狂犬病疫苗（課堂PPT）

1、2 人用狂犬病疫苗（人用狂犬病疫苗（Vero 細(xì)胞）細(xì)胞） RabiesmVaccine (Vero Cell) for Human Use 凍干人用狂犬病疫苗（凍干人用狂犬病疫苗（Vero 細(xì)胞）細(xì)胞）Rabies Vaccine (Vero Cell) for Human Use ,Freeze-dried人用狂犬病疫苗（地鼠腎細(xì)胞）人用狂犬病疫苗（地鼠腎細(xì)胞） Rabies Vaccine (Hamster Kidney Cell) for Human Use3一、基本要求一、基本要求 生產(chǎn)和檢定用設(shè)備、原料及輔料、水、器具、動(dòng)物等應(yīng)符合“凡例”有關(guān)要求。4二、制造二、制造2.1 生產(chǎn)用

2、細(xì)胞：生產(chǎn)用細(xì)胞：Vero Vero 細(xì)胞細(xì)胞 2.1.1 細(xì)胞的管理及檢定細(xì)胞的管理及檢定 應(yīng)符合“生物制品生產(chǎn)用動(dòng)物細(xì)胞基質(zhì)制備及檢定規(guī)程”規(guī)定。各細(xì)胞種子批代次應(yīng)不超過(guò)批準(zhǔn)的限定代次。 取自同批工作細(xì)胞庫(kù)的1支或多支細(xì)胞管，經(jīng)復(fù)蘇擴(kuò)增后的細(xì)胞僅用于一批疫苗的生產(chǎn)。 2.1.2 細(xì)胞制備細(xì)胞制備 取工作細(xì)胞庫(kù)中的1支或幾支細(xì)胞管，細(xì)胞復(fù)蘇、擴(kuò)增至接種病毒的細(xì)胞為一批。將復(fù)蘇后的單層細(xì)胞用胰蛋白酶或其他適宜的消化液進(jìn)行消化，分散成均勻的細(xì)胞，加入適宜的培養(yǎng)液混合均勻，置37培養(yǎng)成均勻單層細(xì)胞。 52.2 毒種毒種2.2.1 名稱(chēng)及由來(lái)名稱(chēng)及由來(lái) 生產(chǎn)用毒種為狂犬病病毒固定毒CTN-1V株、a

3、GV株或其他經(jīng)Vero細(xì)胞適應(yīng)的狂犬病病毒固定毒株。2.2.2 種子批的建立種子批的建立 應(yīng)符合“生物制品生產(chǎn)檢定用菌毒種管理規(guī)程”規(guī)定。各種子批代次應(yīng)不超過(guò)批準(zhǔn)的限定代次。62.2.3 種子批毒種的檢定種子批毒種的檢定 （1）鑒別試驗(yàn)：用小鼠腦內(nèi)中和試驗(yàn)鑒定毒種的特異性，中和指數(shù)應(yīng)不低于500. （2）病毒滴定：每個(gè)稀釋度腦內(nèi)接種體重為11-13g小鼠至少6只，病毒滴度應(yīng)不低于7.5lgLD50/ml. （3）無(wú)菌檢查：依法檢查，應(yīng)符合規(guī)定。 （4）支原體檢查：依法檢查，應(yīng)符合規(guī)定。 （5）病毒外源因子檢查：依法檢查，應(yīng)符合規(guī)定。 （6）免疫原性檢查：用主種子批毒種制備原疫苗，腹腔免疫體重為

4、12-14g小鼠，每只0.5ml，7天后重復(fù)接種1次。于第1次免疫后的第14天，用10倍系列稀釋的CVS病毒腦內(nèi)攻擊，每只0.03ml，每個(gè)稀釋度10只小鼠。同時(shí)，取同樣體重的未免疫小鼠，用10倍系列稀釋的CVS病毒腦內(nèi)攻擊作對(duì)照，每個(gè)稀釋度10只小鼠，每只0.03ml。保護(hù)指數(shù)應(yīng)不低于100.2.2.4 毒種保存毒種保存 毒種應(yīng)置-60以下保存不得超過(guò)2年。72.3 原液原液2.3.1細(xì)胞制備：同細(xì)胞制備：同2.1.2項(xiàng)項(xiàng)2.3.2培養(yǎng)液培養(yǎng)液 培養(yǎng)液為含適量滅能小牛血清的MEM、199或其他適宜培養(yǎng)液。小牛血清的質(zhì)量應(yīng)符合要求。2.3.3對(duì)照細(xì)胞病毒外源因子檢查：對(duì)照細(xì)胞病毒外源因子檢查：

