微小劑量阿司匹林對(duì)正常小鼠及高尿酸血癥模型小鼠血尿酸的影響

1、微小劑量阿司匹林對(duì)正常小鼠及高尿酸血癥模型小鼠血尿酸的影響張海英1 卓來(lái)東2 李玉珍1 （1.北京大學(xué)人民醫(yī)院藥劑科，北京 100044 2.北京大學(xué)藥學(xué)院，北京 100083）摘要：目的 考察微小劑量阿司匹林對(duì)正常小鼠和高尿酸血癥模型小鼠血尿酸、肌酐、尿素氮的影響。方法 120只小鼠，隨機(jī)分為8組，分別為正常對(duì)照組、高尿酸血癥模型對(duì)照組、正常給藥組（3組）和高尿酸血癥模型給藥組（3組）。2組對(duì)照組分別給予0.5羧甲基纖維素鈉溶液，給藥組按照12.5mg/kg、25mg/kg、50mg/kg的給藥劑量分別給予阿司匹林溶液，每天1次，持續(xù)一周。一周后，正常阿司匹林給藥組在灌胃結(jié)束1小時(shí)后取血，正

2、常對(duì)照組立即腹腔注射0.5CMC-Na，高尿酸對(duì)照組和阿司匹林實(shí)驗(yàn)組則腹腔注射尿酸溶液，并于注射后1小時(shí)取血樣測(cè)定尿酸、肌酐和尿素氮。結(jié)果 微小劑量阿司匹林對(duì)正常和高尿酸血癥模型小鼠的肌酐、尿素氮影響不明顯，但可顯著升高血尿酸水平，在給藥劑量為12.5mg/kg時(shí)，升高比率最大。隨給藥劑量增加，血尿酸水平逐漸回落至基線，與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異。結(jié)論 微小劑量阿司匹林可導(dǎo)正常小鼠和致高尿酸血癥模型小鼠血尿酸水平升高，且隨給藥劑量增加，這種影響減小?；颊咛貏e是痛風(fēng)和高尿酸血癥患者在應(yīng)用微小劑量阿司匹林時(shí)應(yīng)注意監(jiān)測(cè)血尿酸濃度。關(guān)鍵詞：阿司匹林；高尿酸血癥模型；血尿酸；肌酐；尿素氮The effec

3、t of mini-dose aspirin on uric acid in normal mice and hyperuricemia model miceZHANG Hai-ying, LI Yu-zhen (Department of Pharmacy, Peoples Hospital, Peking University, Beijing 100044, China)ZHUO Lai-dong (School of Pharmaceutical Sciences, Peking University, Beijing 10083, China)ABSTRACT: OBJECTIVE

4、The aim of study was to evaluate the effects of mini-dosages of aspirin on blood uric acid, creatinine and urea nitrogen in normal mice hyperuricemia model mice. METHODS 120 mice were randomized into 8 groups, consists of normal controlled group, hyperuricemia controlled group, normal experimental g

5、roup (3 groups) and hyperuricemia experimental group (3 groups) . normal and hyperuricemia controlled groups were administrated 0.5% CMC-Na, normal and hyperuricmia experimental groups were administered aspirin as follow: 12.5mg/kg/d, 25mg/kg/d, 50mg/kg/d. The dosage of CMC-Na and aspirin keep a wee

6、k. Then normal experimental groups blood was collected 1 hour later after the last administration for determination uric acid, creatinine and urea nitrogen. And normal controlled group received an intraperitoneal injection of 0.5%CMC-Na immediately after the last administration, at the same time hyp

7、eruricemia control group and three experimental groups treated with intraperitoneal injection of uric solution. One hour later, the blood was collected for determination uric acid, creatinine and urea nitrogen. RESULT Mini-dosage has no apparent effect on creatinine and urea nitrogen, but can increa

