銀杏葉中黃酮類(lèi)化合物的提取

1、分離工程 期末論文銀杏葉中黃酮類(lèi)化合物的提取THE EXTRACTION OF FLAVONOIDS IN THE LEAVES OF GINKGO BILOBA學(xué) 院： 化學(xué)工程學(xué)院 專(zhuān)業(yè)班級(jí)： 化學(xué)工程與工藝 化工081 學(xué)生姓名： 周露 學(xué) 號(hào)： 050811113 指導(dǎo)教師： 戴衛(wèi)東（副教授） 2011年6月期末論文中文摘要銀杏葉中黃酮類(lèi)化合物的提取摘 要：詳盡介紹了膜分離法從銀杏葉中提取黃酮類(lèi)化合物,并對(duì)提取物的精制工藝進(jìn)行探索,進(jìn)而在實(shí)驗(yàn)室最佳工藝條件下提取出有效成分。綜述了近年來(lái)對(duì)銀杏葉黃酮類(lèi)化合物提取工藝、測(cè)定方法、應(yīng)用等方面的研究進(jìn)展, 為大規(guī)模提取、開(kāi)發(fā)黃酮類(lèi)化合物及綜合利

2、用銀杏葉資源提供依據(jù)。對(duì)銀杏葉中黃酮類(lèi)化合物的提取工藝進(jìn)行了研究, 為黃酮的提取分離提供依據(jù)。關(guān)鍵詞：銀杏葉；黃酮；膜分離；研究進(jìn)展期末論文外文摘要THE EXTRACTION OF FLAVONOIDS IN THELEAVES OF GINKGO BILOBAAbstract: This paper introduces in detail membrane separation from extracting flavonoids of ginkgo biloba leaves, and explores the extracts of refining process in lab,

3、and then extracted optimum conditions effective components. In recent years were reviewed flavonoids of ginkgo biloba extract technology, measuring methods, application, etc, the research progress for large-scale extraction, development of flavonoids and comprehensive utilization of ginkgo biloba re

4、sources, provides the basis. Flavonoids of ginkgo biloba in the extraction process was studied, the extraction and separation for flavonoids provides the basis. Keywords: Ginkgo biloba leaves ;Flavonoids ;Membrane separation ;Research progress分離工程期末論文 第 13 頁(yè) 共 13 頁(yè) 1 緒論銀杏樹(shù)Ginkgo bilobaL.又稱白果樹(shù)、公孫樹(shù),是我

5、國(guó)古老的樹(shù)種之一, 具有“活化石”的美稱。由于其生長(zhǎng)規(guī)律特殊,抗病能力強(qiáng)而受到國(guó)內(nèi)外的重視1。有關(guān)銀杏葉的有效成分及療效的研究日益受到重視,已開(kāi)發(fā)出保健品、化妝品、藥品等多達(dá)100多種,形成國(guó)際市場(chǎng)上銷(xiāo)售額20多億美元的新興產(chǎn)業(yè)2。銀杏葉的化學(xué)成分有黃酮類(lèi)、萜類(lèi)、內(nèi)酯類(lèi)、酚酸類(lèi)以及生堿、聚異戊二烯等化合物。黃酮類(lèi)為銀杏葉的主要有效成分之一,含量隨品種、產(chǎn)地、樹(shù)齡、不同的采摘時(shí)間而不同3。黃酮類(lèi)化合物優(yōu)異的抗氧化、抗病毒、防治心血管疾病、增強(qiáng)免疫力等作用而受世人矚目。藥學(xué)研究表明,有38種銀杏黃酮類(lèi)化合物從銀杏葉中分離出來(lái),其中黃酮類(lèi)化合物主要有3類(lèi):黃酮(醇)及其苷28種:如槲皮黃酮等;黃烷醇

6、類(lèi):如兒茶素等4種;雙黃酮:如白果雙黃酮等6種(兒茶素)4。1 膜分離法 1.1 膜分離法 超濾是新興的分離純化技術(shù)，是利用膜的孔徑特征，以物理手段將不同大小的分子進(jìn)行分離，具有在分離過(guò)程中被分離成分穩(wěn)定、分離率高、耗能低、無(wú)二次污染等優(yōu)點(diǎn)5，目前在食品、生物、醫(yī)藥以及化工領(lǐng)域使用較多。1.2 原料、儀器與設(shè)備銀杏葉:江蘇邪州港上鎮(zhèn)市售;蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品:上海化學(xué)試劑公司產(chǎn)品;無(wú)水乙醇:上海振興化工一廠產(chǎn)品.722型光柵分光光度計(jì):上海第三分析儀器廠產(chǎn)品;真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀:上海申順生物科技有限公司產(chǎn)品;離心沉淀機(jī):上海醫(yī)用分析儀器廠產(chǎn)品;小型平板超濾裝置:賽普(無(wú)錫)膜科技發(fā)展有限公司產(chǎn)品;超濾膜(截

