第21章 臨床生化檢驗方法及試劑盒評價

1、第1頁第二十一章第二十一章臨床生化檢驗方法與試劑盒評價臨床生化檢驗方法與試劑盒評價第二十一章第二十一章 臨床生化檢驗方法與試劑盒評價臨床生化檢驗方法與試劑盒評價第2頁教學(xué)目標(biāo)與要求教學(xué)目標(biāo)與要求 掌握掌握校準(zhǔn)品的分類和正確使用；測定系統(tǒng)的校準(zhǔn)品的分類和正確使用；測定系統(tǒng)的概念和比對；試劑盒的性能指標(biāo)和評價概念和比對；試劑盒的性能指標(biāo)和評價方法。方法。 熟悉熟悉方法學(xué)性能指標(biāo)和評價；量值溯源和量方法學(xué)性能指標(biāo)和評價；量值溯源和量值傳遞的概念；液體雙試劑的優(yōu)點。值傳遞的概念；液體雙試劑的優(yōu)點。 了解了解試劑盒的分類和發(fā)展趨勢。試劑盒的分類和發(fā)展趨勢。第二十一章第二十一章 臨床生化檢驗方法與試劑盒評

2、價臨床生化檢驗方法與試劑盒評價第3頁第3頁第3頁 臨床生化檢驗方法的性能評價臨床生化檢驗方法的性能評價 臨床生化檢驗試劑盒的性能評價臨床生化檢驗試劑盒的性能評價 臨床生化檢驗方法分級和標(biāo)準(zhǔn)品臨床生化檢驗方法分級和標(biāo)準(zhǔn)品 主要內(nèi)容主要內(nèi)容第二十一章第二十一章 臨床生化檢驗方法與試劑盒評價臨床生化檢驗方法與試劑盒評價第4頁臨床生化檢驗方法分級臨床生化檢驗方法分級 一一 二二 三三第一節(jié)第一節(jié) 臨床生化檢驗方法分級和標(biāo)準(zhǔn)品臨床生化檢驗方法分級和標(biāo)準(zhǔn)品 臨床生化檢驗的參考物質(zhì)和校準(zhǔn)品臨床生化檢驗的參考物質(zhì)和校準(zhǔn)品 量值溯源量值溯源檢測系統(tǒng)的比對檢測系統(tǒng)的比對 四四第二十一章第二十一章 臨床生化檢驗方法

3、與試劑盒評價臨床生化檢驗方法與試劑盒評價第5頁 是指準(zhǔn)確度最高，系統(tǒng)誤差最小，經(jīng)過詳是指準(zhǔn)確度最高，系統(tǒng)誤差最小，經(jīng)過詳細(xì)的研究，沒有發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生誤差的原因或在某些細(xì)的研究，沒有發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生誤差的原因或在某些方面不夠明確的方法。方面不夠明確的方法。決定性方法決定性方法參考方法參考方法 是指準(zhǔn)確度與精密度已經(jīng)充分證實的分是指準(zhǔn)確度與精密度已經(jīng)充分證實的分析方法，干擾因素少，系統(tǒng)誤差與重復(fù)測定的析方法，干擾因素少，系統(tǒng)誤差與重復(fù)測定的隨機(jī)誤差相比可以忽略不計，有適當(dāng)?shù)撵`敏度、隨機(jī)誤差相比可以忽略不計，有適當(dāng)?shù)撵`敏度、特異性及較寬的分析范圍。特異性及較寬的分析范圍。常規(guī)方法常規(guī)方法 是指性能指標(biāo)符合臨床或其

4、他目的是指性能指標(biāo)符合臨床或其他目的需要，有足夠的精密度、準(zhǔn)確度、特異性和需要，有足夠的精密度、準(zhǔn)確度、特異性和適當(dāng)?shù)姆治龇秶?，而且?jīng)濟(jì)實用。適當(dāng)?shù)姆治龇秶?，而且?jīng)濟(jì)實用。 一一臨床生化檢驗方法分級臨床生化檢驗方法分級第二十一章第二十一章 臨床生化檢驗方法與試劑盒評價臨床生化檢驗方法與試劑盒評價第6頁決定性方法（決定性方法（definitive method）也稱為一級參）也稱為一級參考方法（考方法（primary reference method)參考方法（參考方法（reference method）也稱為二級參考）也稱為二級參考方法（方法（secondary reference metho

5、d）常規(guī)方法（常規(guī)方法（routine method）；推薦方法）；推薦方法（recommended method） 第二十一章第二十一章 臨床生化檢驗方法與試劑盒評價臨床生化檢驗方法與試劑盒評價第7頁表表21-1 21-1 臨床生化檢驗項目的決定性方法、參考方法、常規(guī)方法臨床生化檢驗項目的決定性方法、參考方法、常規(guī)方法 項目項目決定性方法決定性方法 參考方法參考方法 常規(guī)方法常規(guī)方法鈣ID-MS原子吸收分光光度法鄰甲酚酞絡(luò)合酮法、MTB法氯ID-MS、中子活化法電流滴定法硫氰酸汞法、選擇性電極法鎂ID-MS原子吸收分光光度法MTB 法鉀ID-MS、中子活化法火焰光度法離子選擇電極法、火焰光度

