抗氧化物活性測定方法總結(jié)

1、抗氧化物活性測定方法（傾向于考慮DPPH法和ORAC法）1 .FRAP法:鐵離子還原抗氧化能力測定法1FRAP（ferricionreducingantioxidantpower）方法，在低pH值的溶液中，F(xiàn)e3+-TPTz（Fe3+-三叱噬三嗪）被抗氧化劑還原成有色的Fe2+-TPTZ0反應(yīng)的結(jié)果常以Fe2+當(dāng)量或標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的抗氧化能力表示。該法快速簡便、易于操作、重復(fù)性好，但FRAP反應(yīng)屬于電子轉(zhuǎn)移（SET）反應(yīng)，因此FRAP方法不能夠測定氫轉(zhuǎn)移反應(yīng)（HAT）起作用的物質(zhì)。而且該法實際測定的是待測生物活性物質(zhì)將Fe3+還原為Fe2+的能力，因此沒有抗氧化能力的生物學(xué)相關(guān)性。2 .TEAC法（

2、troloxequivalentantioxidantcapacity）ABTS（2,2'-amino-di（2-ethyl-benzothiazolinesulphonicacid-6）ammoniumsalt,2,2氨基-二（3-乙基-苯并曝哇咻磺酸-6）錢鹽）與過氧化物酶和氫過氧化物在一起形成ABTS+陽離子自由基。在抗氧化劑存在時，這種自由基混合物的光吸收值下降，下降程度取決于抗氧化劑的抗氧化能力，測得的結(jié)果以TEAC表示，即被測抗氧化劑消除ABTS+的能力（吸光度大小的變化）與標(biāo)準(zhǔn)抗氧化劑trolox（VE的水溶性類似物"青除ABTS+的能力的比值。TEAC法十分簡

3、單，適用于大量樣品的分析檢測。但是，ABTS+并非生理自由基，缺乏生理相關(guān)性，而且與FRAP方法相似，ABTS+與不同抗氧化劑問的氧化反應(yīng)時間不同，因此，只能定性不能定量評價樣品的抗氧化能力。3 .DPPH法23（2,2-diphenyt-l-picrylhydrazylradicalscavengingcapacity）DPPH（二苯代苦味肥基自由基）法是較常用的方法之一。DPPH是一種穩(wěn)定的以氮為中心的自由基，其醇溶液呈深紫色，在517nm處有一吸收峰。當(dāng)反應(yīng)系統(tǒng)中存在自由基消除劑時，它可以和DPPH的單電子配對而使517nm處的吸收峰漸漸消退。而且，這種顏色變淺的程度與配對電子數(shù)成化學(xué)計

4、量關(guān)系。因此，根據(jù)吸光度的變化可測得抗氧化劑的活性。通過計算DPPH自由基剩余一半時所需抗氧化劑的濃度（EC50）以及時間（TEC50）反應(yīng)抗氧化物的活性。DPPH法快速、簡單，僅需要一臺紫外分光光度計就可以測定，但DPPH方法存在的不足是，當(dāng)被測物與DPPH紫外吸收有重疊時，將會影響測定結(jié)果，比如類胡蘿卜素。止匕外，由于空間位阻決定反應(yīng)的傾向，小分子化合物由于更易接近自由基而擁有相對較高的抗氧化能力。此外該方法線性范圍也相對較窄，而且所有還原劑都能夠?qū)PPH起作用，因此結(jié)果并不能完全代表抗氧化能力4.ORAC法：氧化自由基吸收能力測定ORAC（oxygenradicalabsorbance

5、capac讓妮測定氧化自由基吸收能力，氧化自由基吸收能力又稱為抗氧化能力。以SodiumFluorescein（SF）作為熒光指示物質(zhì)，以AAPH（2,2'-偶氮二（2-甲基丙基咪）二鹽酸鹽）作為自由基來源，以抗氧化標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)Trolox作為定量標(biāo)準(zhǔn)。SF受到自由基攻擊，在一定波長下熒光度不斷衰減，采用熒光分析儀測定其熒光強度衰減變化可計算樣品的自由基消除能力。ORAC方法可以提供的自由基與生命現(xiàn)象中的自由基具有高度一致性，ORAC作用原理是一種經(jīng)典的通過抑制氫轉(zhuǎn)移反應(yīng)過程終止自由基鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。ORAC法測定的是抗氧化劑抑制體系中活性自由基引起的氧化還原反應(yīng)的能力.ORAC分析方法是一種新

