SSR分子標(biāo)記鑒定兩系雜交水稻“荃兩優(yōu)2118”的種子純度

1、SSR分子標(biāo)記鑒定兩系雜交水稻“荃兩優(yōu)2118”的種子純度SSR分子標(biāo)記鑒定兩系雜交水稻“荃兩優(yōu)2118的種子純度 1.2.2 DNA指紋鑒定。PCR擴(kuò)增引物接受SN/T3402-2021兩系雜交水稻與親本真實(shí)性及品種純度鑒定DNA分析法中用于純度鑒定的48對(duì)SSR多態(tài)性引物5。PCR擴(kuò)增體系總體積10 L：10×Buffer 1.0 L，10 mmol/L dNTP 0.2 L，50 ng/mL的上下游引物各0.2 L，Tag酶0.6 L，按上述方法制備DNA模板2.0 L，ddH2O 5.8 L。PCR擴(kuò)增程序：95 下預(yù)變性2 min，進(jìn)行32次擴(kuò)增反應(yīng)循環(huán)：94 下變性45

2、s，55 下退火45 s，72下延長(zhǎng)1 min。然后72 下延長(zhǎng)8 min，至最終10 恒溫。將PCR產(chǎn)物用非變性聚丙烯酰胺凝膠進(jìn)行電泳及染色檢測(cè)，觀看膠片并記錄結(jié)果6。1.2.3田間種植鑒定。每個(gè)批次在海南田間種植1個(gè)小區(qū)，每個(gè)小區(qū)種植400株，單苗移栽，并設(shè)親本對(duì)比。在整個(gè)生長(zhǎng)階段檢查小區(qū)的種植狀況，觀看品種的特征特性，留意削減化肥、除草劑的使用，以免影響植株的特征特性。在抽穗前及齊穗后根據(jù)GB/T 3543.5-1995農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程真實(shí)性和品種純度鑒定進(jìn)行田間純度鑒定，依據(jù)品種特征特性鑒定并記錄下雜株類(lèi)型和數(shù)量7。2結(jié)果與分析2.1“荃兩優(yōu)2118F1種子特異性引物的篩選試驗(yàn)參照行

3、業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SN/T 3402-2021兩系水稻品種真實(shí)性與純度鑒定 DNA分析法，對(duì)48對(duì)引物進(jìn)行篩選，最終選擇RM7120和RM8277作為“荃兩優(yōu)2118F1種子純度SSR鑒定引物。引物RM7120的上游為5-TGCCCAAAATATATGAAACC-3，下游為5-TTTTCTTGTTGAATGGGAAC-3;引物RM8277的上游為5-AGCACAAGTAGGTGCATTTC-3，下游為5-ATTTGCCTGTGATGTAATAGC-3。2.2DNA指紋鑒定與田間種植鑒定結(jié)果的比較利用引物RM7120和RM8277對(duì)6批“荃兩優(yōu)2118各96棵幼苗進(jìn)行SSR分子標(biāo)記鑒定，田間鑒定種植400株

4、，結(jié)果見(jiàn)表1。從表1可以看出，SSR分子標(biāo)記與田間鑒定結(jié)果比較接近，差值最大為2.05%，差值最小為0.23%。圖1為利用引物RM7120進(jìn)行SSR鑒定的電泳結(jié)果，M1、M2雙親的帶型為單一帶型，雜交種1、2、3、4、5、7、8為雜合帶型并具有雙親的帶型，自交牢固的不育系6的帶型與不育系M2一致。3結(jié)論與商量DNA分子標(biāo)記技術(shù)直接分析遺傳物質(zhì)的多態(tài)性，其中SSR標(biāo)記由于具有數(shù)量豐富、多態(tài)性高、遺傳上的共顯性、試驗(yàn)操作簡(jiǎn)潔、結(jié)果穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)，已成為雜交水稻種子純度鑒定的一種理想分子標(biāo)記8。相比較而言，田間種植鑒定是目前公認(rèn)的雜交水稻種子純度鑒定中比較可靠、精確的鑒定方法，也是國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的、目前鑒

5、定雜交水稻種子純度應(yīng)用最廣泛的方法之一9。試驗(yàn)結(jié)果顯示，SSR鑒定與田間鑒定所得雜交水稻種子純度存在差異，并且差異的改變無(wú)規(guī)律可尋。這一方面是因?yàn)镾SR標(biāo)記可精確區(qū)分不育系和恢復(fù)系，但對(duì)于竄粉混雜和變異株較難區(qū)分，此外SSR鑒定的精確性也受到DNA提取質(zhì)量、電泳操作和引物的影響;另一方面是因?yàn)樘镩g種植鑒定的結(jié)果精確性受到鑒定者的閱歷、栽培治理、環(huán)境條件等因素干擾6。但總體來(lái)看，SSR鑒定與田間種植鑒定的結(jié)果十分接近。對(duì)于企業(yè)而言，種子入庫(kù)后到播種之前開(kāi)始包裝銷(xiāo)售，而海南加代種植鑒定需要在次年4月份才能得到鑒定結(jié)果。為了給包裝銷(xiāo)售提供可靠的質(zhì)量根據(jù)，就需要在室內(nèi)先進(jìn)行純度鑒定。在實(shí)際操作中，應(yīng)接受以室內(nèi)鑒定為輔，田間鑒定為主的理念指導(dǎo)