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1、第3章 護用藥理學總論實驗實驗3-1 常用實驗動物的捉拿方法與給藥方法【目的】結合實驗內(nèi)容逐步學會常用實驗動物的捉拿及給藥方法。【材料】家兔 小白鼠 蟾蜍【方法】1、 小鼠的捉拿和給藥方法(一)捉拿法 捉拿方法有二種:一種辦法是用右手提起尾部,放在鼠籠蓋鐵網(wǎng)或其他粗糙面上,向后上方輕拉,此時小鼠前肢緊緊抓住粗糙表面,迅速用左手拇指和食指捏住小鼠頸背部皮膚并以小指和掌部夾持其尾根部固定于手上;另一種抓法是只用左手,先用食指和拇指抓住尾部,再用手掌尺側及小指夾住尾根,然后用拇指及食指捉住其頸部皮膚。前一方法簡單易學,后一方法稍難,但便于快速捉拿給藥。(二)給藥方法1 灌胃法 左手拇指和食指捏住小鼠

2、頸背部皮膚,無名指或小指將尾部緊壓在手掌上,使小鼠腹部朝上。右手持連有小鼠灌胃管的注射器,小心經(jīng)口角將灌胃管插入口腔,用灌胃管向后上方壓迫小鼠頭部,使口腔與食道成一直線,再將灌胃管沿上腭壁輕輕推進食道,針插入時應無阻力。一般在此位置推注藥液即可。如此時動物呼吸無異??蓪⑺幰鹤⑷?。如遇阻力應抽出胃管重新插入,以免損傷或誤入氣管。若誤插入氣管注藥可引起動物立即死亡。推注藥液后輕輕拉出灌胃管。一次灌注量為0.10.25ml/10g體重。操作時切忌粗暴,以防損傷食道及隔肌。2 皮下注射法 注射部位可選背部或腋部皮下。左手抓鼠,右手將裝有藥液的注射器針頭刺入背部或腋部皮下。稍稍擺動針頭,若容易擺動則表明

3、針尖的位置確在皮下。此時注入藥液。拔針時,輕捏針刺部位片刻,以防藥液漏出大批動物注射時,可將小鼠放在鼠籠蓋或粗糙平面上,左手拉住尾部,小鼠自然向前爬動,此時右手持針迅速刺入背部皮下,注射藥液。3肌內(nèi)注射法 小鼠固定同上。將注射器的針頭刺入小鼠后肢大腿外側肌肉, 再注入藥液。注射量一般為0.2ml次只。4腹腔注射法 左手固定動物,使小鼠腹部朝上。右手持注射器,在左或右側下腹部將針頭刺入皮下,沿皮下向前推進23mm,然后使針頭與皮膚呈45角方向穿過腹肌刺入腹腔。針頭不宜進入太深或距上腹部太近以免損傷內(nèi)臟。此時可輕輕推注藥液。一次注射量為0.1ml0.25ml1Og體重。5尾靜脈注射法 將小鼠裝入固

4、定器內(nèi)或玻璃鐘罩內(nèi),使其尾部外露。尾部用4045溫水浸泡半分鐘或用75酒精棉球擦試,使其血管擴張和表皮角質(zhì)軟化。以拇指和中指捏住尾尖部的兩側,食指壓迫鼠根以阻斷其靜脈回流,使尾靜脈充盈明顯。用4號或5號針頭選其一側尾靜脈穿刺如針頭確在血管內(nèi),則推注藥液無阻力。否則皮膚隆起發(fā)白,阻力增大,此時可退回針頭重新穿刺。注射完畢后,把尾巴折曲或按壓片刻止血。需反復靜脈注射時,宜從尾端開始,逐漸向尾根部移動。一次注射量為0.050.1ml/l0g體重。2、 家兔的捉拿和給藥方法(1) 捉拿法捉拿時一手抓其頸背部皮膚,輕輕將兔提起,另一手托住其臀部。不要采用抓雙耳的方法。(二)給藥方法1 灌胃法 如用兔固定

5、箱,一人可操作。右手將開口器固定于兔口中,左手插入導尿管。如無固定箱,需兩人合作進行。助手左手固定兔身及頭部,右手將開口器橫放于兔口中,將兔舌壓在開口器下面。雙手固定開口器。術者將導尿管開口器中央小孔慢慢沿上腭避插入食道約15cm。為避免誤入氣管,可將胃管的外口端放入水中,如有氣泡從胃管口逸出,說明已插入氣管,應拔出重新插入。若無氣泡逸出,則用注射器將藥液灌入,并注入少量空氣,將導尿管中殘存的藥液全部注入胃中。灌胃完畢后,先拔出導尿管,再拿出開口器。2 腹腔注射法 參照小鼠腹腔注射法3 靜脈注射法 兔靜脈注射法一般選用耳緣靜脈。如兩人合作,一人固定兔身。如一人操作則用途固定箱。兔耳外緣的血管為