7、留相對(duì)分子質(zhì)量分別為5000，10000，20000):美國(guó)Osmonies公司產(chǎn)品。1.3 銀杏葉中黃酮提取的工藝路線銀杏干葉一粉碎乙醇(丙酮)水溶液浸提一抽濾后的濾渣重復(fù)提取一次合并濾液一減壓濃縮(除乙醇)靜置Zh離心一超濾一減壓濃縮一真空干燥銀杏葉黃酮產(chǎn)品。1.4 黃酮化合物的定量測(cè)定以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，利用黃酮類(lèi)化合物中的3一羥基、4一羥基、5一羥基、4一羰基或鄰二位酚羥基與Al3+進(jìn)行絡(luò)合反應(yīng)，在堿性條件下生成紅色絡(luò)合物，在波長(zhǎng)510nm下測(cè)定，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為:y=12.973x一0.0101，r2=0.9996，線性范圍0.020.10mg/mL.樣品的測(cè)定方法相同6。1.5 超濾

8、工藝中相對(duì)通量的測(cè)定將一定體積的提取液裝入料槽中，開(kāi)泵超濾并計(jì)時(shí)，間隔一定時(shí)間測(cè)定超濾液體積.相對(duì)通量是對(duì)膜通量的間接表示方法，可準(zhǔn)確地反映出膜通量的變化規(guī)律.超濾開(kāi)始后以3min為單位測(cè)量通量J。，然后每隔一定時(shí)間測(cè)量通量Jt，直到相對(duì)通量(Jt /J。)相對(duì)穩(wěn)定時(shí)停止7。1.6 銀杏葉黃酮提取工藝1.6.1 溶劑對(duì)銀杏葉總黃酮浸提效果的影響 國(guó)外專(zhuān)利報(bào)道過(guò)使用丙酮溶劑提取銀杏葉黃酮產(chǎn)品8，作者采用不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇、丙酮兩種溶劑進(jìn)行浸提對(duì)比實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)圖1.丙酮的提取效果優(yōu)于同體積分?jǐn)?shù)的乙醇，丙酮溶液的體積分?jǐn)?shù)在60%時(shí)的提取效果最好，乙醇溶液的體積分?jǐn)?shù)在50%時(shí)的提取效果最好.由于丙酮的

9、價(jià)格昂貴，且有毒性，國(guó)內(nèi)企業(yè)很少使用，從提取效果、生產(chǎn)安全性及成本等綜合考慮，選擇體積分?jǐn)?shù)50%的乙醇溶液作溶劑較合適。1.6.2 溫度對(duì)銀杏葉黃酮浸提效果的影響 溫度是對(duì)提取效果產(chǎn)生顯著影響的因素之一從圖2可以看出，溫度越高黃酮的提取效果越好，在80時(shí)達(dá)到最大值，繼續(xù)升高溫度，黃酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)有所下降，原因是黃酮貳在高溫條件下長(zhǎng)時(shí)間受熱易發(fā)生氧化，而且溫度過(guò)高會(huì)使葉綠素、單寧等雜質(zhì)溶出量增大，導(dǎo)致分離純化難度加大，造成黃酮的損失.因此，提取溫度不應(yīng)超過(guò)80。1.6.3 固液比例對(duì)銀杏葉黃酮浸提效果的影響 在控制成本的前提下，為了達(dá)到最佳的提取效果，對(duì)固液比例進(jìn)行實(shí)驗(yàn).圖3表明，在固液比1g:4m

