實驗七石蠟切片法2

1、實驗八實驗八 石蠟切片法石蠟切片法 染色、封藏染色、封藏p切片通過不同方法，使其干燥，然后進行染色。因為每切片通過不同方法，使其干燥，然后進行染色。因為每一張載片上粘貼的是蠟帶，因此必須先用一張載片上粘貼的是蠟帶，因此必須先用二甲苯二甲苯去除石去除石蠟再用蠟再用酒精酒精去除二甲苯，再進入水中，才能染色，染色去除二甲苯，再進入水中，才能染色，染色的方法很多，要根據(jù)每張標(biāo)本要求顯示的目的選擇不同的方法很多，要根據(jù)每張標(biāo)本要求顯示的目的選擇不同的染劑，染色后顯示清晰的細胞形態(tài)和核的大小，位置，的染劑，染色后顯示清晰的細胞形態(tài)和核的大小，位置，然后使帶水的載片經(jīng)歷脫水然后使帶水的載片經(jīng)歷脫水透明等步驟

2、最后用樹膠封透明等步驟最后用樹膠封片。片。實驗原理實驗原理染色原理染色原理物理作用物理作用o滲透作用滲透作用：染料滲透到多孔的組織中，與組織沒有牢固的結(jié)合；染料滲透到多孔的組織中，與組織沒有牢固的結(jié)合；o吸收作用吸收作用：又稱溶解學(xué)說，組織吸收染料中的色素粒子，與之牢又稱溶解學(xué)說，組織吸收染料中的色素粒子，與之牢固結(jié)合，組織著色與染液的顏色相同，不一定與干燥染料的顏色固結(jié)合，組織著色與染液的顏色相同，不一定與干燥染料的顏色相同。如品紅在干燥時為綠色，而其溶液呈紅色，組織在染色后相同。如品紅在干燥時為綠色，而其溶液呈紅色，組織在染色后也呈紅色，即使組織干燥后，其紅顏色不變；也呈紅色，即使組織干燥

3、后，其紅顏色不變；o吸附作用吸附作用：染液中分散的色素粒子進入被染物質(zhì)的粒子間隙內(nèi)，染液中分散的色素粒子進入被染物質(zhì)的粒子間隙內(nèi)，由于分子的引力作用，色素粒子被吸附而染色，也由于各種蛋白由于分子的引力作用，色素粒子被吸附而染色，也由于各種蛋白質(zhì)或膠體有不同的吸附面，因此可以吸附不同的粒子，也就是說質(zhì)或膠體有不同的吸附面，因此可以吸附不同的粒子，也就是說對粒子的吸附有選擇性，即有的容易被某些物質(zhì)吸附，有的則不對粒子的吸附有選擇性，即有的容易被某些物質(zhì)吸附，有的則不容易吸附。容易吸附。染色原理染色原理化學(xué)作用化學(xué)作用o化學(xué)作用的主要理論根據(jù)是染色劑的性質(zhì)可分為酸性、堿性和中化學(xué)作用的主要理論根據(jù)是

4、染色劑的性質(zhì)可分為酸性、堿性和中性染色劑，而動、植物的細胞內(nèi)性染色劑，而動、植物的細胞內(nèi)般也可區(qū)分為酸性般也可區(qū)分為酸性( (陰離子陰離子) )和堿性和堿性( (陽離子陽離子) )部分。當(dāng)堿性染色劑溶液中的有色部分成為陽部分。當(dāng)堿性染色劑溶液中的有色部分成為陽離子時，就能與細胞的陰離子離子時，就能與細胞的陰離子( (酸件部分酸件部分) )較牢固地結(jié)合，當(dāng)酸較牢固地結(jié)合，當(dāng)酸性染色劑溶液中的有色部分成為陰離子時，就能與細胞內(nèi)的陽離性染色劑溶液中的有色部分成為陰離子時，就能與細胞內(nèi)的陽離子子( (堿性部分堿性部分) )較牢固地結(jié)合。較牢固地結(jié)合。o例如，細胞核，尤其是核內(nèi)的染色質(zhì)，主要由核酸組成，

