12維生素B12的吸收曲線繪制及注射液的含量測定

1、新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院分析化學(xué)實驗課教案首頁授課教師姓名及職稱:一、實驗名稱維生素b12的吸收曲線繪制及注射液的含量測定二、授課對象藥學(xué)授課形式實驗教學(xué)三、教學(xué)目標(biāo)1. 掌握分光光度計的使用方法2. 掌握注射劑含量的測定和計算方法3. 熟悉測繪吸收曲線的一般方法四、教學(xué)內(nèi)容1. 吸收曲線的繪制方法2. 應(yīng)用吸光系數(shù)法測定注射劑含量及計算方法3. 752型紫外一可見分光光度計的使用方法五、教學(xué)安排與課時分配1.講解演小40min2.學(xué)生操作教師輔導(dǎo)120minK、授課重點1. 吸收曲線的繪制方法2. 752型紫外一可見分光光度計的使用方法七、注意事項1. 752型分光光度計光源的使用2. 每次改變波長，需重

2、新調(diào)T為“0”3. Bi2應(yīng)避光八、授課方法教師示范講述，學(xué)生操作九、使用教材分析化學(xué)實驗自編教材十、教研室審查意見主任簽字年月曰新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院化學(xué)教研室實驗維生素B12的吸收曲線繪制及注射液的含量測定一、實驗?zāi)康?. 掌握分光光度計的使用方法；2. 掌握注射劑含量的測定和計算方法；3. 熟悉測繪吸收曲線的一般方法。二、實驗原理維生素B12是含Co的有機化合物，其注射液為粉紅色至紅色的澄明液體。要測定B12注射液的含量，可以用紫外一可見分光光度法測定，用此法進行含量測定，必須知道B12的Amax,扁ax可以通過繪制吸收曲線來得到。吸收曲線：將不同波長的單色光依次通過被分析的物質(zhì)，分別測得不同波長下

3、的吸光度，以波長為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)所描繪的曲線。吸光度最大時對應(yīng)的波長為入max,在Amax處測吸光度。B12在278,361,550nm處有最大吸收，在入max處測得A,根據(jù)吸光系數(shù)法可以求出注射液中B12的含量。吸光系數(shù)法：A=Ecl實驗中要求測361nm處的A,相應(yīng)的吸光系數(shù)E為207。三、儀器與試劑752型紫外一可見分光光度計，10mL容量瓶，5mL吸量管；0.1gL-1維生素Bi冰溶液，維生素B12注射液(市售品)。四、實驗步驟1. 75理分光光度計的使用(1) 開啟電源開關(guān)，使儀器預(yù)熱20分鐘。(2) 用波長選擇旋鈕設(shè)置所需的分析波長。(3) 將裝參比溶液的比色皿置于光路，

4、打開樣品室蓋，調(diào)節(jié)T旋鈕，使顯示器指針指在“0.00%”(4) 將裝參比溶液的比色皿置于光路，關(guān)閉樣品室蓋，調(diào)節(jié)A旋鈕，使顯示器指針指在“100.00%(5) 重復(fù)操作(3)和(4),直至儀器顯示穩(wěn)定。(6) 將裝參比溶液的比色皿置于光路，關(guān)閉樣品室蓋，進行測定，在顯示器上讀出Ao(7) 儀器使用完畢，關(guān)閉電源，拔下電源插頭。取出比色皿，洗凈、晾干。復(fù)原儀器，蓋上防塵罩。2. 吸收曲線的繪制將0.1g-1維生素B12溶液置于1cm比色皿中，以蒸儲水為空白溶液，在不同波長（340nm580nm之間，其中從350nm370nm和540560nm每間隔5nm測量一次，其余每間隔20nm測量一次吸光度

5、）下測量相應(yīng)的吸光度。然后以波長為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪出吸收曲線。從吸收曲線上得到最大吸收波長，從而選擇測定維生素B12的適宜波長。3. 注射液含量測定避光操作。準(zhǔn)確吸取0.50ml維生素B12注射液于10ml容量瓶中，加水定容至刻度線。然后將溶液置于1cm1%比色皿中，在361nm波長條件下以蒸儲水作為空白測定吸光度，按C63H88CON14O14P的吸收系數(shù)巳cm為207計算維生素B12標(biāo)示量的百分含量。計算公式：A1.一.-A%稀釋倍數(shù)況標(biāo)示量="V100%標(biāo)示重（g/mL）五、注意事項1.在每次測定前，首先應(yīng)做吸收池配套性試驗。即將同樣厚度的4個比色皿都裝相同溶液，在所選波長處測定各比色皿的透光率，其最大誤差？T應(yīng)不大于0.5%。2. 儀器在不測定時，應(yīng)隨時打開暗箱蓋，以保護光電管。3. 為使比色皿中測定溶液與原溶液的濃度一致，需用原溶液蕩洗比色皿23次。4. 比色皿內(nèi)所盛溶液以超過皿高的2/3為宜。過滿溶液可能溢出，使儀器受損。使用后應(yīng)立即取出比色皿，并用自來水及蒸儲水洗凈，倒立晾干。5. 比色皿一般用水蕩洗，如被有機物污染，宜用HCl-乙醇（1+2）浸泡片刻，再用水沖洗，不能用堿液或強氧化性洗液清洗。切忌用毛刷刷洗，以免損傷比色皿。6. 入v350nm時使用氫燈，入350nm時使用鴇燈。六、思考題1.單色光不純對于測得的