血型鑒定操作規(guī)程

1、血型鑒定操作規(guī)程一玻片法（僅適用于正定型）1 .原理：1.1 根據(jù)紅細(xì)胞上有無A抗原或（和）B抗原，可以將紅細(xì)胞血型分為A型、B型、AB型和。型。根據(jù)抗-A和抗-B抗體與對(duì)應(yīng)紅細(xì)胞的凝集反應(yīng)，可以鑒定ABOB型。1.2 根據(jù)抗-D抗體與對(duì)應(yīng)紅細(xì)胞抗原的凝集反應(yīng)，區(qū)分RhD陽性和RhD陽性。2 .標(biāo)本采集：用EDTA抗凝管采集被檢對(duì)象靜脈血，充分混勻，確?？鼓浞?。緊急情況下可以使用抗凝動(dòng)脈血。嬰幼兒及其他不便于真空管采血的患者，如不進(jìn)行反定型試驗(yàn)可采集末梢血。3 .標(biāo)本運(yùn)送與儲(chǔ)存：采集好的標(biāo)本與申請(qǐng)單同期盡快（一般2小時(shí)內(nèi)）送往輸血科。標(biāo)本采集后和檢測(cè)后，應(yīng)置于28環(huán)境下。檢測(cè)后的標(biāo)本應(yīng)至少保

2、存7天，以備結(jié)果查對(duì)。4 .儀器與材料：抗-A/B血型定型試劑（單克隆抗體）、RhD（IgM）血型定型試劑（單克隆抗體）、載玻片、試管架、一次性塑料滴管、記號(hào)筆。5 .操作步驟：5.1 用標(biāo)記筆在載玻片上劃分成ABD三個(gè)區(qū)域；5.2 在標(biāo)記好的玻片上分別加1滴抗-A、抗-B和抗-D血型定型試劑；5.3 再各加1滴10%患者紅細(xì)胞懸液（該紅細(xì)胞懸液可以是鹽水懸液，也可以是懸浮于自身血漿或血清中的紅細(xì)胞）；5.4 用干凈的攪拌棒將紅細(xì)胞懸液和試劑充分混合，并把混合物均勻涂開，使其覆蓋大約直徑20mm勺面積；5.5 緩慢連傾斜搖動(dòng)玻片1-2min,觀察結(jié)果并記錄。6 .結(jié)果判定：6.1 凝集或發(fā)生溶

3、血為陽性結(jié)果；6.2 細(xì)胞混勻2min后仍呈懸液狀態(tài)的為陰性結(jié)果；6.3 對(duì)結(jié)果有懷疑，應(yīng)用試管法或微柱凝膠法重復(fù)實(shí)驗(yàn)。二、紙板法1 .原理：1.1 根據(jù)紅細(xì)胞上有無A抗原或（和）B抗原，可以將紅細(xì)胞血型分為A型、B型、AB型和。型。根據(jù)抗-A和抗-B抗體與對(duì)應(yīng)紅細(xì)胞的凝集反應(yīng)，可以鑒定ABOB型正定型。A1細(xì)胞上含有A和A1抗原，B細(xì)胞上含有B抗原。用已知的A、B細(xì)胞檢測(cè)被檢者血清中有無相應(yīng)的抗-A或抗-B抗體，即反定型。綜合正反定型結(jié)果確定受檢標(biāo)本ABO血型。1.2 根據(jù)抗-D抗體與對(duì)應(yīng)紅細(xì)胞抗原的凝集反應(yīng)，區(qū)分RhD陽性和RhD陽性。2 .標(biāo)本采集：用EDTA抗凝管采集被檢對(duì)象靜脈血，充

4、分混勻，確?？鼓浞?。緊急情況下可以使用抗凝動(dòng)脈血。嬰幼兒及其他不便于真空管采血的患者，可采集末梢血。3 .標(biāo)本運(yùn)送與儲(chǔ)存：采集好的標(biāo)本與申請(qǐng)單同期盡快（一般2小時(shí)內(nèi)）送往輸血科。標(biāo)本采集后和檢測(cè)后，應(yīng)置于28環(huán)境下儲(chǔ)存。檢測(cè)后的標(biāo)本應(yīng)至少保存7天，以備結(jié)果查對(duì)。4 .儀器與材料：抗-A/B血型定型試劑（單克隆抗體）、RhD（IgM）血型定型試劑（單克隆抗體）、血型鑒定專用紙板、試管架、一次性塑料滴管、記號(hào)筆。5 .操作步驟：5.1 取潔凈五孔血型鑒定專用紙板，做好姓名標(biāo)記；5.2 按紙板標(biāo)識(shí)向每孔中分別加入相應(yīng)試劑抗A、抗B、抗D血清各1滴以及受檢者血清各2滴；5.3 各孔中分別加入受檢者紅