8、se remarkably the level of blood uric acid. At the lowest dosage of 12.5mg/kg/d, the level of blood uric acid raised to the peak. The effect on blood uric acid were gradually reduced to baseline with increasing dosage of aspirin, and the T test showed no statistically significant difference between

9、aspirin group and controlled group. CONCLUSION Mini-dose aspirin can cause significant increase in blood uric acid level in hyperuricemia model mice, and this effect were decreased with increasing dosage of aspirin. Patients, especially patient with gout and hyperuricemia need to monitor the level o

10、f blood uric acid reugular.KEY WORDs: Aspirin； hyperuricemia model； blood uric acid； creatinine； urea nitrogen阿司匹林在臨床上廣泛應(yīng)用，比如在美國(guó)，據(jù)估計(jì)阿司匹林每年的消耗總量高達(dá)12萬(wàn)噸，由于阿司匹林是一種不需要醫(yī)生處方就能購(gòu)買的藥物，因此許多健康人群也在購(gòu)買和使用阿司匹林【1】。阿司匹林對(duì)尿酸代謝具有雙重作用，Yu等人在1959年和1963年進(jìn)行的經(jīng)典研究表明，阿司匹林在大劑量時(shí)（3g/d）具有促進(jìn)尿酸排泄的作用，而小劑量（12g/d）則引起尿酸潴留【2】【3】。阿司匹林發(fā)揮抗血小

11、板作用的劑量一般為75325mg/d，這一劑量我們稱之為微小劑量（0.5mg/d）。目前臨床上主要應(yīng)用的就是微小劑量阿司匹林，比如用于房顫患者的腦梗死事件、頸動(dòng)脈狹窄患者腦梗死事件等的一級(jí)或二級(jí)預(yù)防。而有關(guān)微小劑量阿司匹林是否會(huì)對(duì)尿酸代謝產(chǎn)生這種雙重影響的文獻(xiàn)報(bào)道較少。Capsi等人【1】前瞻性研究了微小劑量阿司匹林對(duì)老年人尿酸代謝的影響，結(jié)果顯示，75mg/d的給藥劑量可使血尿酸水平明顯升高，而隨給藥劑量增加到150mg/d和325mg/d時(shí)，血尿酸濃度則逐漸下降，接近基線水平。我國(guó)現(xiàn)處于老齡化社會(huì)，老年人經(jīng)常同時(shí)患有多種疾病，比如痛風(fēng)患者同時(shí)患有腔梗，或是房顫患者同時(shí)又有高尿酸血癥。這些患

12、者需要長(zhǎng)期服用微小劑量的阿司匹林，此時(shí)阿司匹林對(duì)血尿酸的影響不得而知。本研究的目的是通過(guò)動(dòng)物試驗(yàn)明確微小劑量阿司匹林對(duì)正常小鼠及高尿酸血癥模型小鼠血尿酸代謝的影響，以期為臨床患者特別是高尿酸血癥患者、痛風(fēng)患者等選擇藥物提供一定的理論依據(jù)。1 實(shí)驗(yàn)材料1.1藥品及試劑拜阿司匹林（100mg/片，批號(hào)：BTA5NH1，拜爾公司），尿酸（純度99%，British Alfa Aesar，批號(hào)：A13346)，EDTA-Na2（分析純，北京沃德賽斯生物技術(shù)公司），羧甲基纖維素鈉（分析純，中國(guó)醫(yī)藥上?；瘜W(xué)試劑站）。1.2動(dòng)物昆明種小鼠，雄性，體重18-22g，動(dòng)物合格證號(hào)為SCXK（京）2006-000