6、法鈉中子活化法火焰光度法離子選擇電極法、火焰光度法清蛋白-免疫化學(xué)法溴甲酚綠法總蛋白-凱氏定氮法雙縮脲法肌肝ID-MS離子交換層析法苦味酸法、酶法尿素ID-MS尿素酶法二乙酰一肟法、酶法尿酸ID-MS尿酸酶法（紫外）磷鎢酸比色法膽紅素-重氮反應(yīng)法J-G 法、釩酸鹽氧化法葡萄糖ID-MS已糖激酶法葡萄糖氧化酶法膽固醇ID-MSAbell-Kendall 法酶法甘酒三脂ID-MS變色酸顯色法酶法第二十一章第二十一章 臨床生化檢驗方法與試劑盒評價臨床生化檢驗方法與試劑盒評價第8頁 （primary reference materials）也稱一級標(biāo)準(zhǔn)品，）也稱一級標(biāo)準(zhǔn)品，與決定性方法平行，用于驗證決

7、定性方法、評價與與決定性方法平行，用于驗證決定性方法、評價與校準(zhǔn)參考方法，以及為二級標(biāo)準(zhǔn)品定值。校準(zhǔn)參考方法，以及為二級標(biāo)準(zhǔn)品定值。 原級參考物質(zhì)原級參考物質(zhì)次級參考物質(zhì)次級參考物質(zhì) （secondary reference materialssecondary reference materials）也稱二）也稱二級標(biāo)準(zhǔn)品級標(biāo)準(zhǔn)品 ，二級標(biāo)準(zhǔn)品的定值源于一級標(biāo)準(zhǔn)，二級標(biāo)準(zhǔn)品的定值源于一級標(biāo)準(zhǔn)品和參考方法，主要用于評價常規(guī)方法，也可品和參考方法，主要用于評價常規(guī)方法，也可為質(zhì)控物定值。為質(zhì)控物定值。 常規(guī)校準(zhǔn)品常規(guī)校準(zhǔn)品 校準(zhǔn)（校準(zhǔn)（calibration）指的是對由儀器、方法和試）指的是對由

8、儀器、方法和試劑所組成的檢測系統(tǒng)的校準(zhǔn)過程。劑所組成的檢測系統(tǒng)的校準(zhǔn)過程。電解質(zhì)、酶類、其他生化指標(biāo)應(yīng)合理選擇校準(zhǔn)品電解質(zhì)、酶類、其他生化指標(biāo)應(yīng)合理選擇校準(zhǔn)品二二臨床生化檢驗的參考物質(zhì)和校準(zhǔn)臨床生化檢驗的參考物質(zhì)和校準(zhǔn)品品 第二十一章第二十一章 臨床生化檢驗方法與試劑盒評價臨床生化檢驗方法與試劑盒評價第9頁標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)品校準(zhǔn)品校準(zhǔn)品質(zhì)控品質(zhì)控品一一級標(biāo)準(zhǔn)品用高純化學(xué)物質(zhì)（純度級標(biāo)準(zhǔn)品用高純化學(xué)物質(zhì)（純度99.98%99.98%）直接通過稱重）直接通過稱重配制的溶液，是唯一值。一般由國家標(biāo)準(zhǔn)計量局出具證書。配制的溶液，是唯一值。一般由國家標(biāo)準(zhǔn)計量局出具證書。二級標(biāo)準(zhǔn)品某種成分的濃度可用公認(rèn)的參考方

9、法測定。由參二級標(biāo)準(zhǔn)品某種成分的濃度可用公認(rèn)的參考方法測定。由參考實驗室或權(quán)威學(xué)術(shù)組織出具證書，如考實驗室或權(quán)威學(xué)術(shù)組織出具證書，如SRMSRM、BCRBCR、IFCCIFCC。標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)品(standard）可用做校準(zhǔn)品（）可用做校準(zhǔn)品（calibrater），考慮），考慮血清成分復(fù)雜、難以避免基質(zhì)效應(yīng)血清成分復(fù)雜、難以避免基質(zhì)效應(yīng) ，建議用與新鮮血清，建議用與新鮮血清相似的介質(zhì)做校準(zhǔn)品，一般由試劑盒供應(yīng)商提供和賦值。相似的介質(zhì)做校準(zhǔn)品，一般由試劑盒供應(yīng)商提供和賦值。校準(zhǔn)品的量值應(yīng)有溯源性，不同測定系統(tǒng)賦值不同。校準(zhǔn)品的量值應(yīng)有溯源性，不同測定系統(tǒng)賦值不同。質(zhì)控品多是成分相對穩(wěn)定的混合血清，

