工業(yè)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)試卷B答案

1、題號(hào)一二三四五六七八總成績(jī)得分得分一、名詞解釋?zhuān)ü?6 分，每小題4分）1大腸菌群大腸菌群系指一群在37、24h能發(fā)酵乳糖，產(chǎn)酸、產(chǎn)氣，需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌。2培養(yǎng)基是人工配制的能滿足微生物生長(zhǎng)繁殖和積累代謝產(chǎn)物的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。3無(wú)菌操作培養(yǎng)基經(jīng)滅菌后，用經(jīng)過(guò)滅菌的接種工具在無(wú)菌條件下接種含菌材料于培養(yǎng)基上，這一操作稱(chēng)為無(wú)菌操作。4假菌絲酵母生長(zhǎng)旺盛時(shí)，出芽形成的芽細(xì)胞尚未脫離母細(xì)胞又長(zhǎng)出了新芽，容易形成成串的細(xì)胞。如果各細(xì)胞之間連接處面積小于細(xì)胞直徑，形成的這種藕節(jié)狀的細(xì)胞串稱(chēng)為假菌絲。 得分二、填空題（共30分，每空1分）1. 微生物培養(yǎng)基的分類(lèi)方法和種類(lèi)很多，如按培養(yǎng)基中凝固

2、劑含量的多少可分為 固體 、 半固體 和 液體 培養(yǎng)基；按照培養(yǎng)基的原料來(lái)源可分為 天然 、 合成 和 半合成 培養(yǎng)基，如PDA培養(yǎng)基根據(jù)其原料來(lái)源屬于其中的 半合成 培養(yǎng)基。2. 培養(yǎng)基的滅菌一般多采用高壓蒸氣滅菌，滅菌壓力為0.1Mpa，即 121 ，時(shí)間為20min，若培養(yǎng)基中含糖成分的含量較高，一般多采用過(guò)濾除菌或減壓滅菌，滅菌溫度為 115 。3. 對(duì)不同的微生物進(jìn)行斜面接種時(shí)，常根據(jù)需要采用不同的接種方法，如細(xì)菌和放線菌多采用密波狀蜿蜒劃線，酵母菌多采用 中央劃線 法，用來(lái)觀察菌種的形態(tài)和培養(yǎng)特征；霉菌多用 點(diǎn)接 法。4. 顯微測(cè)微尺主要由 目鏡 測(cè)微尺和 鏡臺(tái) 測(cè)微尺組成. 在進(jìn)

3、行細(xì)胞大小測(cè)定之前, 目鏡 測(cè)微尺要先進(jìn)行標(biāo)定。 5枯草芽孢桿菌經(jīng)過(guò)革蘭氏染色后，菌體部分呈 紫 色，芽孢顏色為 無(wú)色 。6三糖鐵高層瓊脂斜面中含有的糖主要有葡萄糖、乳糖和蔗糖三種，培養(yǎng)基中加入了指示劑酚紅, 它在pH小于6.8時(shí)為黃色, 大于8.4時(shí)為紅色。傷寒沙門(mén)氏菌在該培養(yǎng)基里生長(zhǎng)時(shí)，只能利用 葡萄糖 產(chǎn)酸，產(chǎn)酸量也小。處于高層瓊脂斜面表面的有機(jī)酸有的揮發(fā)，有的被氧化，很快消失。因此，表面黃色在短時(shí)間內(nèi)也消失了。又因傷寒沙門(mén)氏菌分解氨基酸等產(chǎn)生 堿性 物質(zhì)，所以高層瓊脂斜面表面又轉(zhuǎn)成 紅色 。而底層在比較短的培養(yǎng)時(shí)間為 黃 色。而大腸桿菌在該培養(yǎng)基中生長(zhǎng)時(shí)，能利用其中所有的糖，培養(yǎng)基上下

4、全為 黃 色。 7根據(jù)微生物菌種保藏的原理，一般微生物菌種保藏常需滿足的條件是： 低溫 、 干燥 、_缺氧（隔絕空氣） 。8糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)中加杜氏管的目的是便于觀察 產(chǎn)氣 現(xiàn)象。9. 乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基（大腸菌群測(cè)定）中加入膽鹽的目的是 抑制革蘭氏陽(yáng)性菌的生長(zhǎng) 。10革蘭氏染色中對(duì)染色標(biāo)本進(jìn)行固定的目的是：殺死微生物固定細(xì)胞結(jié)構(gòu)、防止標(biāo)本被水沖掉、改變?nèi)玖蠈?duì)細(xì)胞的通透性。 得分三、判斷題（共8分，每小題1分）1使用手提滅菌鍋滅菌后,為盡快排除鍋內(nèi)蒸汽,可直接打開(kāi)排氣閥排氣。（ ）2霉菌中有足細(xì)胞的霉菌為根霉。 （ ）3明膠液化實(shí)驗(yàn)，明膠的水解是由于細(xì)菌所產(chǎn)生的淀粉酶的作用。 （ ）4大腸桿菌和八疊

