HPLC固定相與流動(dòng)相

1、2022-3-191第第2章章液相色譜分析法液相色譜分析法一、一、液相色譜固定相液相色譜固定相stationary phase of HPLC二、液相色譜流動(dòng)相二、液相色譜流動(dòng)相 mobile phase of HPLC第三節(jié)第三節(jié)液相色譜的固定相與液相色譜的固定相與流動(dòng)相流動(dòng)相high performance liquid chromatographstationary phase and mobile phase of HPLC2022-3-192一、液相色譜固定相一、液相色譜固定相 stationary phases of LC 1. 1. 液液- -液分配及離子對(duì)分離固定相液分配及離子

2、對(duì)分離固定相 （1）全多孔型擔(dān)體）全多孔型擔(dān)體 由氧化硅、氧化鋁、硅藻土等制成的多孔球體；早期采用100m的大顆粒，表面涂漬固定液，性能不佳已不多見(jiàn)； 現(xiàn)采用10m以下的小顆粒，化學(xué)鍵合制備柱填料； （2）表面多孔型擔(dān)體）表面多孔型擔(dān)體 （薄殼型微珠擔(dān)體） 3040m的玻璃微球，表面附著一層厚度為1 2m的多孔硅膠。 表面積小，柱容量底；2022-3-193（3）化學(xué)鍵合固定相）化學(xué)鍵合固定相 化學(xué)鍵合固定相: 目前應(yīng)用最廣、性能最佳的固定相； a. 硅氧碳鍵型：硅氧碳鍵型： SiOC b. 硅氧硅碳鍵型：硅氧硅碳鍵型：SiOSi C 穩(wěn)定，耐水、耐光、耐有機(jī)溶劑，應(yīng)用最廣穩(wěn)定，耐水、耐光、耐

3、有機(jī)溶劑，應(yīng)用最廣； c. 硅碳鍵型：硅碳鍵型： SiC d. 硅氮鍵型：硅氮鍵型： SiN2022-3-194化學(xué)鍵合固定相的特點(diǎn)化學(xué)鍵合固定相的特點(diǎn)（1）傳質(zhì)快傳質(zhì)快，表面無(wú)深凹陷，比一般液體固定相傳質(zhì)快；（2）壽命長(zhǎng)壽命長(zhǎng)，化學(xué)鍵合，無(wú)固定液流失，耐流動(dòng)相沖擊； 耐水、耐光、耐有機(jī)溶劑，穩(wěn)定； （4）選擇性好選擇性好，可鍵合不同官能團(tuán)，提高選擇性；（5）有利于梯度洗脫；有利于梯度洗脫； 存在著存在著雙重分離機(jī)制雙重分離機(jī)制：(鍵合基團(tuán)的覆蓋率決定分離機(jī)理)高覆蓋率：分配為主；低覆蓋率：吸附為主； 2022-3-195 2. 2.液液- -固吸附分離固定相固吸附分離固定相 種類：硅膠、氧化

4、鋁、分子篩、聚酰胺等；種類：硅膠、氧化鋁、分子篩、聚酰胺等； 結(jié)構(gòu)類型：全多孔型和薄殼型；結(jié)構(gòu)類型：全多孔型和薄殼型； 粒度：粒度：510 m； 2022-3-1963.3.離子交換色譜離子交換色譜分離固定相分離固定相 結(jié)構(gòu)類別：結(jié)構(gòu)類別：（1）薄殼型離子交換樹(shù)脂）薄殼型離子交換樹(shù)脂 薄殼玻璃珠為擔(dān)體，表面涂約1%的離子交換樹(shù)脂；（2）離子交換鍵合固定相）離子交換鍵合固定相 薄殼鍵合型；微粒硅膠鍵合型（鍵合離子交換基團(tuán)） 樹(shù)脂類別：樹(shù)脂類別：（1） 陽(yáng)離子交換樹(shù)脂（強(qiáng)酸陽(yáng)離子交換樹(shù)脂（強(qiáng)酸性、弱酸性）性、弱酸性）（2） 陰離子交換樹(shù)脂（強(qiáng)堿陰離子交換樹(shù)脂（強(qiáng)堿性、弱堿性）性、弱堿性）2022-

