2022年植物細(xì)胞染色體標(biāo)本的制作與觀察

1、普通生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課須知1.新生進(jìn)實(shí)驗(yàn)室之前要認(rèn)真閱讀實(shí)驗(yàn)室根本知識(shí)。 2.每次進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的時(shí)間為以課表為準(zhǔn)，提前10分鐘進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。3.應(yīng)嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)平臺(tái)上預(yù)約時(shí)間進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室進(jìn)展實(shí)驗(yàn)，不來者，視為曠課。如因特殊情況請(qǐng)假，需在實(shí)驗(yàn)開場前至少三天向指導(dǎo)教師說明，在選課平臺(tái)系統(tǒng)中取消原預(yù)約時(shí)間，重新預(yù)約，一次不做實(shí)驗(yàn)或一次不交報(bào)告，即按不及格論處。4.預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和有關(guān)知識(shí)，寫好預(yù)習(xí)報(bào)告手寫,前四局部內(nèi)容一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，二、?shí)驗(yàn)原理，三、實(shí)驗(yàn)器材與試劑，四、實(shí)驗(yàn)步驟與操作方法，無預(yù)習(xí)報(bào)告者扣10分。5. 實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)認(rèn)真操作，仔細(xì)觀察實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象，做好原始記錄(三個(gè)實(shí)驗(yàn)需要用相機(jī)或手機(jī)拍照，DNA指紋圖譜實(shí)

2、驗(yàn)需用U盤拷貝實(shí)驗(yàn)結(jié)果，請(qǐng)自備拍照工具和U盤)。6. 預(yù)習(xí)、課堂操作、課堂紀(jì)律、善后處理、實(shí)驗(yàn)報(bào)告是評(píng)分的依據(jù)。7. 實(shí)驗(yàn)完畢，要將自己使用的儀器刷洗干凈，藥品按序恢復(fù)原位，臺(tái)面擦凈，把自己做實(shí)驗(yàn)的一套東西找齊，經(jīng)指導(dǎo)教師檢查合格并簽字前方可離開。8. 值日生要認(rèn)真清掃地面、水槽、臺(tái)面，檢查水、電、門窗是否關(guān)好。9. 實(shí)驗(yàn)講義：實(shí)驗(yàn)預(yù)約系統(tǒng)中可以下載，也可到生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院網(wǎng)站下載。10. 實(shí)驗(yàn)報(bào)告模板見附件，需注明姓名、學(xué)號(hào)、組號(hào)、做實(shí)驗(yàn)具體時(shí)間。植物細(xì)胞染色體標(biāo)本的制作與觀察上課地點(diǎn)：化學(xué)樓120 上課時(shí)間：選課時(shí)任課教師：陳麗杰 辦公地點(diǎn)：生化樓215 ：84706308課程要求：預(yù)習(xí)

3、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，掌握實(shí)驗(yàn)?zāi)康募霸?、儀器和試劑、實(shí)驗(yàn)步驟；手寫完成預(yù)習(xí)報(bào)告實(shí)驗(yàn)名稱、實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)器材與試劑、實(shí)驗(yàn)方法與步驟，課堂檢查預(yù)習(xí)報(bào)告情況。實(shí)驗(yàn)考前須知： 1、實(shí)驗(yàn)臺(tái)上物品按實(shí)驗(yàn)室管理教師要求擺放整齊；2、實(shí)驗(yàn)廢物按實(shí)驗(yàn)室管理教師要求收集；3、實(shí)驗(yàn)完畢后，經(jīng)教師檢查前方可離開。實(shí)驗(yàn)紀(jì)律： 1、按時(shí)上課 2、穿實(shí)驗(yàn)服白大衣 3、不許吃東西，課堂嚴(yán)禁大聲喧嘩 4、手機(jī)靜音 實(shí)驗(yàn)成績： 預(yù)習(xí)報(bào)告： 20分 實(shí)驗(yàn)操作： 40分 報(bào)告內(nèi)容：結(jié)果和討論 40分 植物細(xì)胞染色體標(biāo)本的制作與觀察1. 實(shí)驗(yàn)背景與原理染色體的研究在生物進(jìn)化、發(fā)育、遺傳和變異中都有十分重要的作用。因此，染色體標(biāo)本的制備