6、靜脈,中央的血管為動脈。先剪去注射部位的兔毛,用手指彈耳緣靜脈部皮膚是血管擴張。以左手食指和中指夾住靜脈的近端,右手持帶有針頭的注射器,盡量從血管遠端刺入血管。注射時針頭刺入血管,針頭刺入血管后再稍向前推進,以手指固定針頭,放開食指和中指,輕輕推動針栓,若無阻力和局部皮膚發(fā)白隆起現(xiàn)象,即可注藥。若推藥有阻力或發(fā)現(xiàn)皮膚發(fā)白隆起,表示針頭在血管外,這時應將針頭稍退回,再重新穿刺血管。注射完畢后,用棉球壓住針眼,將針抽出。注射量 0.52.5ml/kg。三、蛙和蟾蜍的捉拿和給藥方法(一)捉拿法 蛙和蟾蜍 用左手握持動物,以食指和中指夾住雙側前肢。破壞腦和脊髓時,左手食指和中指夾持蛙或蟾蜍的頭部,右手

7、將探針經(jīng)枕骨大孔向前刺入顱腔擺動探針搗毀腦組織。毀腦后,退回探針向后刺入椎管破壞脊髓。根據(jù)實驗要求采取俯臥位或仰臥位固定。(二)給藥方法蛙或蟾蜍 蛙及蟾蜍皮下有數(shù)個淋巴囊,注入藥物容易吸收。一般常以腹淋巴囊作為紿藥途徑。給藥方法:一手抓住蛙,固定四肢,將其腹部朝上,另一手取注射器,將注射器針頭先經(jīng)蛙大腿上端刺入,經(jīng)大腿肌層,再入腹壁皮下刺入腹淋巴囊內(nèi),然后注入藥液。因為針刺通過肌層,因此拔除針頭時刺口易于閉塞,可防止拔出針頭時藥液外漏。注射量0.251.0ml只。 (張春艷)實驗3-2 不同給藥劑量對藥物作用的影響【目的】觀察不同劑量時藥物作用的差異?!驹怼挎?zhèn)靜催眠藥巴比妥類是中樞神經(jīng)系統(tǒng)抑

8、制藥。巴比妥類藥物對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的抑制作用在一定范圍內(nèi)可隨著劑量增大而出現(xiàn)明顯的藥效變化。鎮(zhèn)靜作用的表現(xiàn)是動物自發(fā)活動減少,錯眠作用則是動物出現(xiàn)共濟失調(diào),但環(huán)境安靜時,可以逐漸入睡。翻正反射的消失可以代表催眠作用,又可以反映催眠藥的麻醉作用?!静牧稀?0.5,0.2和0.05戊巴比妥鈉溶液,1ml 注射器3 支,5 號針頭3 個,電子稱1 個,鼠籠1 個,250ml 玻璃燒杯3 個。健康小白鼠,體重18-22g, 雌雄兼用。 【方法】 1. 取體重接近、性別相同的小鼠3 只,分別稱重、編號。 2. 觀察小鼠正?;顒忧闆r及翻正反射。 3. 3 只小鼠分別腹腔注射不同濃度(0.5,0.2和0.05

9、)戊巴比妥 鈉溶液, 注射劑量0.2ml/10g。 4. 置玻璃燒杯中觀察比較3 只小鼠的活動變化,記錄翻正反射消失時 間和翻正反射恢復時間 【實驗結果】鼠號 藥物濃度 劑量(ml/只) 翻正反射消失時間(min) 翻正反射恢復時間(min) 1 2 3 【注意事項】 1. 翻正反射:正常小鼠輕輕用手將其側臥或仰臥,小鼠會立即恢復正常姿勢即為翻正反射。如輕輕用手將小鼠側臥或仰臥,超過1 分鐘以上小鼠不能恢復正常姿勢即為翻正反射消失,是小鼠產(chǎn)生睡眠的客觀指標。 2. 各項實驗用的注射器及針頭應注意區(qū)分,以免污染影響實驗結果。 3. 藥物注射劑量要準確。【問題討論】 藥物劑量對藥物作用速度、強度有

