微生物學(xué)檢測方法在牛奶中青霉素殘留的應(yīng)用

1、微生物學(xué)檢測方法在牛奶中青霉素殘留的應(yīng)用    【牛奶中抗生素殘留是個全球性問題,日益受到世界各國政府的重視。世界糧農(nóng)組織( FAO)、世界衛(wèi)生組織(WHO)的食品法對食品中抗生素最高殘留限量都有明確的規(guī)定,明文禁止抗生素殘留超出最高殘留限量(MRL)的牛奶上市,牛奶中青霉素G的最高殘留限量已從1976年的0. 05u/mL提高到目前的0. 004u/mL。隨著消費者和國家主管部門對動物源性食品安全的重視, 1999年我國農(nóng)業(yè)部公布了中國動物源性食品中殘留物質(zhì)監(jiān)控計劃(農(nóng)牧發(fā)19998號文),開始對動物源性食品中獸藥殘留,包括牛奶中青霉素G等抗生素殘留進

2、行監(jiān)測,以保證動物源性產(chǎn)品的衛(wèi)生安全;2001年和2002年,農(nóng)業(yè)部又先后公布了無公害食品生鮮牛乳(NY/T5045-2001)業(yè)標(biāo)準(zhǔn),規(guī)定了“抗生素不得檢出”。1 國際上微生物學(xué)檢測方法在牛奶中青霉素殘留的應(yīng)用現(xiàn)狀1.1 微生物生長抑制法:初期的方法是根據(jù)不同敏感菌株的生抑制來檢測食品中的抗菌藥物殘留。這些方法最早用于臨床醫(yī)學(xué)的,主要是微生物瓊脂擴散試驗或使用接種菌株的產(chǎn)酸或凝固抑制試驗。1.2 微生物受體法:微生物受體分析法CHARM I和CHARM II比生長抑制分析法用途更廣,可適用于檢測不同基質(zhì)樣品中各種抗生素殘留。CHARM I是專用于牛奶中-內(nèi)酰胺抗生素殘留檢測方法,也是美國AO

3、AC承認(rèn)的第一個快速測定法,這個方法非?？焖俸挽`敏, 一個奶牛樣品分析只需15min時間,可以使奶牛場的生鮮牛奶在沒有進入牛奶加工廠前就能對-內(nèi)酰胺類抗生素殘留進行檢測。檢測牛奶中抗生素殘留的步驟相對簡單、快速,如對于-內(nèi)酰胺類抗生素殘留的檢測, 5mL的牛奶樣品和14 C標(biāo)記-內(nèi)酰胺類抗生素、微生物受體混合,在85培養(yǎng)4min,離心,棄去上層液,沉淀物用水混懸加閃爍液,對篩選樣品計數(shù)1min。牛奶中的-內(nèi)酰胺類和磺胺類抗生素殘留的檢測限低于5ng/mL, 四環(huán)素的檢測限為500ng/mL。這個方法靈敏度高,可作為傳統(tǒng)微生物法的補充,進行復(fù)合篩選。2 微生物學(xué)檢測方法的影響因素對于牛奶樣品,除

4、了加熱破壞自然的抑菌物質(zhì)外,不需要進一步處理,但是,有些抗生素存在熱不穩(wěn)定性。當(dāng)生鮮牛乳直接被檢測時,一般需要臨界狀態(tài)的評價,因為自然的抑菌物質(zhì),如未分化的體細(xì)胞、免疫球蛋白和代謝產(chǎn)物可能引起抑菌圈,此外, pH的偏差,使用的紙片上含有抑菌物質(zhì),工作用鑷子太熱或沒有清洗干凈等,也容易引起假陽性的結(jié)果。有許多因素影響到微生物分析法的檢測結(jié)果。主要的影響因素是檢測的抗生素種類和測試用菌種,尤其是菌種問題。而瓊脂培養(yǎng)基的配方和pH值、測試菌種的類型、培養(yǎng)溫度,培養(yǎng)基厚度和培養(yǎng)方法等也是很重要的影響參數(shù),因此在檢測中采用標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程是必要的。3 我國對牛奶中青霉素殘留檢驗方法應(yīng)用現(xiàn)狀我國關(guān)于牛奶及奶

5、制品中抗生素檢測的國家標(biāo)準(zhǔn)方法最早出現(xiàn)在牛乳檢驗方法GB5409-85中,采用TTC法。1994年制訂的食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗鮮乳中抗生素殘留量檢驗GB /T 4789. 27-1994,也采用TTC法。2001年9月,農(nóng)業(yè)部發(fā)布的無公害食品生鮮牛乳行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中,檢測方法同GB5409-85,并不得檢出。綠色食品消毒牛乳標(biāo)準(zhǔn)也做了類似規(guī)定。微生物學(xué)檢測方法非常適合于基層單位使用,用于對所檢分析物進行分離和定量,并提供一些定性的信息,常用的高效液相色譜法和氣相色譜法就是此類方法,但這些方法需要精密儀器,且操作復(fù)雜,不利于大面積推廣。微生物抑制法中的嗜熱脂肪芽胞桿菌紙片法和微生物受體法CHARM II

6、的檢測限完全能達到我國對牛奶中青霉素最高殘留限量MRL 的要求,比TTC法的精確性和時效性都好,雖然只能檢測某一類的抗生素殘留,不能對某一抗菌藥物作出定性的確認(rèn),但作為牛奶中的青霉素殘留的篩選檢測方法,仍為一種簡單、快速、效果明顯的方法。CHARM II法比嗜熱脂肪芽胞桿菌紙片法檢測時間更短,檢測限更低,但檢測成本較高,而后者雖然檢測時間較長,但檢測成本低廉,不需要昂貴的檢測設(shè)備,更適合于基層單位的常規(guī)檢測。為了保障人民食品安全,適應(yīng)WTO的要求,增強國內(nèi)牛奶及乳制品業(yè)的國際競爭力,必須將牛乳中抗生素殘留的檢測納入常規(guī)檢測中去。首先要制定相應(yīng)的法規(guī)和檢測程序,將牛奶和乳制品中抗生素的檢測、報告

7、、處罰和管理等納入法制化軌道,適應(yīng)市場經(jīng)濟就是法制經(jīng)濟的要求;其次要修訂、制訂乳制品標(biāo)準(zhǔn),將抗生素的檢測納入國標(biāo)體系。加大采用國際標(biāo)準(zhǔn)的比例,同國際標(biāo)準(zhǔn)接軌;再次是要進行抗生素檢測方法篩選工作,提高國產(chǎn)試劑盒的研制能力,努力研發(fā)一些簡單、快速、經(jīng)濟和便攜的能檢測多種抗生素殘留的分析技術(shù); 發(fā)展高效、高靈敏的聯(lián)用技術(shù)和多殘留組分確證技術(shù)。相信以上措施的實施將提高我國牛奶及乳制品中抗生素殘留檢測水平,為消費者的飲食健康提供有力的保障。參考文獻 劉平, 李玉光,馮夢友,等. 用生物電化學(xué)傳感器檢測牛奶中殘留的青霉素J. 光散射學(xué)報, 2005, 17 (1) : 61-63 葉興乾, 劉東紅, 陳健初. 牛奶抗生素殘留快速檢測技術(shù)進展及應(yīng)用現(xiàn)狀J. 農(nóng)業(yè)工程學(xué)報, 2005, 21 (4) : 181-185                 &#