6、的、獨特的評價各種物質(zhì)抗氧化活性的方法，受到美國農(nóng)業(yè)部（USDA）、美國國立衛(wèi)生院（NIH）、美國宇航局（NASA）及美國哈佛大學(xué)（HarvardUniversity）等眾多科技研究機構(gòu)的認(rèn)可。美國官方分析化學(xué)師協(xié)會（AOAC）已將其批準(zhǔn)為國際AOAC標(biāo)準(zhǔn)方法。同時在產(chǎn)品研發(fā)、生產(chǎn)、銷售的工業(yè)領(lǐng)域中，作為衡量產(chǎn)品抗氧化能力的標(biāo)準(zhǔn)分析方法已受到業(yè)內(nèi)的廣泛認(rèn)同，并成為各進(jìn)出口企業(yè)實行國際標(biāo)準(zhǔn)化質(zhì)量控制的依據(jù)。ORAC法操作方法簡便，適用于高通量篩選和進(jìn)行常規(guī)質(zhì)量控制。主要的不足之處是所需儀器較為昂貴，而且實驗對溫度和熒光標(biāo)記物較為敏感，增加了實驗的操作難度。5 .TRAP法：總自由基清除抗氧化能力

7、法TRAP（totalperoxylradical-trappingantioxidantparameterassay）T法以ABTS（2,2'-聯(lián)氨-雙（3-乙基苯并曝哇咻-6-磺酸）二胺鹽）作為顯色劑，在過氧化氫引發(fā)劑AAPH（2,2'-偶氮二（2-甲基丙基咪）二鹽酸鹽）的作用下，可定量生成ABTS自由基，其反應(yīng)混合液呈藍(lán)色，在734nm出存在強吸收?？寡趸镔|(zhì)與自由基作用后會使反應(yīng)混合液顏色變淺，在734nm出的吸收度變小，利用比色法可測定自由基消除情況，評價抗氧化能力。以維生素C作為標(biāo)準(zhǔn)參照物，可定量測定總抗氧化值，及TRAP值。TRAP法經(jīng)常用來測定血漿或血清的總抗氧

8、化能力，因為TRAP法用于測量非酶抗氧化物質(zhì)，比如谷胱甘肽，維生素C,維生素E,B-胡蘿卜素。不足之處是反應(yīng)終點各異，各個實驗室缺乏可比性。6 .TOSC法：總氧自由基消除能力檢測法TOSC(totaloxyradicalscavengingcapadty)勺原理是，ABAP產(chǎn)生的自由基與KMBA(a-keto-丫-methiolbutyricacid)作用可氧化產(chǎn)生乙烯，抗氧化劑的存在可與KMBA競爭結(jié)合自由基，從而減少乙烯的產(chǎn)量，最后通過乙烯的減少程度來衡量抗氧化能力的強弱。TOSC法以氣相色譜或液相色譜為檢測手段，優(yōu)勢是較全的反應(yīng)機體的中抗氧化能力。TOSC方法簡便，靈敏，能夠定量分析其

9、抗氧化能力，然而它需要使用氣相色譜儀器，也不適合高通量篩選，并且和TRAP法相似，抗氧化物質(zhì)的濃度與其乙烯的抑制程度沒有呈現(xiàn)很好的線性關(guān)系，因而很難對樣品進(jìn)行合理的比較。7 .F-C法F-C(Folin-Ciocalteu)方法的原理是，F(xiàn)olin-Ciocalteu試劑中的鴇鋁酸可以和多酚化合物反應(yīng)生成藍(lán)色化合物，顏色深淺跟多酚含量呈正相關(guān)，因此可以通過比色法對多酚總量進(jìn)行定量，結(jié)果以五倍子酸作為標(biāo)準(zhǔn)參考物。F-C法一直被作為一種衡量天然產(chǎn)物中總的酚類含量的方法，此法簡單、敏感、精確，然而因為是比色法，必然受到一些物質(zhì)的干擾，如糖類、抗壞血酸、有機酸等，這些物質(zhì)會提高酚類的總含量。1杜芹芹、張旭等，人參與附子、黃連配伍的HPLC-ESI-MSff究及抗氧