5、 依法檢查，應(yīng)符合規(guī)定。2.3.4病毒接種和培養(yǎng)病毒接種和培養(yǎng) 按0.01-0.1MOI或終濃度為4.5-5.5lgLD50/ml接種狂犬病病毒毒種，置適宜溫度下培養(yǎng)一定時(shí)間后，用PBS沖洗去除小牛血清，加入適量維持液，置33-35繼續(xù)培養(yǎng)。2.3.5病毒收獲病毒收獲 經(jīng)培養(yǎng)適當(dāng)時(shí)間，收獲病毒液，各次收獲的病毒液為單次病毒收獲液，根據(jù)病毒收獲液，根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)情況，可多次收獲病毒液。 82.3.6單次病毒收獲液檢定：?jiǎn)未尾《臼斋@液檢定：按3.1項(xiàng)進(jìn)行。2.3.7病毒滅活病毒滅活 病毒收獲液按1:4000比例加入-丙內(nèi)酯，置適宜溫度下一定時(shí)間內(nèi)滅活病毒。2.3.8 合并、濃縮、純化合并、濃縮、純化

6、 （1）合并及超濾濃縮 同批細(xì)胞生產(chǎn)的多次病毒收獲液可在嚴(yán)格無(wú)菌操作的條件下合并為一批，經(jīng)超濾或其他適宜方法適當(dāng)濃縮。 （2）純化 經(jīng)濃縮并檢定合格的病毒液以柱色譜或其他適宜的方法純化，純化后可加入適量人血白蛋白作為穩(wěn)定劑及一定量硫柳汞作為防腐劑，即為原液。2.3.9原液檢定：原液檢定：按3.2項(xiàng)進(jìn)行。92.4半成品半成品2.4.1配制配制 根據(jù)蛋白質(zhì)含量和抗原含量進(jìn)行配制，總蛋白含量應(yīng)不高于120g/劑?？杉尤虢K濃度不高于0.70g/ml的氫氧化鋁佐劑吸附，即為半成品。2.4.2半成品半成品檢定：檢定：按3.3項(xiàng)進(jìn)行。102.5成品成品2.5.1分批分批 應(yīng)符合“生物制品分批規(guī)程”規(guī)定。2.

7、5.2分裝分裝 應(yīng)符合“生物制品分裝和凍干規(guī)程”規(guī)定。2.5.3規(guī)格規(guī)格 每瓶1.0ml。每1次人用劑量為1.0ml，狂犬病疫苗效價(jià)應(yīng)不低于2.5IU。2.5.4包裝包裝 應(yīng)符合“生物制品包裝規(guī)程”規(guī)定。11三、檢定三、檢定3.1單次病毒收獲液檢定單次病毒收獲液檢定3.1.1病毒滴定：病毒滴定：按2.2.3（2）項(xiàng)進(jìn)行，病毒滴度應(yīng)不低于6.0lgLD50/ml。 人用狂犬病疫苗（地鼠腎細(xì)胞）病毒滴度應(yīng)不低于5.5lgLD50/ml。3.1.2無(wú)菌檢查無(wú)菌檢查 依法檢查，應(yīng)符合規(guī)定。3.1.3支原體檢查支原體檢查 依法檢查，應(yīng)符合規(guī)定。123.2原液檢定原液檢定3.2.1抗原含量抗原含量 采用適