10、分為定值和非定值、凍質(zhì)控品多是成分相對穩(wěn)定的混合血清，分為定值和非定值、凍干或液體，添加了防腐劑和保護(hù)劑等。定值往往由試劑盒供應(yīng)干或液體，添加了防腐劑和保護(hù)劑等。定值往往由試劑盒供應(yīng)商委托幾家實驗室在特定測定系統(tǒng)上測得的均值和標(biāo)準(zhǔn)差。商委托幾家實驗室在特定測定系統(tǒng)上測得的均值和標(biāo)準(zhǔn)差。第二十一章第二十一章 臨床生化檢驗方法與試劑盒評價臨床生化檢驗方法與試劑盒評價第10頁標(biāo)準(zhǔn)品與校準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)品與校準(zhǔn)品大多數(shù)定量的方法（分光光度法、電化學(xué)、免疫定量）大多數(shù)定量的方法（分光光度法、電化學(xué)、免疫定量）都需要用都需要用標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)品校準(zhǔn)校準(zhǔn)，即通過，即通過標(biāo)準(zhǔn)比較標(biāo)準(zhǔn)比較來計算。校準(zhǔn)來計算。校準(zhǔn)是這些方法定

11、量必經(jīng)的過程。是這些方法定量必經(jīng)的過程。用什么用什么“標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)”來校準(zhǔn)？來校準(zhǔn)？羅氏公司的羅氏公司的C.f.a.sC.f.a.s （calibrator for automation calibrator for automation systemsystem），屬于多項校準(zhǔn)品，因使用方便，很多實驗室都在，屬于多項校準(zhǔn)品，因使用方便，很多實驗室都在使用。但前提是使用。但前提是“指定的測定系統(tǒng)指定的測定系統(tǒng)”。第二十一章第二十一章 臨床生化檢驗方法與試劑盒評價臨床生化檢驗方法與試劑盒評價第11頁圖圖21-1 各級參考物質(zhì)和校準(zhǔn)品的關(guān)系及其量值傳遞過程各級參考物質(zhì)和校準(zhǔn)品的關(guān)系及其量值傳遞過程第二

12、十一章第二十一章 臨床生化檢驗方法與試劑盒評價臨床生化檢驗方法與試劑盒評價第12頁三三量值溯源量值溯源溯源性溯源性(traceability）是指通過一條具有規(guī)定是指通過一條具有規(guī)定不確不確定度（定度（uncertainty）的不間斷的比較鏈，使測量的不間斷的比較鏈，使測量結(jié)果或測量標(biāo)準(zhǔn)的值能夠與規(guī)定的參考標(biāo)準(zhǔn)（通結(jié)果或測量標(biāo)準(zhǔn)的值能夠與規(guī)定的參考標(biāo)準(zhǔn)（通常是國家或國際測量標(biāo)準(zhǔn)）聯(lián)系起來的特性，稱常是國家或國際測量標(biāo)準(zhǔn)）聯(lián)系起來的特性，稱為溯源性。其不間斷的比較鏈稱為溯源鏈。為溯源性。其不間斷的比較鏈稱為溯源鏈。溯源性溯源性第二十一章第二十一章 臨床生化檢驗方法與試劑盒評價臨床生化檢驗方法與試

13、劑盒評價第13頁測量不確定度測量不確定度測量不確定度是指表征合理地賦予被測之值的測量不確定度是指表征合理地賦予被測之值的分散性。是與測量結(jié)果相聯(lián)系的參數(shù)，可理解分散性。是與測量結(jié)果相聯(lián)系的參數(shù)，可理解為排除系統(tǒng)誤差之外的所有隨機(jī)誤差的合成方為排除系統(tǒng)誤差之外的所有隨機(jī)誤差的合成方差。差。第二十一章第二十一章 臨床生化檢驗方法與試劑盒評價臨床生化檢驗方法與試劑盒評價第14頁圖圖21-2 量值溯源和量值傳遞途徑量值溯源和量值傳遞途徑第二十一章第二十一章 臨床生化檢驗方法與試劑盒評價臨床生化檢驗方法與試劑盒評價第15頁四四檢測系統(tǒng)的比對檢測系統(tǒng)的比對完成一個項目檢驗所涉及的儀器、試劑、校準(zhǔn)品、完成一

