香豆素和木脂素（課堂PPT）

1、木脂素和香豆素木脂素和香豆素第一節(jié)第一節(jié) 木脂素木脂素木脂素是一類由苯丙素雙分子聚合而成的天然成分，組成木脂素的單體有四種：桂皮酸，偶有桂皮醛。桂皮醇。丙烯苯。烯丙苯。 分類依據(jù)：按木脂素的基本碳架和縮合情況進行分類。 理化性質(zhì)理化性質(zhì)v1物理性狀物理性狀 白色結(jié)晶、不揮發(fā)。白色結(jié)晶、不揮發(fā)。v2. 溶解性溶解性 游離木脂素游離木脂素-親脂性親脂性 木脂素苷木脂素苷-水溶性增大，并易被酶或酸水解水溶性增大，并易被酶或酸水解 具酚羥基木脂素具酚羥基木脂素-可溶于堿水中。可溶于堿水中。 3.顯色反應(yīng)顯色反應(yīng)1.Labat reaction :鑒定鑒定5%沒食子酸溶液沒食子酸溶液+濃濃H2SO4，呈

2、，呈綠色綠色（+）。）。2. Emerson reaction:酚羥基對位酚羥基對位無無取代基取代基NoImage3.Gibbs reaction:判斷判斷-OH對位有無取代基。對位有無取代基。Gibbs 試劑是試劑是2，6-二氯（溴）苯醌氯亞胺，二氯（溴）苯醌氯亞胺，其在弱的堿性條件下與酚其在弱的堿性條件下與酚對位活潑氫對位活潑氫縮合成縮合成蘭色物。蘭色物。 有游離酚有游離酚-OH, 且且-OH對位對位無無取代者（取代者（+） 對位對位有有取代者（取代者（-）。）。多用來判斷多用來判斷C6C6位是否有取代基位是否有取代基存在存在。4. 異羥肟酸鐵反應(yīng)：異羥肟酸鐵反應(yīng)：堿性條件堿性條件下，內(nèi)酯

3、開環(huán)，與鹽酸羥胺中的羥基下，內(nèi)酯開環(huán)，與鹽酸羥胺中的羥基縮合生成縮合生成異羥肟酸異羥肟酸，然后在，然后在酸性條件酸性條件下與三價下與三價鐵鹽絡(luò)合而顯鐵鹽絡(luò)合而顯紅色紅色。鑒別鑒別v 理化鑒別 常用的有亞甲二氧基官能團特征性的鑒別反應(yīng)，如Labat反應(yīng)和Ecgrine反應(yīng)等。但由于該鑒別反應(yīng)的干擾因素較多，專屬性較差。v 色譜鑒別 取五味子粉末1g,加三氯甲烷20ml,加熱回流30min,濾過，濾液蒸干，殘渣加三氯甲烷1ml使溶解，作為供試品溶液。另取五味子對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液。再取五味子甲素對照品，加三氯甲烷制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。 吸取上述三種溶液各2L，分

4、別點于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚（3060）-甲酸乙酯-甲酸（15：5：1）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈（254nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。v 化學(xué)法 取本品粗粉約1g加水10ml，浸漬10min，時時振搖，濾過，濾液濃縮至23ml，加5倍量的乙醇，強烈振搖5min，濾過，濾液揮去乙醇，加水稀釋至10ml，加活性炭少量，振搖后濾過。取濾液2ml，加氫氧化鈉試液中和后，加硫酸汞試液1滴，煮沸，濾過，濾液加高錳酸鉀試液1滴，紫紅色即消失，并發(fā)生白色沉淀。 含量測定含量測定（一）變色酸比色法（一）變色酸比色法測定具有

5、亞甲二氧基的木脂素測定具有亞甲二氧基的木脂素CH3OOH3COH3COOCH3H3COCH3OCOOH五味子酯甲五味子酯甲-五味子素五味子素總木脂素總木脂素1. TLC法法 吸附劑吸附劑 硅膠硅膠G 展開劑展開劑 三氯甲烷，苯三氯甲烷，苯2. HPLC法法 填充劑填充劑 C18 流動相流動相 乙腈乙腈-水，甲醇水，甲醇-水水 檢測器檢測器 UV（二）色譜法（二）色譜法單木脂素單木脂素例例 護肝片護肝片 Ch.P.（2010） 【處方處方】柴胡，茵陳，板藍根，柴胡，茵陳，板藍根，五味子五味子，豬膽粉，綠豆，豬膽粉，綠豆 【含量測定含量測定】HPLC法法 固定相固定相 C18 流動相流動相 甲醇甲

6、醇-水（水（63:37） 檢測波長檢測波長 250nm 對照品對照品 五味子醇甲五味子醇甲 供試液供試液 乙酸乙酯加熱回流，蒸干，甲醇乙酸乙酯加熱回流，蒸干，甲醇 溶解殘渣溶解殘渣香豆素是香豆素是鄰羥桂皮酸內(nèi)酯鄰羥桂皮酸內(nèi)酯，具芳香甜味。其結(jié)構(gòu)母核為：，具芳香甜味。其結(jié)構(gòu)母核為：苯駢苯駢 -吡喃酮吡喃酮OHOOO12367845苯駢苯駢 -吡喃酮吡喃酮（Chromone)OHO第二節(jié)第二節(jié) 香豆素香豆素物理性質(zhì)：物理性質(zhì)： 為白色晶體，溶于乙醇、氯仿、乙醚，不溶于水，較為白色晶體，溶于乙醇、氯仿、乙醚，不溶于水，較易溶于熱水易溶于熱水 。顯色反應(yīng)：顯色反應(yīng)： 1.異羥肟酸鐵反應(yīng)異羥肟酸鐵反應(yīng)