8、宜的方法檢測(cè)抗原含量。3.2.2病毒滅活驗(yàn)證試驗(yàn)病毒滅活驗(yàn)證試驗(yàn) 取病毒滅活后的本品，腦內(nèi)接種體重為11-13g小鼠20只，每只0.03ml，觀(guān)察14天，應(yīng)全部健存（3天內(nèi)死亡的不計(jì)）3.2.3蛋白質(zhì)含量蛋白質(zhì)含量 取純化后未加入人血白蛋白的本品，依法測(cè)定，應(yīng)不高于120g/ml。3.2.4牛血清白蛋白殘留量牛血清白蛋白殘留量 采用酶聯(lián)免疫法，牛血清白蛋白殘留量應(yīng)不高于50ng/劑。3.2.5Vero細(xì)胞細(xì)胞DNA殘留量殘留量 應(yīng)不高于100g/劑。3.2.6無(wú)菌檢查無(wú)菌檢查 依法檢查，應(yīng)符合規(guī)定。3.3半成品檢定半成品檢定 無(wú)菌檢查：依法檢查，應(yīng)符合規(guī)定。133.4成品檢定成品檢定3.4.1

9、鑒別試驗(yàn)鑒別試驗(yàn) 按3.4.4項(xiàng)進(jìn)行，應(yīng)符合規(guī)定。效價(jià)測(cè)定不合格時(shí)，鑒別試驗(yàn)不成立。3.4.2外觀(guān)外觀(guān) 應(yīng)為乳白色渾濁液體，久置形成可搖散的沉淀，無(wú)異物。 人用狂犬病疫苗（地鼠腎細(xì)胞）無(wú)佐劑應(yīng)為無(wú)色澄明液體。3.4.3化化學(xué)檢定學(xué)檢定 （1）PH值：應(yīng)為7.2-8.0。 （2）硫柳汞含量：應(yīng)不高于0.10mg/ml。 （3）含佐劑疫苗應(yīng)進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)，氫氧化鋁含量應(yīng)不高于0.70mg/ml。 （凍干人用狂犬病疫苗：水分應(yīng)不高于3.0%）3.4.4效價(jià)測(cè)定：效價(jià)測(cè)定：應(yīng)不低于2.5IU/劑。3.4.5熱穩(wěn)定性試驗(yàn)熱穩(wěn)定性試驗(yàn) 疫苗出廠(chǎng)前應(yīng)進(jìn)行熱穩(wěn)定性試驗(yàn)。于37放置14天后；按3.4.4項(xiàng)進(jìn)行效價(jià)

10、測(cè)定。如合格，視為效價(jià)測(cè)定合格。3.4.6無(wú)菌檢查無(wú)菌檢查 依法檢查，應(yīng)符合規(guī)定。3.4.7異常毒性檢查異常毒性檢查 依法檢查，應(yīng)符合規(guī)定。3.4.8細(xì)菌內(nèi)毒素檢查：細(xì)菌內(nèi)毒素檢查： 應(yīng)不高于100EU/劑。14四、保存、運(yùn)輸及有效期四、保存、運(yùn)輸及有效期 于2-8避光保存和運(yùn)輸。自效價(jià)測(cè)定合格之日起，有效期為1年。15五、使用說(shuō)明五、使用說(shuō)明【藥品名稱(chēng)藥品名稱(chēng)】 通用名稱(chēng)：人用狂犬病疫苗（Vero疫苗） 英文名稱(chēng)：Rabis Vaccine (Vero Cell) for Human Use 漢語(yǔ)拼音：Renyong Kuangquanbing Yimiao(Vero Xibao)【成分和形

11、狀成分和形狀】 本品系用狂犬病病毒固定毒株接種Vero（或地鼠腎）細(xì)胞，培養(yǎng)后，收獲病毒液，經(jīng)滅活病毒、濃縮、純化，加入適宜的穩(wěn)定劑，可加入氫氧化鋁佐劑制成。為乳白色渾濁液體，含硫柳汞防腐劑。（凍干人用狂犬病疫苗為白色疏松體，復(fù)溶后為澄明液體） 人用狂犬病疫苗（地鼠腎疫苗）含佐劑疫苗為為乳白色渾濁液體，不含佐劑疫苗為無(wú)色澄清液體。【接種對(duì)象接種對(duì)象】 凡被狂犬或其他瘋動(dòng)物咬傷、抓傷時(shí)，不分年齡、性別均應(yīng)立即處理局部傷口（用清水或肥皂水反復(fù)沖洗后再用碘酊或酒精消毒數(shù)次），并及時(shí)按暴露后免疫程序注射本疫苗；凡有接觸狂犬病病毒危險(xiǎn)的人員（如獸醫(yī)、動(dòng)物飼養(yǎng)員、林業(yè)從業(yè)人員、屠宰場(chǎng)工人、狂犬病實(shí)驗(yàn)人員等