14、個項目檢驗所涉及的儀器、試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、操作程序、質(zhì)量控制、保養(yǎng)計劃等的組質(zhì)控品、操作程序、質(zhì)量控制、保養(yǎng)計劃等的組合稱為合稱為檢測系統(tǒng)（檢測系統(tǒng)（testing system）。常規(guī)檢測。常規(guī)檢測系統(tǒng)有配套檢測系統(tǒng)和自建檢測系統(tǒng)。系統(tǒng)有配套檢測系統(tǒng)和自建檢測系統(tǒng)。（一）檢測系統(tǒng)的概念（一）檢測系統(tǒng)的概念第二十一章第二十一章 臨床生化檢驗方法與試劑盒評價臨床生化檢驗方法與試劑盒評價第16頁 （二）檢測系統(tǒng)的分類（二）檢測系統(tǒng)的分類整個檢測系統(tǒng)涉及的各個部分完全按照指定廠商要求配整個檢測系統(tǒng)涉及的各個部分完全按照指定廠商要求配套使用。若該系統(tǒng)已經(jīng)國家法定部門認(rèn)證套使用。若該系統(tǒng)已經(jīng)國家法定

15、部門認(rèn)證,則使用這樣則使用這樣的檢測系統(tǒng)對臨床樣品進(jìn)行檢驗，其結(jié)果具溯源性的檢測系統(tǒng)對臨床樣品進(jìn)行檢驗，其結(jié)果具溯源性。實驗室自行建立的檢測系統(tǒng)，如實驗室自行建立的檢測系統(tǒng)，如A制造商的試劑盒、制造商的試劑盒、B制造商的校準(zhǔn)品、制造商的校準(zhǔn)品、C制造商分析儀的組合。制造商分析儀的組合。第二十一章第二十一章 臨床生化檢驗方法與試劑盒評價臨床生化檢驗方法與試劑盒評價第17頁制訂分析質(zhì)量目標(biāo)制訂分析質(zhì)量目標(biāo) 儀器性能評價儀器性能評價 確定對比檢測系統(tǒng)確定對比檢測系統(tǒng) 內(nèi)容內(nèi)容初步評價檢測系統(tǒng)初步評價檢測系統(tǒng)比對比對允許不精密度、允許偏倚和允許不精密度、允許偏倚和允許總誤差允許總誤差 準(zhǔn)確度和精密度準(zhǔn)

16、確度和精密度 參考系統(tǒng)或參考系統(tǒng)或公認(rèn)的測定系統(tǒng)公認(rèn)的測定系統(tǒng)性能指標(biāo)40-100例（二）檢測系統(tǒng)比對的實施步驟（二）檢測系統(tǒng)比對的實施步驟可接受性判斷可接受性判斷步驟步驟第18頁測定系統(tǒng)測定系統(tǒng)方法學(xué)方法學(xué)操作程序操作程序校準(zhǔn)品校準(zhǔn)品儀器儀器試劑配方試劑配方和來源和來源測定系統(tǒng)的關(guān)鍵要素測定系統(tǒng)的關(guān)鍵要素第二十一章第二十一章 臨床生化檢驗方法與試劑盒評價臨床生化檢驗方法與試劑盒評價第19頁第19頁 統(tǒng)一方法：以方法學(xué)評價為基礎(chǔ)，提出參考方法或統(tǒng)一方法：以方法學(xué)評價為基礎(chǔ)，提出參考方法或推薦方法。統(tǒng)一試劑的主要成分和測定條件。實施推薦方法。統(tǒng)一試劑的主要成分和測定條件。實施機(jī)構(gòu)：國際臨床化學(xué)學(xué)

17、會、臨檢中心機(jī)構(gòu)：國際臨床化學(xué)學(xué)會、臨檢中心逐級溯源：常規(guī)校準(zhǔn)品應(yīng)向二級標(biāo)準(zhǔn)品、一級標(biāo)準(zhǔn)逐級溯源：常規(guī)校準(zhǔn)品應(yīng)向二級標(biāo)準(zhǔn)品、一級標(biāo)準(zhǔn)溯源溯源。實施機(jī)構(gòu)：。實施機(jī)構(gòu)：ISOISO、國家標(biāo)準(zhǔn)計量局、參考實驗、國家標(biāo)準(zhǔn)計量局、參考實驗室、試劑盒供應(yīng)商、臨床實驗室室、試劑盒供應(yīng)商、臨床實驗室全球性可比性戰(zhàn)略實施全球性可比性戰(zhàn)略實施3 3保證儀器良好的工作狀態(tài)、嚴(yán)格的操作規(guī)程和質(zhì)量控保證儀器良好的工作狀態(tài)、嚴(yán)格的操作規(guī)程和質(zhì)量控制、實驗室內(nèi)部測定系統(tǒng)的比對、實驗室間的比對制、實驗室內(nèi)部測定系統(tǒng)的比對、實驗室間的比對第二十一章第二十一章 臨床生化檢驗方法與試劑盒評價臨床生化檢驗方法與試劑盒評價第20頁方法