5、3-197 4. 4. 空間排阻分離固定相空間排阻分離固定相（1）軟質(zhì)凝膠）軟質(zhì)凝膠 葡聚糖凝膠、瓊脂凝膠等。多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)； 水為流動(dòng)相。適用于常壓排阻分離。（2）半硬質(zhì)凝膠）半硬質(zhì)凝膠 苯乙烯-二乙烯基苯交聯(lián)共聚物，有機(jī)凝膠； 非極性有機(jī)溶劑為流動(dòng)相，不能用丙酮、乙醇等極性溶劑（3）硬質(zhì)凝膠）硬質(zhì)凝膠 多孔硅膠、多孔玻珠等； 化學(xué)穩(wěn)定性、熱穩(wěn)定性好、機(jī)械強(qiáng)度大，流動(dòng)相性質(zhì)影響小，可在較高流速下使用。 可控孔徑玻璃微球，具有恒定孔徑和窄粒度分布。2022-3-198二、液相色譜的流動(dòng)相二、液相色譜的流動(dòng)相 mobile phases of LC 1. 1. 流動(dòng)相特性流動(dòng)相特性 （1）液相色譜

6、的流動(dòng)相又稱為：淋洗液，洗脫劑。流動(dòng)相組成改變，極性改變，可顯著改變組分分離狀況； （2）親水性固定液常采用疏水性流動(dòng)相，即流動(dòng)相的極性小于固定相的極性，稱為正相液液色譜法，極性柱也稱正相柱。 （3）若流動(dòng)相的極性大于固定液的極性，則稱為反相液液色譜，非極性柱也稱為反相柱。組分在兩種類型分離柱上的出峰順序相反。 2022-3-1992. 2. 流動(dòng)相類別流動(dòng)相類別 按流動(dòng)相組成分按流動(dòng)相組成分：?jiǎn)谓M分和多組分； 按極性分按極性分：極性、弱極性、非極性； 按使用方式分按使用方式分：固定組成淋洗和梯度淋洗。 常用溶劑常用溶劑： 己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、乙腈、水和甲醇。 采用二元或多元

7、組合溶劑作為流動(dòng)相可以靈活調(diào)節(jié)流動(dòng)相的極性或增加選擇性，以改進(jìn)分離或調(diào)整出峰時(shí)間。2022-3-19103. 3. 流動(dòng)相選擇流動(dòng)相選擇 在選擇溶劑時(shí)，溶劑的極性是選擇的重要依據(jù)。在選擇溶劑時(shí)，溶劑的極性是選擇的重要依據(jù)。 采用正相液-液分配分離時(shí)：首先選擇中等極性溶劑，若組分的保留時(shí)間太短，降低溶劑極性，反之增加。 也可在低極性溶劑中，逐漸增加其中的極性溶劑，使保留時(shí)間縮短。 常用溶劑的極性順序常用溶劑的極性順序： 水(最大) 甲酰胺 乙腈 甲醇 乙醇 丙醇 丙酮 二氧六環(huán) 四氫呋喃 甲乙酮 正丁醇 乙酸乙酯 乙醚 異丙醚 二氯甲烷氯仿溴乙烷苯四氯化碳二硫化碳環(huán)己烷己烷煤油(最小)2022-

8、3-19114. 4. 選擇流動(dòng)相時(shí)應(yīng)注意的幾個(gè)問(wèn)題選擇流動(dòng)相時(shí)應(yīng)注意的幾個(gè)問(wèn)題（1）盡量使用高純度試劑作流動(dòng)相，防止微量雜質(zhì)長(zhǎng)期累積損壞色譜柱和使檢測(cè)器噪聲增加。（2）避免流動(dòng)相與固定相發(fā)生作用而使柱效下降或損壞柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶劑破壞氧化鋁固定相等。（3）試樣在流動(dòng)相中應(yīng)有適宜的溶解度，防止產(chǎn)生沉淀并在柱中沉積。（4）流動(dòng)相同時(shí)還應(yīng)滿足檢測(cè)器的要求。當(dāng)使用紫外檢測(cè)器時(shí)，流動(dòng)相不應(yīng)有紫外吸收。2022-3-1912請(qǐng)選擇內(nèi)容請(qǐng)選擇內(nèi)容第一節(jié)第一節(jié) 高效液相色譜的特點(diǎn)與儀器高效液相色譜的特點(diǎn)與儀器feature and instrument of HPLC第二節(jié)第二節(jié) 基本原理與主要分離類型基本原理與主要分離類型basic principle and main separating types第三節(jié)第三節(jié) 固定相與流動(dòng)相固定相與流動(dòng)相stationary phase and mobile phase 第四節(jié)第四節(jié) 影響分離的因素與操作條件選擇影響分離的因素與操作條件選擇factors influenced s