大鼠肌鈣蛋白T(TnT)

1、大鼠鈣蛋白T（TnT）酶聯(lián)免疫檢測試劑盒使用說明書使用前仔細閱讀本說明書。本酶聯(lián)免疫試劑盒是基于雙抗體夾心技術原理，來檢測大鼠鈣蛋白T（TnT），只能用于研究用途，不得用于醫(yī)學診斷。用 途： 用于大鼠血清、血漿及相關液體樣本中鈣蛋白T（TnT）的測定。工作原理本試劑盒采用的是雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定樣品中大鼠鈣蛋白T（TnT）的水平。向預先包被了大鼠鈣蛋白T（TnT）單克隆抗體的酶標孔中加入鈣蛋白T（TnT），溫育；洗滌后，加入HRP標記過的鈣蛋白T（TnT）抗體。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶，然后加入底物A、B，產生藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺與樣品

2、中大鼠鈣蛋白T（TnT）的濃度呈正相關。試劑盒組成 1標準品（640ng/L）0.5ml7顯色劑A液6ml2標準品稀釋液3ml8顯色劑B液6ml3酶標包被板12孔8條9終止液6ml4酶標試劑6ml10說明書1份530倍濃縮洗滌液20ml11封板膜2張6樣品稀釋液6ml12密封袋1個需要而未提供的試劑和器材1 37恒溫箱。2 標準規(guī)格酶標儀。3 精密移液器及一次性吸頭4 蒸餾水，5 一次性試管6 吸水紙注意事項1 從2-8取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。2 各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。3 建議

3、所有標準品、樣本都做雙份檢測。如標本中待測物質含量過高，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再按說明書操作進行測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數（n5）。4 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。5 為避免交叉污染，要避免重復使用手中的吸頭和封板膜。6 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。7 底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。洗板方法手工洗板方法：甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內，浸泡1-2分鐘。根據需要，重復此過程數次。自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后

4、再用到正式實驗過程中。標本要求 1不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。2標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20保存，但應避免反復凍融。操作程序1 標準品的稀釋：（本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶請按照說明自行在小試管中倍比稀釋）：320ng/L（5號標準品）120l的原倍標準品加入120l的標準品稀釋液160ng/L（4號標準品）120l的5號標準品加入120l的標準品稀釋液80ng/L（3號標準品）120l的4號標準品加入120l的標準品稀釋液40ng/L（2號標準品）120l的3號標準品加

5、入120l的標準品稀釋液20ng/L（1號標準品）120l的2號標準品加入120l的標準品稀釋液2 分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準品孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品孔中加入稀釋好的標準品50l；在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40l，然后再加待測樣品10l（樣品最終稀釋度為5倍）。輕輕晃動混勻，37溫育30分鐘。 3 棄去液體，甩干，每孔加滿稀釋后洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。如此重復5次，拍干。4 每孔加入酶標試劑50l，空白孔除外。輕輕晃動混勻，37溫育30分鐘。 5 棄去液體，甩干，每孔加滿稀釋后洗滌液，振蕩30秒，甩去洗

6、滌液，用吸水紙拍干。如此重復5次，拍干。6 每孔先加入顯色劑A50l，再加入顯色劑B50l，輕輕震蕩混勻，37避光顯色10分鐘。7 取出酶標板，每孔加終止液50l，終止反應（此時藍色立轉黃色）。8 測定：以空白孔調零，在450nm波長下測量各孔的吸光度值（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。9 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟件來計算。應記住由于樣品稀釋了的，其實際濃度應該乘以總稀釋倍數。操作程序總結：準備試劑，樣品和標準品 加入準備好的樣品和標準品，37反應30分鐘洗板5次，加入酶標試劑，3