18、學(xué)的性能指標(biāo)方法學(xué)的性能指標(biāo) 一一 二二 三三第二節(jié)第二節(jié) 臨床生化檢驗方法的性能評價臨床生化檢驗方法的性能評價 方法學(xué)性能評價的內(nèi)容方法學(xué)性能評價的內(nèi)容 方法學(xué)評價試驗方法學(xué)評價試驗 臨床生物化學(xué)方法學(xué)性能判斷臨床生物化學(xué)方法學(xué)性能判斷 四四第二十一章第二十一章 臨床生化檢驗方法與試劑盒評價臨床生化檢驗方法與試劑盒評價第21頁 一一 方法學(xué)性能指標(biāo)方法學(xué)性能指標(biāo)準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度精密度精密度方便性方便性 經(jīng)濟(jì)性經(jīng)濟(jì)性安全性安全性 簡單快速簡單快速可測范圍可測范圍第二十一章第二十一章 臨床生化檢驗方法與試劑盒評價臨床生化檢驗方法與試劑盒評價第22頁 準(zhǔn)確度（準(zhǔn)確度（accuracy）的傳統(tǒng)定義是指測

19、定值）的傳統(tǒng)定義是指測定值與與“真值真值”的接近程度。是指一次測定的結(jié)果的接近程度。是指一次測定的結(jié)果與被測物真值的接近程度。與被測物真值的接近程度。 準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度正確度正確度 “正確度正確度”（trueness），是指一系列測定結(jié)，是指一系列測定結(jié)果得到的均值與果得到的均值與“真值真值”的接近程度。通常以的接近程度。通常以偏倚（偏倚（bias）來表示來表示 精密度精密度 精密度（精密度（precision）是指在規(guī)定條件下，相互獨）是指在規(guī)定條件下，相互獨立的檢測結(jié)果間的一致程度。不精密度立的檢測結(jié)果間的一致程度。不精密度（imprecision）通常用標(biāo)準(zhǔn)差（）通常用標(biāo)準(zhǔn)差（S）和變異系數(shù)

20、和變異系數(shù)（CV%）來表示）來表示 第二十一章第二十一章 臨床生化檢驗方法與試劑盒評價臨床生化檢驗方法與試劑盒評價第23頁表表21-3 21-3 臨床生化檢驗方法的誤差及評價方法臨床生化檢驗方法的誤差及評價方法系統(tǒng)誤差系統(tǒng)誤差誤差分類誤差分類評價試驗評價試驗評價指標(biāo)評價指標(biāo)理想結(jié)果理想結(jié)果比例系統(tǒng)誤差回收試驗回收率95-105%恒定系統(tǒng)誤差干擾試驗干擾值接近0比例系統(tǒng)誤差方法對比試驗Y=a+bXb接近1.0恒定系統(tǒng)誤差a接近0隨機(jī)誤差隨機(jī)誤差重復(fù)性試驗（批內(nèi)、批間、日間）、總不精密度CV3%二二 方法學(xué)性能評價內(nèi)容方法學(xué)性能評價內(nèi)容第二十一章第二十一章 臨床生化檢驗方法與試劑盒評價臨床生化檢驗

21、方法與試劑盒評價第24頁回收試驗回收試驗 干擾試驗干擾試驗 線性試驗線性試驗 重復(fù)性試驗重復(fù)性試驗對比試驗對比試驗檢測限與檢測范圍檢測限與檢測范圍批內(nèi)批內(nèi)批間批間 日內(nèi)日內(nèi)日間總不精密度三三 方法學(xué)評價實驗方法學(xué)評價實驗準(zhǔn)確度第二十一章第二十一章 臨床生化檢驗方法與試劑盒評價臨床生化檢驗方法與試劑盒評價第25頁（一）重復(fù)性試驗（一）重復(fù)性試驗1.1.試驗樣品試驗樣品 一般選擇一般選擇2 2個，一個在參考區(qū)間附近，另一個為異常值個，一個在參考區(qū)間附近，另一個為異常值2.2.初步的批內(nèi)精密度評價：即一個樣品重復(fù)測定初步的批內(nèi)精密度評價：即一個樣品重復(fù)測定2020次，計算出均值，次，計算出均值，標(biāo)準(zhǔn)

22、差和變異系數(shù)。標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)。 用用2 2個樣品每天測定個樣品每天測定2 2批，批間測定間隔不得少于批，批間測定間隔不得少于2h2h，每批平行測定，每批平行測定2 2份，至少共測定份，至少共測定2020天，天，8080個數(shù)據(jù)。每對結(jié)果間的差（共個數(shù)據(jù)。每對結(jié)果間的差（共4040個）代表批個）代表批內(nèi)差；內(nèi)差；2 2批均值之間的差（共批均值之間的差（共2020個）代表批間差；每天個）代表批間差；每天4 4個結(jié)果的均值個結(jié)果的均值（共（共2020個）代表日間差。每批測定至少做一個質(zhì)控。個）代表日間差。每批測定至少做一個質(zhì)控。 第二十一章第二十一章 臨床生化檢驗方法與試劑盒評價臨床生化檢驗方法與試

