高中生物選修三細(xì)胞工程1

1、專題二 第二節(jié)：動物細(xì)胞工程動物細(xì)胞培養(yǎng)1、動物細(xì)胞工程常用技術(shù)手段：動物細(xì)胞培養(yǎng)、動物細(xì)胞核移植、動物細(xì)胞融合、生產(chǎn)單克隆抗體等，其中，動物細(xì)胞培養(yǎng)是其他動物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)。 2、動物細(xì)胞培養(yǎng)原理：細(xì)胞增殖3. 動物細(xì)胞培養(yǎng)過程：（1）取材：動物胚胎或出生不久的幼齡動物的組織或器官，原因是：這些細(xì)胞生命力旺盛，分裂能力強(qiáng)。（2）原代培養(yǎng)是指10代以內(nèi)的細(xì)胞，傳代培養(yǎng)指10代以后的細(xì)胞。（3）細(xì)胞的生長特點(diǎn)：貼壁生長、接觸抑制。（4）細(xì)胞株：10-50代，遺傳物質(zhì)不變；細(xì)胞系：50代以后，遺傳物質(zhì)已改變。（5）第一次胰蛋白酶作用：使組織分散成單個(gè)細(xì)胞，目的：使細(xì)胞與培養(yǎng)液充分接觸便于培養(yǎng)。第二

2、次胰蛋白酶作用：使貼壁細(xì)胞從瓶壁脫離下來。4.條件：無菌、無毒的環(huán)境：培養(yǎng)液及操作工具應(yīng)進(jìn)行無菌處理。通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素，以防培養(yǎng)過程中的污染。此外，應(yīng)定期更換培養(yǎng)液，清除代謝產(chǎn)物。營養(yǎng)：葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機(jī)鹽、微量元素等。通常需加入動物血清等天然成分。溫度：適宜溫度：哺乳動物多是36.50.5；pH：7.27.4。氣體環(huán)境：95%空氣5%CO2。O2是細(xì)胞代謝所必需的，CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH。5.應(yīng)用：(了解)制備生物制品如：病毒疫苗、干擾素、制備單克隆抗體（最主要）；檢測有毒物質(zhì)，判斷某種物質(zhì)的毒性（通常以畸變細(xì)胞占培養(yǎng)細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)作為判斷指標(biāo)）；

3、判斷病毒的種類方法：DNA分子雜交法。培養(yǎng)基因工程的受體細(xì)胞培養(yǎng)正?；虿∽兊募?xì)胞，用于生理、病理、藥理等方面的研究。6.動物細(xì)胞培養(yǎng)與植物組織培養(yǎng)比較比較項(xiàng)目原理培養(yǎng)基結(jié)果培養(yǎng)環(huán)境培養(yǎng)目的植物組織培養(yǎng)細(xì)胞全能性固體；營養(yǎng)物質(zhì)，激素可培養(yǎng)成植株離體微型繁殖，作物脫毒等動物細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞增殖液體；營養(yǎng)物質(zhì)，動物血清等培育成細(xì)胞群體內(nèi)或體外獲得細(xì)胞產(chǎn)物或細(xì)胞等動物細(xì)胞核移植：1、動物細(xì)胞不能表現(xiàn)全能性的原因：動物細(xì)胞全能性會隨著動物細(xì)胞分化程度的提高而逐漸受到限制，分化潛能逐漸變?nèi)?2.動物細(xì)胞核移植類型：分為胚胎核移植和體細(xì)胞核移植（困難但常用）兩大類3.用去核卵母細(xì)胞作為受體的原因是：體積大，易操

4、作含有促進(jìn)細(xì)胞核全能性表達(dá)所需的物質(zhì)和營養(yǎng)條件。4. 卵母細(xì)胞通常體外培養(yǎng)到減二分裂中期。5.去核的方法：顯微操作去核法（常用），梯度離心、紫外光短時(shí)間照射及化學(xué)物質(zhì)照射。6.用物理或化學(xué)方法（如電脈沖、鈣離子載體、乙醇、蛋白酶合成抑制劑等）激活受體細(xì)胞，使其完成分裂和發(fā)育進(jìn)程。7.核移植過程中用到的技術(shù)手段動物細(xì)胞培養(yǎng)和動物細(xì)胞核移植等。8.應(yīng)用：加速家畜遺傳改良進(jìn)程，促進(jìn)良畜群繁育保護(hù)瀕危物種，增大存活數(shù)量；生產(chǎn)珍貴的醫(yī)用蛋白； 作為異種移植的供體；用于組織器官的移植等。9.體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問題：成功率低克隆動物存在著健康問題食品安全問題。動物細(xì)胞融合和單克隆抗體1、動物細(xì)胞融合原理

5、：細(xì)胞膜的流動性。2、誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合的方法：物理方法（離心、振動）、化學(xué)方法（聚乙二醇）和滅活的病毒（常用）。3、動物細(xì)胞融合意義：克服了遠(yuǎn)緣雜交的不親和的障礙。4. 動物細(xì)胞融合最重要的用途是制備單克隆抗體。5.抗體：一個(gè)B淋巴細(xì)胞只能接受一種抗原刺激只能分泌一種特異性抗體。6.將抗原注入小鼠體內(nèi)的目的：讓機(jī)體產(chǎn)生免疫，獲得能產(chǎn)生特定抗體的漿細(xì)胞。7.融合后共有5種產(chǎn)物（未融合的和融合的），融合產(chǎn)物有3種。8.兩次篩選的目的：第一次篩選出雜交瘤細(xì)胞（選擇性培養(yǎng)基）;第二次篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞。9.單克隆抗體制備過程中用到的技術(shù)手段：動物細(xì)胞培養(yǎng)和動物細(xì)胞融合。原理：細(xì)胞增殖、

6、細(xì)胞膜的流動性。10.檢測抗體的方法：抗原-抗體分子雜交法。11. 雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)：既能大量繁殖，又能產(chǎn)生專一的抗體。12.單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)，靈敏度高，并能大量制備。13.單克隆抗體的應(yīng)用：作為診斷試劑（主要用途）：具有準(zhǔn)確、高效、簡易、快速的優(yōu)點(diǎn)。用于治療疾病和運(yùn)載藥物：主要用于癌癥治療，可制成“生物導(dǎo)彈” （單克隆抗體+藥物）。14.制備單克隆抗體時(shí)選用漿細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合。植物細(xì)胞工程應(yīng)用1.植物細(xì)胞工程的應(yīng)用：微型繁殖、作物脫毒、人工種子、單倍體育種、突變體的利用和細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)。全用到了組織培養(yǎng)技術(shù)。1. 制備脫毒苗取材：分生區(qū)附近（莖尖或根尖）。2. 制備人工種子需要組織培養(yǎng)獲取胚狀體。3. 單倍體育種方法：