10、何影響? (張春艷)實驗3-3 給藥途徑對藥物作用的影響【目的】 觀察不同給藥途徑對藥物作用的影響【原理】對于大多數(shù)藥物,不同給藥途徑主要影響藥物吸收而影響藥物作用強度和速度,但有時不同給藥途徑藥物作用也會出項“質(zhì)”的差異,即產(chǎn)生不同性質(zhì)的反應。如口服硫酸鎂產(chǎn)生導瀉、利膽作用,靜脈應硫酸鎂則產(chǎn)生中樞抑制、降壓、肌松作用。原因是口服硫酸鎂時,硫酸根和鎂離子在腸道難以吸收而造成腸道高滲環(huán)境,抑制腸道水分吸收,在同時大劑量飲水時,大量水分在腸道蓄積增加腸容積而刺激腸道蠕動增加,導致瀉下作用,同時由于高濃度硫酸鎂刺激腸粘膜,反射性引起膽總管括約肌松弛、膽囊收縮、促進膽囊排空產(chǎn)生利膽作用。硫酸鎂靜脈注射

11、后血漿鎂離子水平升高,通過拮抗鈣離子作用而發(fā)揮中樞抑制作用,同時減少運動神經(jīng)末梢釋放膽堿而阻斷外周神經(jīng)肌肉傳導,使骨骼肌松弛,通過直接引起交感神經(jīng)節(jié)沖動傳遞障礙,使外周血管舒張而降壓?!静牧稀?鼠秤 大燒杯 硫酸鎂注射液 注射器 小白鼠【方法】 取2只小白鼠,稱重,標號,觀察其正?;顒印?以硫酸鎂注射液0.2 ml/10g,分別給藥,甲鼠灌胃, 乙鼠肌注。觀察兩鼠給藥后反應。【實驗結果】 鼠號 體重 給藥前情況 給藥劑量 給藥途徑 給藥后反應甲乙【問題討論】為什么藥物相同,給藥后會出現(xiàn)不同反應? (張春艷)第四章 傳出神經(jīng)系統(tǒng)藥物實驗 實驗4-1 傳出神經(jīng)系統(tǒng)藥物對兔瞳孔的影響【目的】 1 .

12、 觀察擬膽堿藥、 抗膽堿藥對瞳孔的作用并分析其作用機制。 2. 練習家兔的捉拿、 滴眼及量瞳方法。 【原理】 虹膜內(nèi)兩種平滑肌控制瞳孔大小, 一種是瞳孔括約肌, 其上分布有 M受體, 當M受體激動后, 引 起瞳孔括約肌向眼中心方向收縮, 瞳孔縮??; 另一種是瞳孔開大肌, 其上主要分布的是 受體, 當 受 體激動時, 瞳孔開大肌 向眼外周方向收縮, 瞳孔擴大。 阿托品是M 受體阻斷藥, 產(chǎn)生擴瞳作用; 而毛果蕓香堿是M受體激動藥, 激動 M受體產(chǎn)生縮瞳作用。 【材料】 1. 家兔1 只, 體重2kg 3kg 2. 1 %硫酸阿托品溶液、 1 %硝酸毛果蕓香堿溶液 3.剪刀、 測瞳器、 注射器(1

13、 m1 )、 免固定箱 【方法】1.取健康家兔1 只, 標記后放入兔固定箱內(nèi), 剪去眼睫毛, 在自然光線下測量并記錄兩側正常瞳孔直徑(mm), 然后按下列順序給藥(每 只眼2 滴):左眼狀, 并用手指按住鼻淚管, 使其在眼瞼內(nèi)保留 lmin, 然后將手輕輕放開, 任其自 然溢出。 2. 滴藥 1 5min 后, 在同樣強度的光線下, 再分別測量并記錄各眼瞳孔 大小。 【實驗結果】 兔子 給藥前瞳孔大?。╩m) 給藥時間 給藥后瞳孔大小 (mm)左眼右眼【注意事項】 1.測量瞳孔勿刺激角膜, 否則會影響瞳孔大小。 2.滴藥時應按壓內(nèi)眥部的鼻淚管, 以防藥液進入鼻腔, 經(jīng)鼻粘膜吸收。 3. 各眼滴藥量要準確,眼內(nèi)停留時間要一致, 以確保藥液充分作用。 4.測量瞳孔條件務求給藥后一致: 如光線的強度, 光源的角度等。 5.實驗動物應為一周內(nèi)未用過眼藥者。【問題討論】毛果蕓香堿和阿托品對眼有什么作用? (趙艷平)實驗5-2 煙堿的毒性反應【目的】觀察香煙對小鼠作用,證明吸煙對人類有害【原理】 煙草中的尼古丁是一種高度成癮的藥物,與可卡因相似,吸煙者95%會成癮。大劑量尼古丁會引起惡心及嘔吐,嚴重時會導致死亡?!静牧稀渴蟪?大燒杯 玻璃水煙斗 香煙 蒸餾水 注射器【方法】取蒸餾水4ML,置于玻璃水煙斗內(nèi)

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