23、劑盒評價第26頁（二）回收試驗（二）回收試驗 所謂回收即評定方法正確測定加入常規(guī)樣品中的所謂回收即評定方法正確測定加入常規(guī)樣品中的純分析物的能力。即在未知濃度的常規(guī)樣品中加入一純分析物的能力。即在未知濃度的常規(guī)樣品中加入一定量的待測組分，檢測加入前后該組分的增加量，實定量的待測組分，檢測加入前后該組分的增加量，實際增加量與理論加入量的比值就是回收率。目的是測際增加量與理論加入量的比值就是回收率。目的是測定比例系統(tǒng)誤差定比例系統(tǒng)誤差 。 第二十一章第二十一章 臨床生化檢驗方法與試劑盒評價臨床生化檢驗方法與試劑盒評價第27頁（三）干擾試驗（三）干擾試驗干擾是指在測定某分析物時，受其他非分析物的影響

24、而導(dǎo)致測干擾是指在測定某分析物時，受其他非分析物的影響而導(dǎo)致測定結(jié)果增高（正干擾）或降低（負(fù)干擾）。根據(jù)干擾的產(chǎn)生原定結(jié)果增高（正干擾）或降低（負(fù)干擾）。根據(jù)干擾的產(chǎn)生原因分為：基質(zhì)效應(yīng)、非特異反應(yīng)、外部干擾物等。因分為：基質(zhì)效應(yīng)、非特異反應(yīng)、外部干擾物等。干擾試驗的設(shè)計同回收試驗，即將不同濃度的干擾物代替純標(biāo)干擾試驗的設(shè)計同回收試驗，即將不同濃度的干擾物代替純標(biāo)準(zhǔn)品。一般規(guī)定只對膽紅素、血紅蛋白、脂類做干擾試驗。準(zhǔn)品。一般規(guī)定只對膽紅素、血紅蛋白、脂類做干擾試驗。干擾值加入干擾物后的測定值基礎(chǔ)測定值干擾值加入干擾物后的測定值基礎(chǔ)測定值 第二十一章第二十一章 臨床生化檢驗方法與試劑盒評價臨床生

25、化檢驗方法與試劑盒評價第28頁（四）線性試驗（四）線性試驗線性試驗用來評價劑量和反應(yīng)之間的線性關(guān)系，并把呈直線性試驗用來評價劑量和反應(yīng)之間的線性關(guān)系，并把呈直線部分確定為線性范圍（線部分確定為線性范圍（linear range）。線性范圍指檢）。線性范圍指檢測信號與被測物濃度呈線性時的被測物濃度范圍。測信號與被測物濃度呈線性時的被測物濃度范圍。 1.樣品濃度樣品濃度 線性評價至少應(yīng)有線性評價至少應(yīng)有5個不同濃度，可選擇低值個不同濃度，可選擇低值和高值樣品各一份，低值樣品和高值樣品分別按體積和高值樣品各一份，低值樣品和高值樣品分別按體積3：1混勻、等份混勻、混勻、等份混勻、1:3 混勻，形成混勻

26、，形成5個不同濃度。個不同濃度。2.試驗方法試驗方法 將不同濃度的樣品（將不同濃度的樣品（X），隨機(jī)排列，每個樣），隨機(jī)排列，每個樣品重復(fù)測定品重復(fù)測定4次（次（Y），并要求在當(dāng)天完成所有分析。），并要求在當(dāng)天完成所有分析。 第二十一章第二十一章 臨床生化檢驗方法與試劑盒評價臨床生化檢驗方法與試劑盒評價第29頁（五）對比試驗（五）對比試驗對比試驗是指分別用兩種方法測定一組臨床不同濃度和病對比試驗是指分別用兩種方法測定一組臨床不同濃度和病理情況的樣品，測定結(jié)果進(jìn)行回歸分析。理情況的樣品，測定結(jié)果進(jìn)行回歸分析。比較方法應(yīng)選擇參考方法比較方法應(yīng)選擇參考方法或或公認(rèn)的常規(guī)方法，測定偏差主公認(rèn)的常規(guī)方法

27、，測定偏差主要要來源于評價方法。來源于評價方法。1.試驗樣品試驗樣品 應(yīng)收集新鮮的正常和異常的臨床樣品，應(yīng)有足夠應(yīng)收集新鮮的正常和異常的臨床樣品，應(yīng)有足夠?qū)挼臐舛确秶?，各濃度樣品?shù)量應(yīng)有合適的比例。寬的濃度范圍，各濃度樣品數(shù)量應(yīng)有合適的比例。2樣品測定樣品測定 樣品數(shù)至少為樣品數(shù)至少為40個，每個樣品用個，每個樣品用2種方法分別作種方法分別作雙份測定。每天測定雙份測定。每天測定8個樣品，雙份測定時第一次按順序個樣品，雙份測定時第一次按順序1，27，8，第二次，第二次8，72，1，共測試，共測試5天。天。 第二十一章第二十一章 臨床生化檢驗方法與試劑盒評價臨床生化檢驗方法與試劑盒評價第30頁（六