10、L一1g:10mL的范圍內(nèi)提取效果隨溶劑用量的增加，黃酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)顯著增加。當(dāng)固液比達(dá)到1g:10mL之后，黃酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)的增加隨溶劑用量增加趨勢(shì)明顯降低。因此，選取的最佳固液比為1g:10mL。1.6. 4 浸提時(shí)間對(duì)銀杏黃酮提取效果的影響 為縮短生產(chǎn)周期，提高提取效率，現(xiàn)對(duì)浸提時(shí)間進(jìn)行考察。圖4可見(jiàn)，黃酮提取效果隨時(shí)間變化趨勢(shì)平緩，浸提時(shí)間2h與3h的提取液中黃酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為3.51%和3.56%，差異很小，因此，選定最佳提取時(shí)間為2h。由上述實(shí)驗(yàn)確定了銀杏葉黃酮的提取條件:乙醇水溶液體積分?jǐn)?shù)50%，提取溫度80，料液質(zhì)量體積比1g:10mL，提取時(shí)間2h。在確定的提取條件下，產(chǎn)品中黃酮質(zhì)量

11、分?jǐn)?shù)達(dá)到了5.96%.在超濾工藝中，將應(yīng)用上述最佳提取條件。1.7 銀杏葉黃酮的超濾工藝條件研究1.7.1截留相對(duì)分子質(zhì)量不同的超濾結(jié)果膜的孔徑或截留相對(duì)分子質(zhì)量的選擇雖然主要是根據(jù)被分離物的相對(duì)分子質(zhì)量大小來(lái)確定的，但是分子的實(shí)際尺寸與分子的構(gòu)型、分子的聚集狀態(tài)有關(guān)，而且還與溶液的濃度有關(guān)9由于使用有機(jī)溶劑提取得到的料液粘度較大，高分子膠體物質(zhì)較多，膜污染現(xiàn)象較嚴(yán)重.因此一般情況下，膜的截留相對(duì)分子質(zhì)量應(yīng)選擇稍大一些的.故分別選用截流相對(duì)分子質(zhì)量為5000，10000，20000等3種膜，對(duì)有效成分遷移率及產(chǎn)品得率進(jìn)行比較，結(jié)果見(jiàn)表1，選用截留相對(duì)分子質(zhì)量5000的膜所得到產(chǎn)品中黃酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)

12、最高，但黃酮的透過(guò)率只有80.58%;截留相對(duì)分子質(zhì)量20000的膜得到黃酮的透過(guò)率最高，但所得產(chǎn)品中黃酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)最低，這是由于雜質(zhì)的透過(guò)量增大.綜合黃酮的透過(guò)率和得率兩方面考慮，選用截留相對(duì)分子質(zhì)量10000的膜較合適。1.7.2 時(shí)間與膜通量的關(guān)系 通過(guò)對(duì)圖5的分析，可得出相對(duì)通量隨時(shí)間的變化規(guī)律.在壓力為0.1MPa、溫度為20條件下，開(kāi)始超濾的45min里通量下降很快;在超濾過(guò)程中的1一2h間通量變化緩慢;在2h后相對(duì)通量變化基本穩(wěn)定在35%左右。由于實(shí)驗(yàn)裝置帶有料液循環(huán)功能，因此實(shí)驗(yàn)過(guò)程中沒(méi)有出現(xiàn)濃差極化的現(xiàn)象。1.7.3 壓力對(duì)膜通量的影響 由圖6可見(jiàn)，隨著壓力增大，膜通量也增加，

13、且在30min內(nèi)膜通量增加較快，但壓力增加使得衰減幅度減小，以后衰減趨勢(shì)相近.理論上，壓力越高，膜通量越高，但實(shí)際壓力不能太高，因會(huì)影響整個(gè)膜裝置系統(tǒng)的密閉性，本實(shí)驗(yàn)中所使用的工作壓力范圍為0.100.40MPa，建議的使用壓力為0.100.30MPa，因此實(shí)際操作中壓力控制在0.200.30MPa間較為合適。2.2.4溫度對(duì)膜通量的影響 由圖7可見(jiàn)，溫度對(duì)膜通量影響顯著。30時(shí)的通量降低較20時(shí)緩慢。90min后，30，35，40下的通量基本達(dá)到一致。因此，選擇料液溫度30時(shí)進(jìn)行超濾是合適的。1.8 結(jié)論1.8.1 銀杏葉黃酮的提取條件為乙醇水溶液體積分?jǐn)?shù)50%、提取溫度80、料液質(zhì)量體積比