5、是酸性例如，細胞核，尤其是核內(nèi)的染色質(zhì)，主要由核酸組成，是酸性的組成成分故和堿性染色劑的組成成分故和堿性染色劑( (蘇木精蘇木精) )的親和力很強，易于著的親和力很強，易于著色。細胞質(zhì)含堿性物質(zhì)，故和酸性染色劑色。細胞質(zhì)含堿性物質(zhì)，故和酸性染色劑( (伊紅、曙紅伊紅、曙紅) )的親和的親和力很大，易于著色。力很大，易于著色。常用染色劑分類常用染色劑分類 o按按染料的化學(xué)性質(zhì)染料的化學(xué)性質(zhì)可分為可分為 ：堿性染料：堿性染料 、酸性染料、酸性染料 、直接染料、直接染料 、媒染、媒染染料染料 、中性染料；、中性染料； o根據(jù)根據(jù)染料的來源染料的來源可分為：可分為：天然染料天然染料（此類染色劑是從動、

6、植物體中提取（此類染色劑是從動、植物體中提取的，為天然產(chǎn)物，產(chǎn)量少。目前常用的有蘇木精、洋紅、地衣紅和靛藍的，為天然產(chǎn)物，產(chǎn)量少。目前常用的有蘇木精、洋紅、地衣紅和靛藍等）和等）和合成染料合成染料（全是由芳香環(huán)或具有芳香性的雜環(huán)化合物所構(gòu)成。最（全是由芳香環(huán)或具有芳香性的雜環(huán)化合物所構(gòu)成。最早是由煤焦油蒸餾產(chǎn)物合成而得的，所以又稱為煤焦油染料）。早是由煤焦油蒸餾產(chǎn)物合成而得的，所以又稱為煤焦油染料）。o根據(jù)根據(jù)染料的用途染料的用途可分為：可分為：細胞核染色劑細胞核染色劑（用于細胞核的染色劑有天然染（用于細胞核的染色劑有天然染色劑的蘇木精、洋紅以及合成染色劑中的番紅、結(jié)品紫、硫堇、甲苯胺色劑的蘇

7、木精、洋紅以及合成染色劑中的番紅、結(jié)品紫、硫堇、甲苯胺藍、甲基綠、美藍、孔雀綠和焦油紫等）、藍、甲基綠、美藍、孔雀綠和焦油紫等）、細胞質(zhì)染色劑細胞質(zhì)染色劑（用于細胞質(zhì)（用于細胞質(zhì)的染色劑有合成染色劑中的曙紅、亮綠、橘黃的染色劑有合成染色劑中的曙紅、亮綠、橘黃G G、酸性品紅、苦味酸和、酸性品紅、苦味酸和水溶性苯胺藍等）和水溶性苯胺藍等）和脂質(zhì)染色劑脂質(zhì)染色劑（用于顯示脂質(zhì)的染色劑有合成染色劑（用于顯示脂質(zhì)的染色劑有合成染色劑中的蘇丹中的蘇丹IIIIII、蘇丹、蘇丹IvIv、硫酸尼羅藍及油紅等）。、硫酸尼羅藍及油紅等）。 一、實驗?zāi)康囊?、實驗?zāi)康膐 掌握動植物材料石蠟切片的方法及要求；掌握動植物

8、材料石蠟切片的方法及要求；o 學(xué)習(xí)和掌握番紅學(xué)習(xí)和掌握番紅- -固綠及蘇木精固綠及蘇木精- -伊紅雙重染伊紅雙重染色方法。色方法。二、實驗材料及用品二、實驗材料及用品o 實驗材料實驗材料：上周已切和貼好的植物葉片、小鼠：上周已切和貼好的植物葉片、小鼠肝臟的切片肝臟的切片o 實驗用具實驗用具：蓋玻片、染色缸、鑷子、顯微鏡。：蓋玻片、染色缸、鑷子、顯微鏡。o 實驗藥品實驗藥品：梯度酒精、：梯度酒精、 二甲苯二甲苯+ + 100%100%酒酒精精 、二甲苯、蘇木精染色液、二甲苯、蘇木精染色液、1%1%伊紅水溶液、伊紅水溶液、1%1%番紅水溶液、番紅水溶液、1%1%固綠固綠95%95%酒精溶液、加拿大