28、）檢測限（六）檢測限檢測低限通常是指能與適當(dāng)?shù)臋z測低限通常是指能與適當(dāng)?shù)摹翱瞻卓瞻住弊x數(shù)相區(qū)別的待測物的最小量。讀數(shù)相區(qū)別的待測物的最小量。方法是做空白平行試驗（一般方法是做空白平行試驗（一般20次），以蒸餾水調(diào)零，讀取各次吸次），以蒸餾水調(diào)零，讀取各次吸光度，計算均值（光度，計算均值（Ab）和標(biāo)準(zhǔn)差）和標(biāo)準(zhǔn)差(S)。以。以Ab+3S表示與表示與“空白空白”讀數(shù)讀數(shù)相區(qū)別的最小吸光度，將其換算成濃度，作為該法的檢測低限。相區(qū)別的最小吸光度，將其換算成濃度，作為該法的檢測低限。 臨床實驗室以生物檢測限更為重要，需采用接近檢測臨床實驗室以生物檢測限更為重要，需采用接近檢測低限的生物檢測限樣品來確定

29、，能更真實地反映實際低限的生物檢測限樣品來確定，能更真實地反映實際檢測限水平樣品測定的不確定度。檢測限水平樣品測定的不確定度。 第二十一章第二十一章 臨床生化檢驗方法與試劑盒評價臨床生化檢驗方法與試劑盒評價第31頁系統(tǒng)誤差系統(tǒng)誤差誤差分類誤差分類評價試驗評價試驗評價指標(biāo)評價指標(biāo)理想結(jié)果理想結(jié)果比例系統(tǒng)誤差比例系統(tǒng)誤差回收試驗回收試驗EaEa1/21/2TEaTEa恒定系統(tǒng)誤差恒定系統(tǒng)誤差干擾試驗干擾試驗干擾值干擾值1/21/2TEaTEa比例系統(tǒng)誤差比例系統(tǒng)誤差方法對比試驗方法對比試驗Y=a+bXY=a+bXXc-Yc Xc-Yc 1/21/2TEaTEa隨機(jī)誤差隨機(jī)誤差重復(fù)性試驗重復(fù)性試驗（

30、批內(nèi)、批間、日（批內(nèi)、批間、日間）、總不精密度間）、總不精密度總隨機(jī)誤差總隨機(jī)誤差1/31/3TEa TEa 四四 方法學(xué)性能判斷方法學(xué)性能判斷第二十一章第二十一章 臨床生化檢驗方法與試劑盒評價臨床生化檢驗方法與試劑盒評價第32頁臨床生化試劑盒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)臨床生化試劑盒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 一一 二二 三三第三節(jié)第三節(jié) 臨床生化檢驗試劑盒的性能評價臨床生化檢驗試劑盒的性能評價 臨床生化檢驗試劑盒的分類臨床生化檢驗試劑盒的分類 臨床生化試劑盒的性能指標(biāo)及評價臨床生化試劑盒的性能指標(biāo)及評價 臨床生化試劑盒的發(fā)展趨勢臨床生化試劑盒的發(fā)展趨勢 四四第二十一章第二十一章 臨床生化檢驗方法與試劑盒評價臨床生化檢驗方法

31、與試劑盒評價第33頁體外診斷試劑體外診斷試劑體外診斷試劑（體外診斷試劑（in vitro diagnosis regengts）用于完成一用于完成一個特定體外診斷檢驗，而包裝在一起的一組組分。試劑盒組個特定體外診斷檢驗，而包裝在一起的一組組分。試劑盒組分可包括抗體、酶、緩沖液、稀釋液、校準(zhǔn)物、控制物或其分可包括抗體、酶、緩沖液、稀釋液、校準(zhǔn)物、控制物或其它物品和材料。它物品和材料。 醫(yī)療器械醫(yī)療器械是指：單獨或者組合使用于人體的儀器、是指：單獨或者組合使用于人體的儀器、設(shè)備、器具、材料或者其他物品。其使用目的是：設(shè)備、器具、材料或者其他物品。其使用目的是： 疾病的預(yù)防、診斷、治療、監(jiān)護(hù)。疾病的