14、1g:10mL、提取時(shí)間2h，得到產(chǎn)品中黃酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)到5.96%。1.8.2 選用截留相對(duì)分子質(zhì)量10000的膜，得到的產(chǎn)品中黃酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)為33.9%，黃酮類(lèi)物質(zhì)的透過(guò)率是89.45%，總提取物得率為3.1%.對(duì)比文獻(xiàn)11的樹(shù)脂提取法，超濾工藝的總黃酮得率是較高的。1.8.3 膜通童2h后基本穩(wěn)定在35%左右，壓力范圍在0.20.3MPa，工作溫度取30較適宜。1.8.4 從試驗(yàn)結(jié)果可以看出，超濾技術(shù)用于分離純化銀杏黃酮類(lèi)物質(zhì)效果理想.值得說(shuō)明的是，目前本試驗(yàn)還處于使用小型試驗(yàn)階段，下一步將進(jìn)行放大試驗(yàn)，以獲得更多的數(shù)據(jù)。2 銀杏葉黃酮類(lèi)化合物的研究進(jìn)展2.1 溶劑提取法 目前國(guó)內(nèi)外掀起了研

15、究開(kāi)發(fā)銀杏葉熱。國(guó)內(nèi)銀杏葉常用溶劑例如乙醇、丙酮、醋酸乙酯、水以及某些極性較大的混合溶劑浸泡銀杏葉進(jìn)行提取,溶劑提取方法一般有:煎煮、冷浸、回流、滲漉等經(jīng)典方法。2.1.1 水提取樹(shù)脂分離法 有關(guān)水浸提銀杏黃酮苷的文獻(xiàn)報(bào)道不多。肖順昌等報(bào)道了用16倍量沸水分3次浸提銀杏葉,得到的水溶液,經(jīng)冷藏、分離雜質(zhì)得溶液,然后用D101型吸附樹(shù)脂吸附得到濃度達(dá)38%的黃酮苷12。胡敏等研究水浸提銀杏葉黃酮苷并用樹(shù)脂精制的工藝,探討了影響黃酮苷浸出的主要因素以及最適的精制方法,結(jié)果表明:水為提取劑,在90水溶回流浸提銀杏葉2次,4 h/次,經(jīng)沉淀,過(guò)濾,濃縮后,用樹(shù)脂精制,冷凍干燥后,制得總黃酮苷含量高的提

16、取物,產(chǎn)品得率為銀杏葉干重的1.2%1.5%13。水提取成本低,沒(méi)有任何環(huán)境污染,產(chǎn)品安全性高,但是水對(duì)有效成分的選擇性差,提取率低。2.1.1 有機(jī)溶劑浸提法 一般的有機(jī)溶劑浸提法。田呈瑞等研究了乙醇浸提銀杏葉黃酮的方法。通過(guò)單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn),確定乙醇提取銀杏葉總黃酮的最佳條件為:銀杏葉粉碎至5060目,以70%乙醇按照液固比61的比例,于80條件下提取2次,1 h/次,銀杏葉總黃酮提取率可達(dá)87.6%14。醇(酮)提-鉛化物沉淀法。張永恒等研究了乙醇回流提取銀杏葉,濃縮液經(jīng)蒸餾水提取,再經(jīng)乙醚萃取,飽和醋酸鉛沉淀法,制備銀杏葉黃酮苷原15。醇提-樹(shù)脂吸附法。王成章等對(duì)黃酮含量較低的銀杏

17、葉的提取和純化進(jìn)行了研究,研究了不同的浸提溶劑(水、甲醇、乙醇、丙酮)、浸提溫度(室溫、400500、600700)、浸提時(shí)間對(duì)黃酮浸出率的影響,在以60%70%的乙醇為浸提劑,液固比為8161,6070熱浸泡,31 h兩次,可以使黃酮的浸出率高達(dá)約85%,選用A-1和A-2混合樹(shù)脂吸附分離,可以制得高含量的銀杏黃酮苷16。吉云秀等研究了用35%的乙醇浸提銀杏葉,液固比為101,50浸提10 min,氨水調(diào)節(jié)pH除雜,浸提液用D101型樹(shù)脂吸附分離的最佳條件,確定出最優(yōu)的吸附解吸工藝條件:吸附流速為3 ml/min。吸附原液pH值為8.3。采用2倍樹(shù)脂床體積的70%乙醇解吸,解吸流速為1.5