9、樹酒精溶液、加拿大樹膠。膠。三、實驗步驟（三、實驗步驟（1） 番紅番紅-固綠固綠二甲苯二甲苯二甲苯二甲苯二甲苯二甲苯+ 100%酒精酒精100%AL95%AL80%AL70%AL50%AL蒸餾水蒸餾水1%番紅水溶液番紅水溶液水洗水洗50%80%70%95%1%固綠固綠95%酒精溶液酒精溶液95%100%二甲苯二甲苯+ 100%酒精酒精二甲苯二甲苯樹膠封藏樹膠封藏脫蠟脫蠟復(fù)水復(fù)水染色染色脫水脫水對染對染脫水脫水透明透明封藏封藏10min10min5min5min5min5min5min5min5min10min10min10min10min10-60s洗一下洗一下5min5min5min1.5-

10、2h三、實驗步驟（三、實驗步驟（2） 蘇木精蘇木精-伊紅（伊紅（HE）二甲苯二甲苯二甲苯二甲苯二甲苯二甲苯+ 100%AL100%AL95%AL80%AL70%AL50%AL蒸餾水蒸餾水蘇木精染色液蘇木精染色液水洗水洗氨水中氨水中“藍藍化化”1%伊紅水溶液伊紅水溶液蒸餾水漂洗蒸餾水漂洗70%AL80%AL95%AL100%AL二甲苯二甲苯+ 100%AL二甲苯二甲苯樹膠封藏樹膠封藏脫蠟脫蠟復(fù)水復(fù)水染色染色對染對染脫水脫水透明透明封藏封藏10min10min5min5min5min5min5min5min5min3-4s5min，換幾次，換幾次3min過一下過一下5min5min5min5min

11、5min20min5min，換幾次，換幾次染色時注意的幾個問題染色時注意的幾個問題o 應(yīng)根據(jù)材料的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、觀察目的來選擇染色方法應(yīng)根據(jù)材料的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、觀察目的來選擇染色方法 ；o 材料從溶液中取出放入染色液時，此兩種溶液的濃度必材料從溶液中取出放入染色液時，此兩種溶液的濃度必須相同須相同 ；o 作二重染色時，應(yīng)先染堿性染作二重染色時，應(yīng)先染堿性染 料，后染酸性染料；料，后染酸性染料；o 染色寧可深一點，不要淺一點染色寧可深一點，不要淺一點 ；o 作分色用的酸、堿溶液必須徹底洗凈；作分色用的酸、堿溶液必須徹底洗凈； o 制成的片子不要置于陽光下，以免褪色。制成的片子不要置于陽光下，以免褪色

12、。封片注意事項封片注意事項o 切片透明后封藏前材料上要保持二甲苯不揮發(fā)，如已干，切片透明后封藏前材料上要保持二甲苯不揮發(fā)，如已干，則可再滴加少許二甲苯；則可再滴加少許二甲苯；o 封片時萬一樹膠量過少，可在蓋玻片有空隙的地方，再封片時萬一樹膠量過少，可在蓋玻片有空隙的地方，再滴注少量樹膠使其慢慢布滿蓋玻片。滴注少量樹膠使其慢慢布滿蓋玻片。四、實驗結(jié)果四、實驗結(jié)果o一張符合要求的切片應(yīng)該是：平整、透明、染色足夠，顏色鮮艷一張符合要求的切片應(yīng)該是：平整、透明、染色足夠，顏色鮮艷且分明、封片時沒有氣泡、樹膠不外溢、鏡檢時細胞結(jié)構(gòu)清晰。且分明、封片時沒有氣泡、樹膠不外溢、鏡檢時細胞結(jié)構(gòu)清晰。o蘇木精蘇木精- -伊紅（簡稱伊紅（簡稱 HE HE ）染色中：蘇木精使細胞核顯深紫）染色中：蘇木精使細胞核顯深紫色，伊紅使細胞質(zhì)顯粉紅色；色，伊紅使細胞質(zhì)顯粉紅色；o番紅番紅- -固綠染色中：番紅可將木質(zhì)化細胞壁紅色，角質(zhì)化細胞固綠染色中：番紅可將木質(zhì)化細胞壁紅色，角質(zhì)化細胞壁粉紅色，栓化細胞壁黃褐色，染