了哥王中芫花素含量的高效液相色譜法測(cè)定

1、了哥王中芫花素含量的高效液相色譜法測(cè)定【摘要】目的成立了哥王中芫花素含量測(cè)定方式，為了哥王的質(zhì)量評(píng)判提供依據(jù)。方式采納 HPLC法測(cè)定其芫花素的含量， 色譜柱：AlltechODS mm×250 mm,5 m)；流動(dòng)相：甲醇 %磷酸水溶液 ( 體積比 5545) ；流速為 ml ·min-1 ；檢測(cè)波長(zhǎng) 346 nm，柱溫為 35 ；進(jìn)樣量 10 l 。結(jié)果芫花素在g 范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，其回歸方程為Y=84 069X+，r= 8。平均回收率為 %，RSD=%(n=5)。結(jié)論該法具有操作簡(jiǎn)便準(zhǔn)確，回收率好，周密度、重復(fù)性高，分析快速的優(yōu)勢(shì)，可作為了哥王藥材的質(zhì)量

2、操縱方式。【關(guān)鍵詞】高效液相色譜了哥王芫花素 含量測(cè)定Abstract:ObjectiveTo determination of the contentestablish a method for the of genkwanin in Wikstroemia indica（L. ）).MethodsThecontentof genkwanin in wasdetermined byHPLCwith AlltechC_(18) (250 mm×mm, 5m) column. A mixtureof methanol and % phosphoric acid solution (55

3、45)was used asmobile phase, the flow rate was ml·min-1 and UV detectionwavelength was at 346 nm. Temperature was 35 and sample size was10 linear relationship was good within the range of g (r= 8). The average recovery was 100. 57% , RSD was %. ConclusionThe method is simple and accurate with go

4、od separation.The results are sensitive and reproducible and may be used inthe quality control of genkwanin in Wikstroemia indica（L. ）Key words:HPLC; Wikstroemiaindica;Genkwanin； Determination中藥了哥王為瑞香科植物了哥王 Wikstroemia indica （L. ）的干燥根或根皮 , 主產(chǎn)于兩廣，浙江、江西也有出產(chǎn)。 性味苦寒、微辛，有毒。功能清熱解毒，化痰散結(jié)，消腫止痛。主治風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，淋巴結(jié)炎，

5、瘰疬，癰腫，跌打損傷，具有抑菌、抗病毒抗炎鎮(zhèn)痛、止咳祛痰等作用。本品有毒，對(duì)皮膚有刺激性，所含樹(shù)脂有強(qiáng)烈的瀉下作用 1，文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)含有黃酮、多糖類、酸性樹(shù)脂、揮發(fā)油、甾體類、皂苷等成份。了哥王含有南蕘酚、牛蒡苷元、松脂酚、山萘酚等多種化學(xué)成份，還含芫花素、西瑞香素等 2。了哥王提取液中有效成份的含量測(cè)定目前尚無(wú)研究報(bào)導(dǎo)，因此，咱們采納高效液相色譜法測(cè)定了哥王超聲提取液中芫花素的含量?，F(xiàn)報(bào)導(dǎo)如下。1 儀器與材料儀器 Didnex-P680 高效液相色譜儀； PDA-100 PhotodioteArray檢測(cè)器； CQ2250超聲波清洗儀 ( 上海聲源儀器 ) ；FA1104N 電子分析天平（上海精

6、科天平廠） 。試藥芫花素對(duì)照品由廣州藥物研究所提供，經(jīng)歸一法標(biāo)定，含量為 %，流動(dòng)相甲醇為色譜純 （美國(guó) Tedia 公司），水為二次蒸餾水，其余試劑均為分析純。藥材了哥王購(gòu)于廣州市清平藥材市場(chǎng)， 由廣東藥學(xué)院天然產(chǎn)物化學(xué)系王定勇教授鑒定為了哥王 Wikstroemia indica （L. ）的干燥根莖。2 方式與結(jié)果色譜條件色譜柱為AlltechODS柱（4. 6 mm×250 mm,5 m,）；流動(dòng)相為甲醇 %磷酸溶液（體積比 5545）；流速 ml ·min-1 ；檢測(cè)波長(zhǎng) 346 nm；進(jìn)樣量 10 l ；柱溫： 35；在此條件下供試品中芫花素成份能與其他成份達(dá)到

