實驗中可能出現(xiàn)的常見問題與解決辦法

1、精選優(yōu)質文檔-傾情為你奉上實驗中可能出現(xiàn)的常見問題與解決辦法一 污染 污染是指由于微生物的侵染，在組織培養(yǎng)容器中滋生大量菌斑，使組培材料不能正常生長和發(fā)育的現(xiàn)象，主要有以下5方面的原因：1.器具滅菌：實驗的所有器具都要在121°C消毒25min，若滅菌溫度不夠或者時間不足，都會導致污染。滅菌時要求冷空氣完全排除，否則會達不到指定溫度。其次，要做好滅菌登記，杜絕出現(xiàn)人為失誤造成的污染。此外，在接種過程中，每用一次都要在火焰上徹底灼燒，特別在接觸到污染物時極易引起器具污染。2.外植體：很多材料在滅菌后其實還是帶菌的，不過量比較少，短期應該觀察不到被感染的現(xiàn)象。3.接種操作：首先，接種人員

2、的手，手腕要用酒精棉球好好擦拭。其次，對于放置在外的培養(yǎng)物（滅菌好的培養(yǎng)基）其瓶子外壁上有灰塵與微生物，放入超凈臺前可以用酒精消毒一下。再者，很容易出現(xiàn)瓶口的污染，所以接種人員的技術要嫻熟，干練。4.環(huán)境條件：加強環(huán)境的滅菌消毒。若有污染的材料不可以就地清洗，必須高壓殺菌后再清洗，否則會導致大量孢子彌漫。此外，要及時打掃衛(wèi)生，定期蒸熏消毒。保證環(huán)境的干凈。5.超凈工作臺：要定期對初過濾器進行清洗和更換。此外，每次使用前要提前20min打開機器預處理，并對臺面進行酒精噴霧消毒。二 材料死亡 實驗過程中，很可能出現(xiàn)材料死亡，主要有以下幾個方面：1.外植體滅菌過度：一旦材料太小或滅菌時間太長，劑量太

3、大，就會導致材料死亡，所以要嚴格控制時間。2.污染：大量污染會造成材料死亡。3.培養(yǎng)基配置出現(xiàn)問題：在激素配置或營養(yǎng)成分配置出現(xiàn)問題時，材料易死亡，常常發(fā)生在無生長點的材料和愈傷組織中。4.培養(yǎng)環(huán)境的惡化：溫度過高，透氣不好，培養(yǎng)過于密集，久不轉移，有害氣體的累積都會造成培養(yǎng)材料的死亡?！敬胧浚骸?】.選用較為溫和的滅菌劑，降低藥物濃度，減少滅菌時間，或選取較為堅強的外植體（eg：生長季節(jié)取芽） 【2】注意個人衛(wèi)生，嚴格按照規(guī)則進行操作。 【3】認真配置各種母液及培養(yǎng)基，選用鹽含量較低的培養(yǎng)基，也可以試著用1/2或1/4的培養(yǎng)基，并調整各激素的用量和配比。也可以適當添加抗生素，活性炭及必要的

4、有機營養(yǎng)。 【4】改善培養(yǎng)環(huán)境，及時轉移和分瓶。 【5】加強組培的過度管理。三 玻璃化 是一種植物生理失調癥，通常為植物體或葉片出現(xiàn)半透明或水漬狀，這種現(xiàn)象稱為玻璃化。其主要原因有6點如下：1.激素濃度：激素的影響包括生長素和細胞分裂素，一方面指細胞分裂素的濃度，一方面指生長素與細胞分裂素的比例，當細胞分裂素濃度過高或者生長素與細胞分裂素比例失調時，都會導致玻璃化，每種植物發(fā)生玻璃化時的激素濃度都不同，要提前查閱文獻，找到合適濃度的激素。2.溫度與濕度：溫度主要影響植物的生長速率，溫度升高時植株生長速度加快，但是溫度過高時，會產生不良影響。溫度忽高忽低易使得瓶內濕度增加，促進玻璃化的形成。為此

5、，可以換用透氣性比較好的牛皮紙封口。此外，若一個培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)材料越多，發(fā)生玻璃化的幾率越大。3.光照：增加光照或延長光照時間可以減少玻璃化的幾率。當溫度較高，光照不足時，很容易玻璃化。4.培養(yǎng)基的成分：在培養(yǎng)基中，適當提高碳氮比例，可以減少玻璃化的比例。5.對策：減少培養(yǎng)基中的含氮量，增加光照，調節(jié)培養(yǎng)溫度，降低細胞分裂素的用量，提高培養(yǎng)基硬度來防止玻璃化。四 褐化 褐化是指培養(yǎng)過程中，由組培物質向培養(yǎng)基中釋放褐色物質，導致培養(yǎng)基逐漸變?yōu)楹稚?，培養(yǎng)材料變褐死亡的現(xiàn)象。主要有以下幾點因素。1.材料的種類：不同植物發(fā)生褐化的幾率不同。2.材料的年齡和大?。和庵搀w的老化程度越高，含有的木質素越多，