7、堿性條件下，香豆素堿性條件下，香豆素內(nèi)酯內(nèi)酯可開環(huán)，可開環(huán)，與鹽酸羥肟與鹽酸羥肟縮合縮合成異羥肟酸，然后在酸性條件下與三價成異羥肟酸，然后在酸性條件下與三價鐵離子絡(luò)合呈紅色。鐵離子絡(luò)合呈紅色。 2.三氯化鐵反應(yīng)三氯化鐵反應(yīng) 含有酚羥基的香豆素可與三氯化鐵含有酚羥基的香豆素可與三氯化鐵試劑產(chǎn)生顏色反應(yīng)。試劑產(chǎn)生顏色反應(yīng)。 理化性質(zhì)理化性質(zhì)v3.Gibbs3.Gibbs反應(yīng)反應(yīng) 2 2，6-6-二氯（溴）苯醌氯亞胺，在弱二氯（溴）苯醌氯亞胺，在弱堿性條件下可與酚羥基對位的活潑氫縮合成藍色堿性條件下可與酚羥基對位的活潑氫縮合成藍色化合物?；衔?。 v4.Emerson4.Emerson反應(yīng)反應(yīng) 氨基

8、安替比林和鐵氰化鉀，可與氨基安替比林和鐵氰化鉀，可與酚羥基對位活潑氫生成紅色縮合物。酚羥基對位活潑氫生成紅色縮合物。 v3 3、4 4都要求香豆素分子中必須有游離的酚羥基，都要求香豆素分子中必須有游離的酚羥基，且酚羥基對位沒有取代基時才呈陽性反應(yīng)。且酚羥基對位沒有取代基時才呈陽性反應(yīng)。v熒光特征 香豆素類化合物多為無色或淡黃色結(jié)晶，有紫外吸收，且在紫外光下多顯藍色或紫色熒光，在堿性溶液中熒光增強。v光譜特征 未取代的香豆素在274nm和311nm處呈現(xiàn)兩個吸收峰。母核上引入取代基，其吸收峰發(fā)生相應(yīng)的位移。含酚羥基的香豆素，在堿性溶液吸收峰紅移，且吸收強度增強。鑒別鑒別v 化學(xué)反應(yīng)法 利用異羥肟

9、酸鐵反應(yīng)、三氯化鐵試劑反應(yīng)、重氮化反應(yīng)、Gibbs反應(yīng)等可對香豆素類成風(fēng)進行鑒別。v 熒光法 羥基香豆素大多能產(chǎn)生熒光，利用此性質(zhì)可進行鑒別?？芍苯佑^察提取溶液的熒光，也可觀察薄層熒光斑點。v 薄層色譜法v 白芷的薄層定性分析白芷的薄層定性分析v 取白芷粉末取白芷粉末0.5g，加乙醚，加乙醚10ml，浸泡，浸泡1h，時時振搖，濾，時時振搖，濾過，濾液揮干乙醚，殘渣加醋酸乙酯過，濾液揮干乙醚，殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作為供使溶解，作為供試品溶液。另取歐前胡素、異歐前胡素對照品，加醋酸乙試品溶液。另取歐前胡素、異歐前胡素對照品，加醋酸乙酯制成每酯制成每1ml含含1mg的混合液，作為對照品溶液。

10、的混合液，作為對照品溶液。v 吸取上述兩種溶液各吸取上述兩種溶液各4l，分別點于同一以羧甲基纖維素，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚（薄層板上，以石油醚（3060）-乙乙醚（醚（3：2）為展開劑，在）為展開劑，在25以下展開，取出，晾干，置以下展開，取出，晾干，置紫外燈（紫外燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相對應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。譜相對應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。含量測定含量測定v分光光度法 利用香豆素類成分的顯色反應(yīng)進行比色測定。 舉例：補骨脂素注射液的含量測定，可在樣品中加入重

11、氮化試劑，生成紫色偶氮染料，于580nm處測定含量。 利用香豆素類成分都具有紫外吸收，樣品較純時，也可進行分光光度法測定。 舉例：消痔液中補骨脂素的測定，檢測波長246nm。 v 說明：中藥制劑成分復(fù)雜，可先用薄層色譜分離，在紫外燈下熒光定位，找出香豆素成分，將其吸附層刮下，用適宜溶劑洗脫，再加入重氮化試劑，進行比色測定。如健腰丸中補骨脂素、異補骨脂素的測定。但應(yīng)同時進行空白試驗及凈化回收率實驗。v 熒光光度法 羥基香豆素成分大多能產(chǎn)生強烈熒光大多能產(chǎn)生強烈熒光，用熒光光度計進行熒光測定有較高的靈敏度及選擇性。當(dāng)干擾成分較多時，可先用色譜法凈化?？上扔蒙V法凈化。v 薄層掃描法 樣品經(jīng)薄層分離后，于熒光燈下定位，利用香豆素類成分利用香豆素類成分具有紫外吸收或能產(chǎn)生熒光的特性具有紫外吸收或能產(chǎn)生熒光的特性，不經(jīng)顯色，直接進行熒光掃描測定。舉例：復(fù)方制劑中補骨脂素，異補骨脂素，白瑞香素，歐前胡素等。v 氣相色譜法氣相色譜法 某些相對分子質(zhì)量小，具有揮發(fā)性某些相對分子質(zhì)量小，具有揮發(fā)性的香豆素類成分。可用氣相色譜法測定（如蛇床子素，香柑內(nèi)