18、ml/min,操作溫度為室溫。采用此提取純化工藝所得黃酮類(lèi)化合物的含量為26.2%,黃酮類(lèi)化合物提取收率為64.4%17。醇(酮)浸提-酮/銨鹽萃取法。梁紅等比較了不同溶劑提取銀杏葉黃酮類(lèi)化合物的效率,用70%的乙醇作為提取溶劑,結(jié)合用3%的(NH4)2SO4進(jìn)行二次提取,提取液用飽和的(NH4)2SO4溶液兩次濃縮,黃酮的提純效果非常明顯18。醇(酮)提取-硅藻土過(guò)濾法。熊遠(yuǎn)福等對(duì)銀杏葉總黃酮提取精制技術(shù)進(jìn)行了研究。試驗(yàn)結(jié)果表明,在最佳浸提條件:浸提劑乙醇70%,銀杏葉與浸提劑用量比15,浸提時(shí)間3.5 h,60下浸提2次,最佳精制條件為:每100 g銀杏葉用硅藻土2.5 g,丙烯酸樹(shù)脂80

19、 g,洗脫劑乙醇濃度70%,應(yīng)用該工藝條件進(jìn)行浸提與精制,精品收率>2.25%,總黃酮含量達(dá)28.8%19。以上方法獲得的銀杏葉提取物精品雖然總黃酮(或黃酮苷)含量較高,但由于使用了鹵代烴、甲苯和鉛化物等有毒物質(zhì),殘留在產(chǎn)品中,影響產(chǎn)品質(zhì)量,安全性低。2.2 超臨界流體(SFE)萃取法 超臨界流體是最近幾年才發(fā)展起來(lái)的一種新技術(shù),超臨界萃取和傳統(tǒng)的溶劑萃取相比,超臨界萃取在3540進(jìn)行操作,以CO2為萃取介質(zhì),具有溶質(zhì)、溶劑易于分離,萃取速度高等優(yōu)點(diǎn),特別適用于提取或精致熱敏性和易氧化的物質(zhì)。由于所用的萃取劑是氣體,容易除去,所得產(chǎn)品無(wú)殘留毒性,這種方法適用與醫(yī)藥和食品工業(yè)。張從貴等探討

20、了乙醇提取,超臨界CO2分離銀杏葉中的藥用成分,結(jié)果表明超臨界CO2分離銀杏黃酮的效果不是很好,萃余物得率僅為0.5%20。鄧啟煥等探討了超臨界萃取銀杏葉有效成分的影響因素,在最佳條件下:萃取壓力為20 MPa,時(shí)間90min,液體比3.5%,流量15 L,粒度5目,溫度40,銀杏黃酮的含量為28%,高于國(guó)際公認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)21。佳紅等采用SFE-HPLC測(cè)定銀杏葉粗提物中銀杏黃酮的含量,確定了超臨界流體萃取的最佳條件:壓力為41 364 Pa,溫度為60, 靜態(tài)萃取時(shí)間為4 min,動(dòng)態(tài)萃取體積為4 ml,改性劑加入0.2 ml的乙醇22。因?yàn)槌R界萃取的設(shè)備較大,操作困難等問(wèn)題,難以用于大規(guī)模工業(yè)

21、化生產(chǎn)。2.3 超聲波輔助提取法 近年來(lái)超聲技術(shù)用于提取植物種的藥效成分成為研究的一個(gè)方向。研究表明,利用超聲波產(chǎn)生的強(qiáng)烈振動(dòng)、高的加速度、強(qiáng)烈的空化效應(yīng)、攪拌作用等,都可以加速藥物有效成分進(jìn)入溶劑,從而提高提出率,縮短提取時(shí)間,并且免去溫對(duì)提出成分的影響。郭國(guó)瑞等研究了單因素溫度和時(shí)間對(duì)超聲提取銀杏黃酮的影響,確定了超聲提取銀杏黃酮的最佳條件:時(shí)間55 min,料液比1/30,溫度50,此時(shí)提取率為82.3%23。王廷峰等對(duì)連續(xù)熱回流和超聲法提取銀杏黃酮做了比較性研究,連續(xù)熱回流條件:70%的乙醇,液固比約61,索氏提取器提取2次,1 h/次,提取率為80.9%,通過(guò)三因素實(shí)驗(yàn)研究了超聲提取