6、也比較容易褐化。此外，材料較小時比較容易褐化，而相對較大的材料則不容易褐化。3.光照：摘取外植體前，對母株進行適當?shù)恼诠馓幚?，可以有效防止褐化。在接種后對材料進行一定的暗處理也可以降低褐化發(fā)生幾率，不過處理過度是材料會死亡。4.溫度：低溫可以抑制褐化作用。五 黃化 黃化是指在組培過程中，植株整體失綠，或葉片斑駁黃化的現(xiàn)象。主要原因是Fe不足，礦物營養(yǎng)不均衡，通氣不良，乙烯含量過高，激素配比不當，糖量不足，PH變化太大，培養(yǎng)溫度不適，光照不足等。 解決方法是：配置母液時注意一儀器刻度是否都準確；及時轉接培養(yǎng)物；使用透氣性較好的封口膜，適當調節(jié)PH，無機鹽濃度和激素配比要事先算好，不要忘記加糖，培

7、養(yǎng)時加入抗生素也會影響導致黃化，可以適當?shù)臏p少抗生素的量。六 變異和畸形 變異和畸形是指在培養(yǎng)過程中，由于激素，環(huán)境等的作用，使得組培苗的外部形態(tài)和內部生理發(fā)生變化，引起畸變，矮化，叢生，葉片變厚等的現(xiàn)象?；冎饕怯捎诩に胤N類和濃度導致的，溫度過高也會導致變異。在環(huán)境變得惡劣時也會發(fā)生變異。對此，可以更具植物的種類與生長習性，降低細胞分裂素的濃度，調節(jié)生長素與細胞分裂素比例，改善環(huán)境等來減輕變異和畸變。七 組培苗瘦弱或徒長 正常的組培苗應當葉色鮮綠，植株粗壯。如果在增值階段出現(xiàn)芽苗瘦弱，徒長或節(jié)間過長，這種苗會長大，但就是比正常的瘦弱。有時即使是正常健壯的小苗，若生根階段培養(yǎng)基或環(huán)境得不到保

8、障的話，也會借鑒明顯伸長，葉片變細，變薄，黃化等。這些苗過度培養(yǎng)時一死亡。 原因： 1.細胞分裂素濃度過高，產生過多不定芽，這些密集的芽若不及時進行轉移與分割，很快會變成瘦弱苗。 2.溫度過高 高溫有利于苗的生長，溫度過高，會造成節(jié)間生長過快。 3.光照不足：組培苗會變黃，變細，變瘦，加速生長，使苗在短時間內變得更瘦弱。 4.通氣不良：通氣不良是，會增加瓶內濕度，易導致苗的玻璃化和徒長。解決方法： 1.根據(jù)植物特點減少分裂素的使用，加速繼代培養(yǎng)的速度，適當減少接種的密度，適當降低溫度，提高光照時間，調整培養(yǎng)基硬度，改用透氣的封口膜。 八 不生根或生根率低組培時經(jīng)常會出現(xiàn)植物出根速率慢，效率低的

9、現(xiàn)象，這些苗過度培養(yǎng)時，不容易適應外界條件。原因可能如下： 1.激素種類和濃度：通常NAA用01.0mg/L時培養(yǎng)15天就可以升根，但是有些需要與IAA和IBA混合使用。生根率不會隨著生長素的升高而一直生高。 2.環(huán)境條件：主要是溫度和光照，溫度低時，生根周期會延長。對于一些熱帶花卉來說，低溫會使小苗不生根，溫帶花卉在溫度較低，光照較弱時生根良好。改善措施： 1.對難生根的植物，實驗前要先查好比較適宜的種植條件。 2.掌握各個操作中的要領和質量要求，盡量不要損傷材料。用于生根的苗盡量不要帶有愈傷組織。九 過度苗死亡率高原因如下： 1.組培苗的質量差。 2.環(huán)境條件不適宜：基質的濕度過大會引起根部的潰爛，溫度過高過低都會使組培苗的生長不適。還有光照，在過度期間要適當?shù)挠藐幱熬W(wǎng)遮去大部分光照，之后再逐漸加強光照。但是在過度培養(yǎng)的后期，要提高光照強度，否則會造成定植成活率低。 3