5、細(xì)胞適量及相應(yīng)所需3-5%A型、B型試劑紅細(xì)胞（自制或商品化試劑）并攪勻，使其覆蓋直徑15-20mm的面積；5.4 輕輕旋轉(zhuǎn)搖晃混勻，直到形成均勻的細(xì)胞懸液或凝集塊，邊搖邊觀察；5.5 3min以上記錄結(jié)果。記錄觀察到的凝集程度或溶血程度。6 .結(jié)果判定：6.1 凝集或發(fā)生溶血為陽性結(jié)果；6.2 細(xì)胞混勻2min后仍呈懸液狀態(tài)的為陰性結(jié)果；6.3 對(duì)結(jié)果有懷疑，應(yīng)用試管法或微柱凝膠法重復(fù)實(shí)驗(yàn)。三、試管法1 .原理：1.1 根據(jù)紅細(xì)胞上有無A抗原或（和）B抗原，可以將紅細(xì)胞血型分為A型、B型、AB型和。型。根據(jù)抗-A和抗-B抗體與對(duì)應(yīng)紅細(xì)胞的凝集反應(yīng)，可以鑒定ABOB型正定型。A1細(xì)胞上含有A和

6、A1抗原，B細(xì)胞上含有B抗原。用已知的A、B細(xì)胞檢測(cè)被檢者血清中有無相應(yīng)的抗-A或抗-B抗體，即反定型。綜合正反定型結(jié)果確定受檢標(biāo)本ABO血型。1.2 根據(jù)抗-D抗體與對(duì)應(yīng)紅細(xì)胞抗原的凝集反應(yīng)，區(qū)分RhD陽性和RhD陽性。2 .標(biāo)本采集：用EDTA抗凝管采集被檢對(duì)象靜脈血，充分混勻，確?？鼓浞?。緊急情況下可以使用抗凝動(dòng)脈血。嬰幼兒及其他不便于真空管采血的患者，如不進(jìn)行反定型試驗(yàn)可采集末梢血。3 .標(biāo)本運(yùn)送與儲(chǔ)存：采集好的標(biāo)本與申請(qǐng)單同期盡快（一般2小時(shí)內(nèi)）送往輸血科。標(biāo)本采集后和檢測(cè)后，應(yīng)置于28環(huán)境下儲(chǔ)存。檢測(cè)后的標(biāo)本應(yīng)至少保存7天，以備結(jié)果查對(duì)。4 .儀器與材料：抗-A/B血型定型試劑（

7、單克隆抗體）、RhD（IgM）血型定型試劑（單克隆抗體）、一次性試管、試管架、一次性塑料滴管、記號(hào)筆。5 .操作步驟：5.1 ABO血型正定型試驗(yàn)5.1.1 取兩支潔凈試管，做好標(biāo)記，按試管標(biāo)記向試管中加入抗-A、抗-B血清各1滴；5.1.2 向每管中各加入1滴3-5被檢紅細(xì)胞鹽水（血清或血漿）懸液；5.1.3 輕輕混合試管內(nèi)容物，1000g離心15s；5.1.4 結(jié)果判斷：將試管拿成銳角，緩慢傾斜，使液體通過細(xì)胞扣，當(dāng)細(xì)胞不再附著在試管上時(shí)，繼續(xù)緩慢地傾斜和振搖，直到形成均勻的細(xì)胞懸液或凝集塊；5.1.5 記錄結(jié)果：記錄觀察到的凝集程度或溶血程度。用ABO反定型實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證正定型結(jié)果。5.