22、的最佳條件:5060目的銀杏葉,70%的乙醇,液固比約61,超聲頻率40 KHZ,處理時(shí)間為10 min,靜置時(shí)間為12 h,銀杏黃酮的提取率為86.7%,連續(xù)熱回流和超聲法提取銀杏黃酮的沒(méi)有太大差異,但是超聲法提取明顯縮短了時(shí)間,減少了溶劑用量24。該方法提取速度快,提取率高,節(jié)省溶劑、能耗是一種理想的提取銀杏黃酮的方法。2.4 微波法 微波技術(shù)是一種新的、有發(fā)展前景的新工藝,微波技術(shù)在提取植物有效成份中的應(yīng)用,近年來(lái)得到了很大發(fā)展。微具有穿透力強(qiáng)、選擇性高、加熱效率高等特點(diǎn)。微波輻射(MWI)可以大大加快反應(yīng)速度,反應(yīng)時(shí)間以分、秒計(jì)。微波技術(shù)應(yīng)用于植物細(xì)胞破壁,有效地提高了收率,亦取得了令

23、人可喜的進(jìn)展。李嶸等將微波法與傳統(tǒng)水提法結(jié)合,縮短了提取時(shí)間,大大提高了銀杏葉黃酮的提取率,液固比301,時(shí)間30 min,提取率達(dá)到62.3%25。段蕊等確定了微波提取銀杏黃酮的最佳條件:銀杏葉用175 W微波強(qiáng)度處理5 min后,以體積分?jǐn)?shù)80%的乙醇,在70下提取1 h,得到提取物中黃酮類(lèi)物質(zhì)的質(zhì)量濃度比未經(jīng)微波處理的高出18.8%26。2.5 銀杏黃酮類(lèi)化合物的測(cè)定方法目前,有關(guān)銀杏葉黃酮類(lèi)化合物的測(cè)定國(guó)內(nèi)外沒(méi)有公開(kāi)普遍的控制質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),常用絡(luò)合分光光度法、氣相色譜法、HPLC-UV法、薄層掃描法、庫(kù)侖滴定法、毛細(xì)管電泳法等。2.5.1 絡(luò)合分光光度法 國(guó)內(nèi)使用較多的是“絡(luò)合-分光光度法

24、”。黃酮母核在NaN02的堿性溶液中,與A1(NO3)3絡(luò)合后產(chǎn)生黃色絡(luò)合物,以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)溶液,在UV510 nm處作紫外分光光度法的比色測(cè)定27。雷天乾等對(duì)分光光度法和高效液相色譜測(cè)銀杏葉提取物總黃酮含量的測(cè)定方法,作了比較分光光度法的結(jié)果較HPLC偏高,如果乘以校正因子0.78,結(jié)果與HPLC接近28。此法的測(cè)試設(shè)備價(jià)廉,操作簡(jiǎn)便易學(xué),但因樣品組分復(fù)雜,受雜質(zhì)干擾,定量測(cè)定誤差較大。2.5.2 HPLC-UV法 HPLC是測(cè)定銀杏葉及制劑中黃酮類(lèi)化合物的有效方法,多采用反相C18柱,梯度洗脫,紫外檢測(cè)。秦燕等采用梯度洗脫,流動(dòng)相10 mmol/L的磷酸鹽緩沖液(pH=2.0)-甲醇(505

25、0),紫外檢測(cè)波長(zhǎng):360 nm,外標(biāo)法定量,建立了HPLC測(cè)定銀杏提取物中三種黃酮類(lèi)化合物的優(yōu)化方法29。佳紅等用SFE-HPLC測(cè)定銀杏粗體物中黃酮的含量,流動(dòng)相甲醇-0.4%的磷酸(6040),流速1 ml/min,檢測(cè)波長(zhǎng):266 nm30。方子季等建立了高效液相色譜內(nèi)標(biāo)法測(cè)定銀杏總黃酮的含量,以水楊酸為內(nèi)標(biāo)物,甲醇-0.4%磷酸(11)為流動(dòng)相,于254nm出測(cè)定銀杏葉制品中總黃酮的含量31。2.5.3 薄層掃描法 李俊等利用苷元與苷的極性不同,采用高效硅膠薄層板二次展開(kāi)法,掃描測(cè)定5種黃酮成分。將精制樣品液點(diǎn)樣于薄層板上,薄層板在層析缸內(nèi)用展開(kāi)劑石油醚(bp.6090)-乙醚-甲酸