5、球菌為革蘭氏陰性菌，革蘭氏染色后菌體呈紅色；枯草芽孢桿菌為革蘭氏陽(yáng)性菌，革蘭氏染色后菌體呈紫色。 （ ）5培養(yǎng)基的pH值在加熱滅菌后會(huì)下降0.30.4，因此配制時(shí)的pH值要比要求的略高一些。 （ ）6鏡臺(tái)測(cè)微尺每小格的實(shí)際長(zhǎng)度是10微米。 （ ）7實(shí)驗(yàn)室做固體培養(yǎng)基，常加2%的瓊脂作凝固劑，做半固體培養(yǎng)基時(shí)，瓊脂加入量通常是1%。 （ ）8血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)區(qū)的面積是1mm2。 （ ）得分四、簡(jiǎn)答題（共36分，每題6分）1列表說(shuō)明細(xì)菌、酵母、霉菌的培養(yǎng)基種類(lèi)，培養(yǎng)溫度，PH值，個(gè)體形態(tài)的觀察方法。菌種 培養(yǎng)基 溫度 PH值 個(gè)體形態(tài)觀察細(xì)菌 肉湯培養(yǎng)基 37 7.27.4 染色后用油鏡酵母 麥芽汁

6、（或PDA，YEPD） 2530 5.36.0 水浸片高倍鏡霉菌 麥芽汁（或察氏培養(yǎng)基） 2830 6.66.7 乳酸苯酚油做 介質(zhì)制片，高倍鏡觀察 2. 簡(jiǎn)述酵母菌死亡率測(cè)定的原理。答：死亡率測(cè)定的原理：活的微生物，由于不停的新陳代謝，使細(xì)胞內(nèi)氧化還原值低，且還原能力強(qiáng)。當(dāng)某種無(wú)毒的染料進(jìn)入活細(xì)胞后，可以被還原脫色；當(dāng)染料進(jìn)入死細(xì)胞后，這些細(xì)胞因無(wú)還原能力或還原能力差而被著色。在中性和弱酸性條件下，活的細(xì)胞原生質(zhì)不能被染色劑著色，若著色則表示細(xì)胞已經(jīng)死亡，故可以此來(lái)區(qū)分活菌和死菌。方法：取0.05%美藍(lán)液一滴，置載玻片中央，然后取酵母液少許加入美藍(lán)液中混勻，染色23分鐘，加蓋片，于高倍鏡下進(jìn)

7、行觀察，并計(jì)數(shù)已變藍(lán)的細(xì)胞（可計(jì)56個(gè)視野的細(xì)胞總數(shù)）。計(jì)算公式： 3. 簡(jiǎn)述濕熱滅菌比干熱滅菌更有效的原因。答：在同一溫度下，濕熱的殺菌效力比干熱大，其原因有三：一是濕熱中細(xì)菌菌體吸收水分，蛋白質(zhì)較易凝固，因蛋白質(zhì)含水量增加，所需凝固溫度降低，二是濕熱的穿透力比干熱大；三是濕熱的蒸汽有潛熱存在，每1克水在100時(shí)，由氣態(tài)變?yōu)橐簯B(tài)時(shí)可放出226kJ（千焦）的熱量。這種潛熱，能迅速提高被滅菌物體的溫度，從而增加滅菌效力。4. 簡(jiǎn)述革蘭氏染色的原理和操作步驟。答：革蘭氏染色的機(jī)理主要是利用兩類(lèi)細(xì)菌的細(xì)胞壁成分和結(jié)構(gòu)的不同。革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁中含有較多的類(lèi)脂質(zhì)，而肽聚糖的含量較少。當(dāng)用乙醇或丙酮脫