8、2 ABO血型反定型試驗(yàn)5.2.1 取兩支潔凈試管，做好標(biāo)記，向每管中各加2滴被檢血清（或血漿）；5.2.2 按試管標(biāo)記向試管中加入3-5%A型、B型試劑紅細(xì)胞各1滴；5.2.3 輕輕混合試管內(nèi)容物，1000g離心15s；5.2.4 結(jié)果判斷：將試管拿成銳角，緩慢傾斜，使液體通過細(xì)胞扣，當(dāng)細(xì)胞不再附著在試管上時(shí)，繼續(xù)緩慢地傾斜和振搖，直到形成均勻的細(xì)胞懸液或凝集塊；5.2.5 記錄結(jié)果：記錄觀察到的凝集程度或溶血程度。與正定型結(jié)果進(jìn)行相互驗(yàn)證；5.2.6 如果反應(yīng)較弱，可將試管于室溫（或4C）放置510min,以促進(jìn)弱抗體的反應(yīng)，再離心觀察結(jié)果。如果反應(yīng)還是很弱可以增加血清（或血漿）滴數(shù)，最多

9、到6滴以加強(qiáng)反應(yīng)。5.3 RhD血型鑒定試驗(yàn)5.3.1 取一支潔凈試管，做好標(biāo)記，加入抗-D血清1滴；5.3.2 向試管中加入1滴3-5被檢紅細(xì)胞鹽水（血清或血漿）懸液；5.3.3 輕輕混合試管內(nèi)容物，1000g離心15s；5.3.4 結(jié)果判斷：將試管拿成銳角，緩慢傾斜，使液體通過細(xì)胞扣，當(dāng)細(xì)胞不再附著在試管上時(shí)，繼續(xù)緩慢地傾斜和振搖，直到形成均勻的細(xì)胞懸液或凝集塊；5.3.5 記錄結(jié)果：記錄觀察到的凝集程度或溶血程度。6.1 凝集或發(fā)生溶血為陽性結(jié)果；6.2 細(xì)胞混勻2min后仍呈懸液狀態(tài)的為陰性結(jié)果。四、微柱凝膠法1 .原理：ABO/RhD卡的微管中裝填有葡聚糖凝膠顆粒和抗A、抗B、抗D標(biāo)

10、準(zhǔn)血清，如果紅細(xì)胞表面存在A或B或D抗原，就會(huì)與對(duì)應(yīng)的抗體發(fā)生凝集反應(yīng)，凝膠顆粒具有分子篩的作用，可以阻滯凝集的紅細(xì)胞在離心力的作用下通過凝膠顆粒，使其懸浮在凝膠顆粒中，未凝集的紅細(xì)胞則可以通過凝膠顆粒到達(dá)微管底部。2 .標(biāo)本采集及處理：用EDTA抗凝管采集被檢對(duì)象靜脈血，充分混勻，確?？鼓浞帧＞o急情況下可以使用抗凝動(dòng)脈血。3000rpm,離心3-5min。（嬰幼兒及其他不便于真空管采血的患者，如不進(jìn)行反定型試驗(yàn)可采集末梢血。）3 .標(biāo)本運(yùn)送與儲(chǔ)存：采集好的標(biāo)本與申請(qǐng)單同期盡快（一般2小時(shí)內(nèi)）送往輸血科。標(biāo)本采集后和檢測(cè)后，應(yīng)置于28環(huán)境下儲(chǔ)存。檢測(cè)后的標(biāo)本應(yīng)至少保存7天，以備結(jié)果查對(duì)。4

11、.儀器與材料：ABO'RhDM型定型檢測(cè)卡（單克隆抗體）、ABO'RhDfil型檢測(cè)卡（微柱凝膠）、試管架、一次性塑料滴管、記號(hào)筆、一次性試管。5 .操作步驟：5.1 將微住凝膠試劑卡做好患者姓名等標(biāo)記；5.2 將待檢紅細(xì)胞用低離子強(qiáng)度溶液稀釋成0.5%-0.8%的懸浮液，加入標(biāo)有-A、-B、-D（和對(duì)照）的微管中，各1滴（或50ul）;5.3 用低離子溶液將反定型紅細(xì)胞Ai、B配成0.5%0.8%t度，分別加入對(duì)應(yīng)的微孔A莊中，各1滴（或50/）。再分別加入患者血漿各1滴（或50口）;5.4 專用離心機(jī)離心5分鐘，2分鐘900rpm,3分鐘1500rpm，取出肉眼判定結(jié)6.結(jié)果判定：6.1 陽性結(jié)果：紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體在微住凝膠中形成的特異性抗原抗體復(fù)合物浮在凝膠表面或膠中，為陽性反應(yīng)。6.2 反應(yīng)強(qiáng)度：特異性紅細(xì)胞抗原抗體復(fù)合物位于凝膠表面，為強(qiáng)陽性反應(yīng)；復(fù)合物在凝膠中為弱陽性反應(yīng)；愈靠近凝膠底部顆粒愈小，反應(yīng)愈弱。6.3 陰性結(jié)果：被檢紅細(xì)胞抗原無