4、技術(shù)是遺傳學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、染色體工程、分類學(xué)等眾多學(xué)科的根本實(shí)驗(yàn)技術(shù)。物種細(xì)胞內(nèi)染色體數(shù)目、形態(tài)、長度等信息的總和根據(jù)實(shí)驗(yàn)的觀察和測(cè)量繪制成的模式圖稱為核型karyotype。核型分析在物種親緣鑒定，染色體變異分析，雜種分析，細(xì)胞分裂過程分析，孤雌生殖等研究中均有重要的作用。染色體標(biāo)本的常規(guī)制片方法有切片法、涂片法、壓片法、滴片法空氣枯燥法等。壓片法操作簡單，是常用的植物染色體標(biāo)本制備的方法。不過，該法在制備中要注意防止壓片所造成的染色體的扭曲、變形和喪失的現(xiàn)象。染色體制備的重要環(huán)節(jié)如下：1取材：應(yīng)取分生旺盛的組織或細(xì)胞。在植物中通常取根尖，在分裂頂峰時(shí)取材，可得到大量分裂相細(xì)胞。而在動(dòng)物細(xì)胞

5、中通常選取骨髓等分裂活潑的細(xì)胞，或是植物血球凝集素等刺激下的淋巴細(xì)胞，也可選取分裂旺盛的體外培養(yǎng)的癌細(xì)胞或轉(zhuǎn)化細(xì)胞等。2預(yù)處理：使用秋水仙胺等藥品破壞紡錘體形成，不但可得到大量分裂相細(xì)胞，而且可使染色體縮短變粗，有利于觀察。3固定：滲透力強(qiáng)的固定液將細(xì)胞迅速殺死，蛋白質(zhì)沉淀，并可盡量保持細(xì)胞原有狀態(tài)。4解離或低滲：植物細(xì)胞要除去細(xì)胞間的果膠層，并使細(xì)胞壁軟化，從而使細(xì)胞得以膨脹，為染色體的分散提供了空間。常用解離方法有酸解法和酶解法。動(dòng)物細(xì)胞無細(xì)胞壁，通常不需解離，而是用低滲液使細(xì)胞膨脹。5染色體分散：通過壓片、滴片等機(jī)械力量使染色體分散, 有利于觀察。2. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握常規(guī)壓片技術(shù)制作植物

6、染色體標(biāo)本的一般方法。2了解顯微鏡下常規(guī)顯色的植物細(xì)胞染色體的形態(tài)特點(diǎn), 熟練掌握顯微鏡的使用。3理解染色體與生命遺傳的意義及染色體核型檢查的應(yīng)用。3. 實(shí)驗(yàn)材料與試劑1材料：市售大蒜。 2設(shè)備與用品：普通光學(xué)顯微鏡，水浴鍋，蓋玻片，載玻片，異物針，鑷子，平皿，濾紙等。3藥品與試劑：秋水仙胺，甲醇，鹽酸等。 l 改進(jìn)石炭酸品紅染液：是近年來觀察植物染色體時(shí)使用的比擬理想的染色劑，染色背景清晰，反差好，使用方便。配制方法如下：原液A：取3 g堿性品紅溶于100 mL 70%的酒精中，此液可以長期保存。原液B：取A液10 mL參加90 mL 體積分?jǐn)?shù)為0.05的苯酚即石炭酸水溶液中2周內(nèi)使用。原液