26、-醋酸乙酯(603064)的上層飽和5 min,分離槲皮素、山柰素和異鼠李素,當(dāng)樣品都分離得較好時(shí),取出薄層板,揮干溶劑,掃描測(cè)定槲皮素、山柰素和異鼠李素的含量。以展開(kāi)劑:氯仿-甲醇-水(642)的下層-乙酸(151)對(duì)同一薄層板進(jìn)行展開(kāi)分離槲皮苷、異鼠李苷,揮干溶劑,掃描測(cè)定槲皮苷、異鼠李苷的含量32。李吉來(lái)等用硅膠G薄層板點(diǎn)樣精制樣品,以氯仿-苯-無(wú)水乙醇-冰乙酸-水(5.5210.51)410放置的下層溶液為展開(kāi)劑,上行展開(kāi)后,晾干,薄層掃描法測(cè)定異鼠李素、山柰素和槲皮素三種黃酮33。2.5.4 庫(kù)侖滴定法 胡衛(wèi)兵等探討了庫(kù)侖滴定法測(cè)定銀杏葉中總黃酮含量的條件。銀杏葉經(jīng)乙醇回流提取,聚酰

27、銨柱分離純化,以2 mol/L HCl-1 mol/L KBr-無(wú)水EtOHv(HCl)v(KBr)v(EtOH)=332混合液為電解液,死停法確定滴定終點(diǎn),以蘆丁為對(duì)照品,計(jì)算出銀杏黃酮的含量34。2.5.5 毛細(xì)管電泳法 毛細(xì)管電泳以高效、快速、用樣量少、耗溶劑少、重現(xiàn)性好、不易污染等優(yōu)點(diǎn),近幾年用于分析天然產(chǎn)物得到較大的發(fā)展。毛細(xì)管電泳的原理是在緩沖體系中引入表面活性劑,利用溶質(zhì)在水相和膠束相中的分配差異進(jìn)行分離。Pittea P對(duì)毛細(xì)管電泳(CE)和HPLC這兩種方法分析銀杏黃酮做了比較,作者認(rèn)為用梯度洗脫的HPLC不但不簡(jiǎn)便而且速度慢35。Yuhua電極法測(cè)定銀杏黃酮的方法,采用+3

28、0 kV工作電壓,70 cm長(zhǎng)、2.5m內(nèi)徑的熔融石英毛細(xì)管柱,在毛細(xì)管的出口處裝有一個(gè)直徑為300m碳盤(pán)工作電極,含有三電極(碳盤(pán)工作電極、鉑輔助電極、飽和汞參比電極)的單元與BASLC-4C電流測(cè)定儀相連,通過(guò)記錄圖形完成電色層分析,在最佳條件下分離并鑒定了表兒茶素、兒茶素、蘆丁、芹黃素、木犀草素、槲皮黃酮6種銀杏葉黃酮類(lèi)化合物36。2.6 應(yīng)用銀杏葉黃酮具有顯著的藥理活性,目前對(duì)銀杏黃酮的藥理活性進(jìn)行了廣泛的研究。銀杏葉黃酮具有較強(qiáng)的清除活性氧自由基、抗脂質(zhì)氧化的作用,能夠調(diào)節(jié)超氧化物歧化酶、過(guò)氧化氫化酶,可預(yù)防和治療與活性氧自由基有關(guān)的疾病,如心腦血管病、老年性癡呆、衰老、神經(jīng)性疾病、

29、帕金森病等;類(lèi)黃酮是癌促進(jìn)劑的拮抗物質(zhì),能消滅發(fā)癌因子,阻止癌細(xì)胞增生;銀杏黃酮并可鎮(zhèn)痛、治療糖尿病等疾病,對(duì)肝組織損傷具有保護(hù)作用37,38,39。利用銀杏黃酮類(lèi)清除自由基、維持(SOD)水平、抗氧化、抗衰老、抗紫外線、高效殺菌的功效,已開(kāi)發(fā)出多種護(hù)膚品和保健品,如銀可絡(luò)、百露達(dá)等40,41,42,43,44。參 考 文 獻(xiàn)1 曾有良,呂南停,周 利,等.銀杏葉中有效成分的提取及作用J.上海化工,2000,23(5):39-39.2 梁 紅,潘偉明,張偉鋒.銀杏葉黃酮提取方法比較J.植物資源與環(huán)境,1999,8(3):12-17.3 王 弘,陳世忠,趙國(guó)斌,等.影響銀杏葉有效成分的有關(guān)因素分

