì)胞，上皮細(xì)胞. 甚至各類干細(xì)胞. 每一種都有自己的生長(zhǎng)要求。假如只是單純的一般性操作，大同小異，個(gè)人覺得練好技術(shù)的狀況下留意幾點(diǎn)就好:1. 各種無菌，從培育基到操作過程再到培育箱，時(shí)刻留意無菌。本人曾經(jīng)所在的試驗(yàn)室消滅過

9、大規(guī)模污染并最終導(dǎo)致全部細(xì)胞集體毀滅. 教訓(xùn)慘痛。2. 培育基的配制肯定要做好梯度摸索并具體記錄，否則細(xì)胞死都不知道怎么死的。3. 盡量提高操作嫻熟度，削減培育皿在培育箱外的滯留時(shí)間，細(xì)胞很脆弱，經(jīng)不起折騰，不像人，熱了有空調(diào)，冷了能烤火。4. 把握好培育基更換的時(shí)間，不同細(xì)胞類型時(shí)間不同，早了鋪張?jiān)噭砹丝赡苋姼矝]。5. 閱歷很重要，養(yǎng)細(xì)胞的很多閱歷你是無法在公開的書籍和資料上找到的。多向試驗(yàn)室前輩學(xué)習(xí)，他們會(huì)讓你少走很多彎路，真的。養(yǎng)細(xì)胞就像打仗，知彼知己，百戰(zhàn)不殆。只有了解你養(yǎng)的對(duì)象，才能把他養(yǎng)好。細(xì)胞就是矯情養(yǎng)細(xì)胞細(xì)胞這個(gè)東西呢有的時(shí)候真說不清。養(yǎng)過一段時(shí)間的巨噬細(xì)胞，一開頭操作各種謹(jǐn)慎當(dāng)心，隨時(shí)