7、C：取B液55 mL參加6 mL的冰醋酸和6 mL 37%的甲醛可長期保存。染色液：取C液10 mL，參加90 mL 體積分?jǐn)?shù)為0.45的醋酸和1.8 g山梨醇。放置2周后使用，染色效果顯著，可普遍用于植物組織的壓片法和涂片法，使用23年不變質(zhì)。山梨醇為助滲劑，兼有穩(wěn)定染色液的作用。如果沒有山梨醇，也能染色，但效果稍差。l 卡諾固定液：甲醇-冰醋酸體積比3：1，現(xiàn)用現(xiàn)配。4. 實(shí)驗(yàn)方法與步驟l 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容： 壓片法制備大蒜根尖細(xì)胞的染色體標(biāo)本； 觀察男人和女人染色體、洋蔥細(xì)胞有絲分裂的永久標(biāo)本。l 實(shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)：3學(xué)時(shí)。1取材：保持大蒜根部濕潤，使根發(fā)約11.5 cm即可，不能過長。取大蒜0.51

8、cm的根尖。2預(yù)處理：0.52 gL-1用純水配制秋水仙胺處理34 h。3固定：卡諾固定液4 下固定30 min后，用蒸餾水洗凈。4解離：60 水浴下1 mol/L HCl濃鹽酸稀釋大約10倍解離10 min。5洗滌：用蒸餾水清洗根尖組織。假設(shè)洗不凈，會(huì)影響染色。6用改進(jìn)的石炭酸品紅染色5 min，可直接在載玻片上進(jìn)展，染色前可用異物針去掉分生區(qū)以后局部，保存根尖0.20.3 cm即可。染色時(shí)用針把組織撥散。7壓片，敲片：蓋上蓋玻片，上面墊上一張濾紙，先用手指輕輕均勻地按壓蓋玻片，使組織初步壓散，并且可使蓋玻片壓牢，防止敲片時(shí)蓋玻片移動(dòng)。再用異物針的針柄一端垂直輕輕落下為防敲碎玻片，可再在蓋玻

9、片上墊一張濾紙，進(jìn)一步敲散組織，使染色體充分散開。敲至組織在玻片上呈現(xiàn)霧狀。8觀察結(jié)果：細(xì)胞核著色，而細(xì)胞質(zhì)不著色。大蒜有8對(duì)16條染色體2n=16。好的染色體標(biāo)本染色體應(yīng)該分散較好，不重疊，不缺失，染色體形態(tài)清晰。大蒜根尖細(xì)胞的染色體制片×400，箭頭示染色體5. 實(shí)驗(yàn)考前須知1假設(shè)材料不易生根，可把材料在4 低溫處理促使其生根，不過注意低溫有時(shí)也會(huì)誘導(dǎo)染色體數(shù)目加倍。過長的根尖分裂相會(huì)大大減少，所以不要取長度超過1.5 cm的根尖。2秋水仙胺，又名脫甲酰秋水仙堿，毒性比秋水仙堿秋水仙素小，作用卻比秋水仙堿強(qiáng)約10倍。3壓片、敲片時(shí)力量要均勻適宜，防止弄碎玻片；載玻片和蓋玻片之間也不要移動(dòng)。4可隨時(shí)鏡檢判斷敲片進(jìn)展的程度，但要注意整個(gè)過程要保持標(biāo)本的濕潤。6. 思考題假設(shè)染色體標(biāo)本結(jié)果不理想，請(qǐng)分析一下可能的原因有哪些？附件2：大連理工大學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告封皮范本大連理工大學(xué)本科實(shí)驗(yàn)報(bào)告課程名稱： 普通生物學(xué)實(shí)驗(yàn) 學(xué)院系： 專 業(yè)： 班 級(jí)： 學(xué) 號(hào)： 學(xué)生姓名： 年 月 日附件3：大連理工大學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告范本大連理工大學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告學(xué)院系： 專業(yè)： 班級(jí)： 姓 名： 學(xué)號(hào)： 組： _ 實(shí)驗(yàn)時(shí)間： 實(shí)驗(yàn)室： 實(shí)驗(yàn)臺(tái)： 指導(dǎo)教師簽字： 實(shí)驗(yàn)班級(jí)號(hào)： 成績： 實(shí)驗(yàn)名稱：植物細(xì)胞染色體標(biāo)本的制作與觀察一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>