30、析J.中草藥,1999,30(8):631-633.4 苗敬芝,李 勇.銀杏黃酮(GBE)的檢測(cè)與提純工藝研究J.食品科技,2000,(3):39-39.5 任建新.膜分離技術(shù)及其應(yīng)用M.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2003.6 于村，俞莎，沈向紅，保健食品中總黃酮測(cè)定方法的研究J.中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2002，12(4):401一402.7 李淑莉，歐興長(zhǎng)，杜啟云.中藥超濾過(guò)程中幾種預(yù)處理方法效果的比較J.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2002，13(2):76一78.8 Schwabe,Klaus-Peter.Extract from Ginlgo biloba leaves.Its method of prep

31、aration and Pharmaceuticals containing the extract P .美國(guó)專(zhuān)利:USP905167，1989一12一04.9 (法)勞頓巴赫R，阿爾布雷希特R.膜分離方法超濾和反滲透M.黃怡華，藍(lán)汝秀譯，北京:化學(xué)工業(yè)出版社，1991.10 劉重芳.銀杏葉中有效成份的提取和測(cè)定J.中成藥，1995，17(6):40一41.11 肖順昌，伍岳宗.銀杏葉黃酮制備工藝研究J.中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志，1990，21(8):340一341.12 肖順昌,伍岳宗,溫鳴章,等.銀杏葉黃酮制備工藝研究J.國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志,1990,21(8):340-341.13 胡 敏,張艷紅

32、,胡 艷,等.銀杏黃酮苷的水浸提方法研究J.食品與發(fā)酵工業(yè),24(4):32-34.14 田呈瑞,李 昀.銀杏葉黃酮的乙醇提取方法研究J.西北植物學(xué)報(bào),2001,21(3):556-561.1 張永恒,潘朗日,楊大中,等.醫(yī)院制劑學(xué)M.北京;人民衛(wèi)生出版社,1986:238-238.16 王成章,郁 青,陳 祥,等.銀杏葉黃酮苷浸提工藝的研究J.天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā),1998,10(2):66-70.17 吉云秀,葛文光.D101型吸附樹(shù)脂純化銀杏葉中黃酮類(lèi)化合物的研究J.遼寧師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版), 2000,23(2):175-177.18 梁 紅,潘偉明,張偉鋒.銀杏葉黃酮提取方法比較

33、J.植物資源與環(huán)境,1999,8(3):12-17.19 熊遠(yuǎn)福,劉燦明,王日為.銀杏葉總黃酮提取精制技術(shù)研究J.1996,22(1):82-84.20 陳從貴,潘 見(jiàn),張宏康,等.超臨界CO2提取分離銀杏葉藥用成分的工藝研究J.農(nóng)業(yè)工程學(xué)報(bào),18(4):142-145.21 鄧啟煥,高 勇.第二類(lèi)超臨界流體萃取銀杏葉有效成分的實(shí)驗(yàn)研究J.中草藥,1999,30(6):419-422.22 佳 紅,柳正良.SFE-HPLC測(cè)定銀杏葉粗提物中銀杏黃酮的含量J.中草藥,2000,31(2):101-103.23 郭國(guó)瑞,謝永榮,鐘海山.超聲波提取銀杏黃酮苷的工藝研究J.贛南師范學(xué)院學(xué)報(bào),2001,

34、(3):45-48.24 王延峰,李延清,郝永紅,等.超聲法提取銀杏葉黃酮的研究J.食品科學(xué),2002,23(8):166-167.25 李 嶸,金美芳.微波法提取銀杏葉黃酮苷的新工藝J.食品科學(xué),2000,21(2):39-41.26 段 蕊,王 蓓,時(shí)海峽.微波法提取銀杏葉黃酮最佳工藝的研究J.淮海工學(xué)院學(xué)報(bào),2001,10(3):46-4827 劉重芳.銀杏葉中有效成分的提取和測(cè)定J.中成藥,1995,17(6):40-41.28 雷天乾,葉新蘭,頂立紅,等.銀杏葉及提取物總黃酮含量測(cè)試方法研究J.中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志,2002,33(2):70-71.29 秦 燕,何新英,莊慧娣,等.HPLC測(cè)定銀杏提取物中主要黃酮和萜內(nèi)脂含量的優(yōu)化方法J.上海第二醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2003,23(3):234-236.30 方子季,許自明,朱