8、色時(shí)，類(lèi)脂質(zhì)被溶解，增加了細(xì)胞壁的通透性，使初染后的結(jié)晶紫和碘的復(fù)合物易于滲出，結(jié)果細(xì)胞被脫色，經(jīng)復(fù)染后，又染上復(fù)染劑的顏色。而革蘭氏陽(yáng)性菌細(xì)胞壁中肽聚糖的含量多且交聯(lián)度度大，類(lèi)脂質(zhì)含量少，經(jīng)乙醇或丙酮洗脫后，肽聚糖的孔徑變小，通透性降低，因此細(xì)胞仍保留初染時(shí)的顏色。革蘭氏染色的一般過(guò)程主要包括制片，固定，結(jié)晶紫初染1分鐘，碘液媒染， 95%乙醇脫色30s，番紅復(fù)染30s，水洗和鏡檢等步驟。5簡(jiǎn)述細(xì)菌生理生化實(shí)驗(yàn)中石蕊牛乳實(shí)驗(yàn)中細(xì)菌對(duì)牛奶作用的情況。 答： 產(chǎn)酸：細(xì)菌發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸，使石蕊變紅。 產(chǎn)堿：細(xì)菌分解酪蛋白產(chǎn)生堿性物質(zhì)，使石蕊變藍(lán)。 胨化：細(xì)菌產(chǎn)生蛋白酶，使酪蛋白分解，故牛奶變得比較澄

9、清。 酸凝固：細(xì)菌發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸，使石蕊變紅，當(dāng)酸度很高時(shí)，可使牛奶凝固。 凝乳酶凝固：有些細(xì)菌能產(chǎn)生凝乳酶使牛奶中的酪蛋白凝固，此時(shí)石蕊呈藍(lán)色或不變色。 還原：細(xì)菌生長(zhǎng)旺盛時(shí)，使培養(yǎng)基氧化還原電位降低，因而石蕊褪色。6. 簡(jiǎn)述青霉和曲霉小室培養(yǎng)的操作過(guò)程。答：曲霉和青霉的小室培養(yǎng)接種：取一培養(yǎng)皿，內(nèi)放一層吸潤(rùn)20%甘油（可以用水代替）的濾紙，放U形玻棒。（1分）取一干燥無(wú)菌的載玻片和蓋玻片，于載玻片的一邊滴加融化的PDA（或察氏培養(yǎng)基），點(diǎn)種孢子，并將蓋玻片蓋與其上（2分）；要求中央的培養(yǎng)基直徑不大于0.5cm，蓋、載玻片間距離不高于0.1mm。（1分）然后將制好的載片放入培養(yǎng)皿中的玻棒上，蓋

10、好皿蓋，30正置培養(yǎng)?？梢栽谂囵B(yǎng)不同時(shí)間直接置干燥系物鏡下觀察（1分）。得分五、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)題（共10 分）一家飲料廠新開(kāi)發(fā)了一種新型果味飲料，以玻璃瓶包裝，產(chǎn)品出廠前需要你設(shè)計(jì)一個(gè)實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)包裝后的飲料成品中大腸菌群數(shù)是否超標(biāo)。簡(jiǎn)述測(cè)檢食品中大腸菌群的意義并設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案。1 測(cè)檢食品中大腸菌群的意義大腸菌群主要來(lái)源于人畜糞便，以此作為糞便污染指標(biāo)來(lái)評(píng)價(jià)食品的衛(wèi)生質(zhì)量，具有廣泛的衛(wèi)生學(xué)意義。2.檢樣稀釋 (1) 以無(wú)菌操作將檢樣25ml（25g）放入盛有225ml無(wú)菌生理水的三角瓶（瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠）內(nèi)，經(jīng)充分振蕩作成1:10的均勻稀釋液。用1ml無(wú)菌吸管吸取1:10稀釋液1ml，注入含有

11、9ml無(wú)菌生理鹽水的試管內(nèi)，振搖試管使管內(nèi)溶液混均，作成1:100的稀釋液。另取1ml無(wú)菌吸管，按上項(xiàng)操作依次作10倍遞增稀釋液，每遞增稀釋一次，換用1支1ml無(wú)菌吸管。根據(jù)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)Ρ粰z樣品污染情況的估計(jì)，選擇三個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度接種乳糖膽鹽發(fā)酵管3支。3.乳糖膽鹽發(fā)酵將被檢樣品接種于乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，接種量在1ml以上者，用雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管；1ml及1ml以下者，用單料乳糖膽鹽發(fā)酵管。每一稀釋度接種3管，置361培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)242h，如果所有糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣，則可報(bào)告為大腸菌群陰性，如有產(chǎn)氣者，繼續(xù)進(jìn)行檢驗(yàn)。4.分離培養(yǎng) 將產(chǎn)氣的發(fā)酵管的菌液分別劃線接種在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，置361培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)1824h，觀察菌落形態(tài)，并作革蘭氏染色和復(fù)發(fā)酵證實(shí)試驗(yàn)。5.復(fù)發(fā)酵證實(shí)試驗(yàn)在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上挑取：紫紅色、具有金屬光澤的菌落；深紅色、不帶或略帶金屬光澤的菌落；淡紅色、中