13、8（北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部）。1.3儀器T-00型電子天平（上海安亭科學(xué)儀器廠）， 80-2B型臺(tái)式離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠），超聲波清洗機(jī)（北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部?jī)x器廠），7170A全自動(dòng)生化分析儀（HITACHI）。2 實(shí)驗(yàn)方法2.1 實(shí)驗(yàn)用溶液的配置定量稱取拜阿司匹林，于研缽中研成粉末，使其充分混懸于0.5的羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）溶液中，配成濃度為5mg/mL的溶液，并將其稀釋成2.5mg/mL和1.25 mg/mL的溶液,備用。定量稱取尿酸，于研缽中充分研勻，使其充分混懸于0.5CMC-Na溶液中，配成濃度為10mg/mL的溶液，備用。2.2 高尿酸血癥模型的建立小鼠高尿酸血癥模型

14、的建立參照陳光亮等人的實(shí)驗(yàn)研究【4】，即高尿酸血癥模型組小鼠腹腔注射尿酸的CMC-Na的混懸溶液，尿酸的給藥劑量為250mg/kg。腹腔注射尿酸后，小鼠的血尿酸水平升高，高尿酸血癥維持4h以上。 2.3 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)120只昆明小鼠（18-22g，雄性）于室溫、明暗循環(huán)條件下飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為8組，每組15只小鼠，依次為正常對(duì)照組、正常阿司匹林實(shí)驗(yàn)組(包括三組)、高尿酸血癥模型對(duì)照組和高尿酸血癥模型阿司匹林實(shí)驗(yàn)組（包括三組）。兩組對(duì)照組給予0.5的羧甲基纖維素鈉溶液，兩組實(shí)驗(yàn)組按照12.5mg/kg、25mg/kg、50mg/kg分別給予阿司匹林溶液。具體操作為，0.5 CMC-Na、不同濃度的

15、阿司匹林溶液于每日清晨分別給8組小鼠灌胃。每只小鼠的給藥量為0.01ml/g(按體重計(jì)算)，即每只小鼠的平均給藥量為0.2±0.02ml，灌胃持續(xù)7天。第7天最后一次灌胃結(jié)束后，正常阿司匹林試驗(yàn)組1小時(shí)后摘眼球取血。正常對(duì)照組在第7天灌胃結(jié)束后立即腹腔注射0.5%CMC-Na，高尿酸血癥模型對(duì)照組和高尿酸血癥模型阿司匹林實(shí)驗(yàn)組則立即腹腔注射尿酸溶液，給藥劑量為250mg/kg，致小鼠高尿酸血癥模型。正常對(duì)照組、高尿酸血癥模型組和高尿酸血癥阿司匹林組在腹腔注射后1小時(shí)摘眼球取血。血樣存放于含有EDTA-Na2的離心管中，3000r/min離心10min，取血漿于冰箱中冷凍保存。2.4

16、血樣測(cè)定將血樣在室溫下解凍并放置室溫，充分振蕩均勻后到入樣品杯，樣品杯放入測(cè)試盤，按照設(shè)定程序在全自動(dòng)生化分析儀中測(cè)定尿酸、肌酐和尿素氮濃度。2.5 數(shù)據(jù)處理 采用EXCEL 2003進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。3 結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，高尿酸血癥模型對(duì)照組與正常對(duì)照組相比，血尿酸數(shù)值有顯著性變化，P值小于0.0001，證實(shí)高尿酸血癥模型組建立成功。高尿酸血癥模型對(duì)照組與正常對(duì)照組相比，血肌酐和尿素氮的數(shù)值沒(méi)有顯著性變化。正常阿司匹林給藥組和高尿酸血癥模型阿司匹林給藥組與正常對(duì)照組和高尿酸血癥模型對(duì)照組相比，血尿酸數(shù)值均升高，并且正常給藥組和高尿酸血癥模型給藥組均在阿司匹林給藥量為12.5mg/kg時(shí)，血尿酸數(shù)