7、較好的分離。 對(duì)照品、供試品在約 19 min 相同時(shí)刻有一色譜峰，見(jiàn)圖 1。對(duì)照品溶液的制備周密稱取芫花素對(duì)照品的容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成12 mg，置于 mg· ml-150 ml的對(duì)照品溶液，經(jīng)m微孔濾膜過(guò)濾，即得。供試品溶液的制備取了哥王生藥研成細(xì)粉，過(guò) 40 目篩，周密稱取細(xì)粉約 25 g，置具塞錐形瓶中，加入 100 ml 甲醇，稱定重量，超聲處置 45 min，放置室溫，加溶劑補(bǔ)足重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，經(jīng)m微孔濾膜過(guò)濾，即得。線性關(guān)系考察別離周密吸取芫花素對(duì)照品溶液，ml ，別離置于 10 ml 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度， 搖勻，別離吸取 10

8、 l ，注入液相色譜儀中，按上述色譜條件測(cè)定其峰面積，并以對(duì)照品含量（X）為橫坐標(biāo)，峰面積（ Y）為縱坐標(biāo)，得回歸方程為： Y=84 069X+ （r= 8 ）。結(jié)果說(shuō)明：芫花素對(duì)照品在 g 范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。周密度實(shí)驗(yàn)周密吸取同一份供試品溶液10 l ，按上述色譜條件，重復(fù)進(jìn)樣 7 次，測(cè)定供試品溶液中芫花素峰面積值。結(jié)果供試品峰面積值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)誤差 RSD=% (n=7)，說(shuō)明儀器周密度良好。重復(fù)性實(shí)驗(yàn)周密稱取同一批次樣品 5 份各 25 g，按供試品溶液制備項(xiàng)下方式制備并測(cè)定，結(jié)果 RSD=% (n=5)，說(shuō)明此方式的重復(fù)性良好。穩(wěn)固性實(shí)驗(yàn)周密吸取供試品溶液， 按上述色譜條

9、件，每隔 h ，測(cè)定供試品溶液中芫花素峰面積值， 共測(cè)定到第 4 小時(shí)，結(jié)果 RSD=%，供試品溶液在所測(cè)的 4 h 內(nèi)較穩(wěn)固。加樣回收率實(shí)驗(yàn)別離周密稱取已知含量的樣品5 份，每份約25 g ，按供試品制備方式制備，別離加入芫花素對(duì)照品適量并測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果平均回收率 %，RSD=%（n=5）。結(jié)果見(jiàn)表 1。表 1 芫花素含量測(cè)定回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）樣品的測(cè)定取不同批次了哥王的干燥藥材5 份，每份約 25g，按供試品制備方式制備，別離周密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表 2。表 2 樣品中芫花素含量的測(cè)定結(jié)果（略）3 討論流動(dòng)相的選擇別離以甲醇- 水、甲醇 - 水

10、- 磷酸、乙腈 - 水、乙腈- 水- 磷酸為流動(dòng)相較較分離成效。其中甲醇 - 水- 磷酸為流動(dòng)相時(shí)能夠達(dá)到最正確分離成效，故采納甲醇 - 水- 磷酸為流動(dòng)相 3。流動(dòng)相的 pH 值對(duì)分離阻礙較大，以甲醇和磷酸水溶液作為流動(dòng)相， pH 值越低，分離成效越好，考慮到色譜柱對(duì) pH 值的耐受性，因此選擇體積分?jǐn)?shù)為 %的磷酸水溶液。提取方式的選擇別離考察超聲提取和回流提取兩種方式。 結(jié)果說(shuō)明，超聲提取的成效較好，峰面積較大，含量較高，應(yīng)選擇超聲提取方式。提取溶劑的選擇周密稱取了哥王25 g 共 3 份，別離置于錐形瓶中，稱定重量，加入甲醇、乙醇、醋酸乙酯各100 ml，超聲處置45 min ，放至室溫

11、，加溶劑補(bǔ)足重量，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液，測(cè)得芫花素含量別離為 , , mg ·g-1 。甲醇提取物中芫花素含量較高，雜質(zhì)對(duì)分離度干擾小，供試品峰的分離成效好，故采納甲醇作為提取溶劑。提取時(shí)刻的選擇周密稱取了哥王 25 g 共 4 份，別離置于錐形瓶中，各加入甲醇 100 ml ，稱定重量，別離超聲處置 20，30，45， 60 min ，放至室溫，加溶劑補(bǔ)足重量，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液，測(cè)得芫花素含量別離為 ， mg·g-1 ， 45 min 與 60 min 提取成效較好，應(yīng)選用 45 min 提取時(shí)刻。目前 , 對(duì)了哥王化學(xué)成份的研究文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)的很少。 本實(shí)驗(yàn)研究說(shuō)明芫花素為了哥王中可控成份之一 , 故將其作為藥材中的指標(biāo)性成份進(jìn)行含量測(cè)定 , 可有效地操縱了哥王的質(zhì)量?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1謝