12、），按暴露前免疫程序免疫接種?！咀饔门c用途作用與用途】 接種本疫苗后，可刺激機(jī)體產(chǎn)生抗狂犬病病毒免疫力。用于預(yù)防狂犬病?！疽?guī)格規(guī)格】 每瓶1.0ml。每1次人用劑量為1.0ml，狂犬病疫苗效價(jià)應(yīng)不低于2,5IU。 16【用法用量用法用量】 （1）使用前將疫苗振搖成均勻懸液。 （2）于上臂三角肌肌內(nèi)注射，幼兒可在大腿前外側(cè)區(qū)肌內(nèi)注射。 （3）暴露后免疫程序：一般咬傷者于0天（第1天，當(dāng)天）、3天（第4天，以下類(lèi)推）、7天、14天、28天各注射本疫苗1劑，共5針，兒童用量相同。對(duì)有下列情形之一的建議首劑狂犬病疫苗劑量加倍給予。 注射疫苗前1個(gè)月內(nèi)注射過(guò)免疫球蛋白或抗血清者。 先天性或獲得性免疫缺陷

13、病人。 接受免疫抑制劑（包括抗瘧疾藥物）治療的病人。 老年人及患慢性病者。 于暴露后48小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間后才注射狂犬病疫苗的人員。 17暴露后免疫程序按下述及程度分級(jí)處理： 級(jí)暴露 觸摸動(dòng)物，被動(dòng)物舔及無(wú)破損皮膚，一般不需處理，不必注射狂犬病疫苗。 級(jí)暴露 未出血的皮膚咬傷、抓傷，破損的皮膚被舔及，應(yīng)按暴露后免疫程序接種狂犬病疫苗。 級(jí)暴露 一處或多處皮膚出血性咬傷或被抓傷出血，可疑或確診的瘋動(dòng)物唾液污染粘膜，應(yīng)按暴露后程序立即接種狂犬病疫苗和抗血清或免疫球蛋白。抗狂犬病血清按40IU/kg給予，或狂犬病人免疫球蛋白按20IU/kg給予，將盡可能多的抗狂犬病血清或狂犬病人免疫球蛋白做咬傷局部浸潤(rùn)注射，剩余部分肌內(nèi)注射。 （4）暴露前免疫程序：按0天、7天、28天接種，共接種3針。 （5）對(duì)曾經(jīng)接種過(guò)狂犬病疫苗的一般患者再需接種疫苗的建議： 1年內(nèi)進(jìn)行全程免疫，被可疑瘋動(dòng)物咬傷者，應(yīng)于0天和3天各接種1劑疫苗。 1年前進(jìn)行過(guò)全程免疫，被可疑瘋動(dòng)物咬傷者，則應(yīng)全程接種疫苗。 3年內(nèi)進(jìn)行過(guò)全程免疫，并且進(jìn)行過(guò)加強(qiáng)免疫，被可疑瘋動(dòng)物咬傷者，于0天和3天各接種1劑疫苗。 進(jìn)行過(guò)全程免疫，并且進(jìn)行過(guò)加強(qiáng)免疫但不超過(guò)3年，被可疑瘋動(dòng)物咬傷者，則應(yīng)全程接種疫苗。18 【不良反應(yīng)】 注射后有輕微局部及全身反應(yīng)，可自行緩解，偶有皮疹。若有速發(fā)型過(guò)敏反應(yīng)、神經(jīng)性水腫、蕁麻疹等較嚴(yán)重副反應(yīng)者，可做對(duì)癥治療