17、值升高至高點(diǎn)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。然后隨著給藥劑量的增加，血尿酸數(shù)值下降回落至基線附近，分別與正常對(duì)照組和高尿酸血癥模型對(duì)照組相比不具有顯著性差異，具體結(jié)果見表1、圖1。正常給藥組和高尿酸血癥模型給藥組分別與正常對(duì)照組和高尿酸血癥模型對(duì)照組相比，血肌酐和血尿素氮的數(shù)值變化不明顯。但高尿酸血癥模型給藥組的血肌肝和尿素氮數(shù)值有升高的趨勢(shì)，并且在給藥量為50mg/kg時(shí)，尿素氮數(shù)值與高尿酸對(duì)照組相比有顯著性差異，P值為0.0008。具體結(jié)果見表1和圖2、圖3。表1 微小劑量阿司匹林對(duì)正常小鼠和高尿酸血癥模型小鼠血尿酸、血肌酐和血尿素氮的影響（±SD，n=15）Tab1 The effect o

18、f mini-dose aspirin on blood uric acid, creatinine and urea nitrogen in normal mice and hyperuricemia model mice（±SD，n=15）阿司匹林給藥劑量（mg/kg）血尿酸(mol/L)升高率P血肌酐(mol/L)升高率P血尿素氮(mmol/L)升高率P正常對(duì)照12.5（N）25(N)50(N)高尿酸對(duì)照12.5(H)25(H)50(H)53±764±963±1358±1578±17110±2389±2381

19、±2521%19%9%32411430.010.020.300.00010.00010.130.7143±446±545±544±544±442±443±547±67%5%2%2%-4%-2%6%0.100.400.770.660.180.890.088.20±1.108.40±1.298.65±1.508.20±0.868.73±1.569.06±1.078.39±1.7010.95±1.612%5%0%12%3%-3%25

20、%0.460.220.710.040.520.580.0008注：1）N代表正常阿司匹林給藥組，H代表高尿酸血癥模型阿司匹林給藥組。2）高尿酸對(duì)照組的P值是與正常對(duì)照組進(jìn)行t檢驗(yàn)的結(jié)果。3）正常給藥組的P值是不同的正常給藥組分別與正常對(duì)照組進(jìn)行t檢驗(yàn)的結(jié)果。4）高尿酸給藥組的P值是不同的高尿酸給藥組分別與高尿酸對(duì)照組進(jìn)行t檢驗(yàn)的結(jié)果。5）高尿酸對(duì)照組的升高率以正常對(duì)照組為基礎(chǔ)。6）正常給藥組和高尿酸給藥組的升高率分別是以正常對(duì)照組和高尿酸對(duì)照組為基礎(chǔ)。4 討論作為一種經(jīng)典的抗血小板藥物，阿司匹林在預(yù)防心腦血管事件中得到了廣泛應(yīng)用。并且一項(xiàng)關(guān)于多種心血管藥物成本效益的對(duì)照研究結(jié)果表明，使用阿司匹

21、林治療，避免一例心腦血管事件的綜合費(fèi)用遠(yuǎn)低于使用降壓藥、氯吡格雷或新伐他汀等藥物。所以阿司匹林這一藥物被多家指南收載，比如美國(guó)心臟學(xué)會(huì)/美國(guó)卒中學(xué)會(huì)（AHA/ASH）在2006年發(fā)布的心腦血管疾病一級(jí)預(yù)防指南指出：心腦血管事件中、高危患者（10年心腦血管事件危險(xiǎn)610%）,應(yīng)長(zhǎng)期服用阿司匹林（75160mg/d）預(yù)防心腦血管事件（I，A）。美國(guó)心臟學(xué)會(huì)/美國(guó)心臟病學(xué)會(huì)（AHA/ACC）在2006年動(dòng)脈粥樣硬化二級(jí)預(yù)防指南指出：動(dòng)脈粥樣硬化疾病患者如無(wú)禁忌癥，均應(yīng)無(wú)限期服用阿司匹林75mg162mg/d(I，A)【5】。盡管大劑量（3g/d）和小劑量（12g/d）阿司匹林對(duì)血尿酸的影響以及腎功能

22、的影響已經(jīng)有文獻(xiàn)證實(shí)【2】【3】，但是關(guān)于微小劑量的阿司匹林對(duì)血尿酸和腎功能的影響少有報(bào)道。如前所述，阿司匹林目前的常用劑量為75325mg/d，并且有相當(dāng)多的人使用,其中包括痛風(fēng)患者和高尿酸血癥患者。微小劑量阿司匹林會(huì)對(duì)這些患者血尿酸數(shù)值產(chǎn)生何種影響值得探討，我們的實(shí)驗(yàn)?zāi)康木褪侵荚跒檎Ｈ巳?、痛風(fēng)患者和高尿酸血癥患者合理應(yīng)用阿司匹林提供理論依據(jù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，微小劑量阿司匹林對(duì)正常小鼠和高尿酸血癥模型小鼠的血肌酐和血尿素氮數(shù)值影響不明顯，無(wú)顯著性差異。高尿酸血癥模型給藥組隨阿司匹林給藥劑量的增加，血肌肝和尿素氮數(shù)值有所升高，且在最高給藥劑量50mg/kg時(shí)，血尿素氮數(shù)值的升高與高尿酸血癥模型

23、對(duì)照組相比有顯著性差異。有文獻(xiàn)報(bào)道，小劑量阿司匹林（5075mg/d）長(zhǎng)期服用可導(dǎo)致腎損害，腎損害出現(xiàn)的時(shí)間與用藥劑量和用藥持續(xù)時(shí)間具有正相關(guān)【6】。本實(shí)驗(yàn)中微小劑量的阿司匹林對(duì)正常及高尿酸血癥模型小鼠腎功能的影響不顯著，可能與用藥持續(xù)時(shí)間比較短有關(guān)。但高尿酸血癥模型組小鼠在阿司匹林高給藥劑量時(shí)（50mg/kg）出現(xiàn)尿素氮和肌酐數(shù)值升高，且尿素氮數(shù)值的升高具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因此提示我們?cè)陂L(zhǎng)期使用微小劑量阿司匹林時(shí)，應(yīng)定期監(jiān)測(cè)腎功能，以避免出現(xiàn)腎損害。由于本實(shí)驗(yàn)高尿酸血癥模型是通過(guò)腹腔注射尿酸引起的高尿酸血癥，致模時(shí)間比較短，阿司匹林導(dǎo)致的高尿酸血癥模型小鼠血尿酸的升高，可能是阿司匹林抑制尿酸排泄

24、的結(jié)果。阿司匹林這種抑制尿酸排泄的作用隨給藥量的增加，應(yīng)該是逐漸減弱的，因?yàn)?5mg/kg和50mg/kg兩個(gè)給藥劑量，對(duì)于高尿酸血癥模型小鼠的尿酸影響不明顯。本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了微小劑量阿司匹林能顯著升高正常和高尿酸血癥模型小鼠的血尿酸水平，但隨劑量增加，這種影響逐漸減少，并且不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。說(shuō)明微小劑量阿司匹林對(duì)正常和高尿酸血癥模型小鼠血尿酸的影響具有雙重作用，在給藥劑量為12.5mg/kg時(shí)，能升高血尿酸水平，隨給藥劑量增加，這種影響減少，基本不對(duì)血尿酸數(shù)值產(chǎn)生顯著性影響。提示患者，特別是痛風(fēng)或高尿酸血癥病人在需要長(zhǎng)期使用微小劑量阿司匹林時(shí)，應(yīng)注意定期監(jiān)測(cè)血尿酸水平，尤其在剛開始應(yīng)用阿司匹林時(shí)，應(yīng)增加監(jiān)測(cè)血尿酸的頻率，根據(jù)血尿酸數(shù)值，調(diào)整相應(yīng)的降尿酸藥物。參考文獻(xiàn)1. CASPI D, LUBART E, GRAFF B, et al. The effect of mini-dose aspirin on renal function and uric acid handling in elderly patients. Arthritis Rh