32、預(yù)防、診斷、治療、監(jiān)護(hù)。第二十一章第二十一章 臨床生化檢驗方法與試劑盒評價臨床生化檢驗方法與試劑盒評價第34頁 一一 臨床生化試劑盒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)臨床生化試劑盒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)臨床化學(xué)體外診斷試劑（盒）通臨床化學(xué)體外診斷試劑（盒）通用技術(shù)要求用技術(shù)要求2006臨床化學(xué)體外診斷試劑臨床化學(xué)體外診斷試劑(盒盒)產(chǎn)品技術(shù)審評規(guī)范產(chǎn)品技術(shù)審評規(guī)范2011第二十一章第二十一章 臨床生化檢驗方法與試劑盒評價臨床生化檢驗方法與試劑盒評價第35頁 單液體型單液體型 二二 臨床生化試劑盒的分類臨床生化試劑盒的分類單液體型特別適用于半自動生化分析儀和單液體型特別適用于半自動生化分析儀和小型自動生化分析儀。小型自動生化分析儀

33、。穩(wěn)定性較差穩(wěn)定性較差1.穩(wěn)定性能好穩(wěn)定性能好 2.可消除樣品自身空白可消除樣品自身空白 3.提高抗干擾能力提高抗干擾能力 4預(yù)反應(yīng)預(yù)反應(yīng)多項同測組合試劑多項同測組合試劑 濃縮試劑濃縮試劑 第二十一章第二十一章 臨床生化檢驗方法與試劑盒評價臨床生化檢驗方法與試劑盒評價第36頁1.試劑空白吸光度試劑空白吸光度 2.試劑空白變化速率試劑空白變化速率 3.分析靈敏度分析靈敏度4.線性范圍線性范圍5.重復(fù)性重復(fù)性7.穩(wěn)定性穩(wěn)定性 8.臨床試驗臨床試驗 三三 試劑盒性能指標(biāo)和評價試劑盒性能指標(biāo)和評價試劑盒試劑盒6.準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度第二十一章第二十一章 臨床生化檢驗方法與試劑盒評價臨床生化檢驗方法與試劑盒評價

34、第37頁（一）試劑空白吸光度（一）試劑空白吸光度用蒸餾水做空白，用指定的空白液加入試劑作為樣品測試，在測用蒸餾水做空白，用指定的空白液加入試劑作為樣品測試，在測試主波長下，記錄測試啟動時的吸光度（試主波長下，記錄測試啟動時的吸光度（A1）和約）和約5分鐘后的吸分鐘后的吸光度（光度（A2），），A2測試結(jié)果即為試劑空白吸光度測定值。測試結(jié)果即為試劑空白吸光度測定值。 是判定試劑質(zhì)量的一個有效指標(biāo)是判定試劑質(zhì)量的一個有效指標(biāo)1.雙縮脲法測定總蛋白雙縮脲法測定總蛋白 2.BCG法測定清蛋白法測定清蛋白3.改良賴氏法測定改良賴氏法測定ALT 4.NADH底物底物 5.色素原底物色素原底物 第二十一章第

35、二十一章 臨床生化檢驗方法與試劑盒評價臨床生化檢驗方法與試劑盒評價第38頁（二）試劑空白變化速率（二）試劑空白變化速率對于速率法試劑盒，用指定的空白液加入試劑作為樣品測試時，對于速率法試劑盒，用指定的空白液加入試劑作為樣品測試時，在測試主波長下，記錄測試啟動時的吸光度（在測試主波長下，記錄測試啟動時的吸光度（A1）和約）和約5分鐘分鐘(T)后的吸光度（后的吸光度（A2），計算試劑空白吸光度變化率（），計算試劑空白吸光度變化率（ A/min）。）。測定試劑空白吸光度變化（測定試劑空白吸光度變化（A/min），用來檢查試劑在工作狀），用來檢查試劑在工作狀態(tài)下的穩(wěn)定性。但事實上，試劑空白吸光度變化速

36、率無法反映態(tài)下的穩(wěn)定性。但事實上，試劑空白吸光度變化速率無法反映試劑盒的穩(wěn)定性，試劑空白吸光度變化速率主要反映干擾程度試劑盒的穩(wěn)定性，試劑空白吸光度變化速率主要反映干擾程度和儀器的穩(wěn)定性。和儀器的穩(wěn)定性。 第二十一章第二十一章 臨床生化檢驗方法與試劑盒評價臨床生化檢驗方法與試劑盒評價第39頁（三）分析靈敏度（三）分析靈敏度用吸光度差值（用吸光度差值（A）或吸光度變化（）或吸光度變化（A/min）來表示）來表示單位濃度的被測物反應(yīng)所引起的信號變化，其含義類似單位濃度的被測物反應(yīng)所引起的信號變化，其含義類似摩爾消光系數(shù)。摩爾消光系數(shù)。 分析靈敏度不是越高越好，以適合待測物檢測范圍為原則。分析靈敏度

37、不是越高越好，以適合待測物檢測范圍為原則。分析靈敏度一般用于批間比較，較能反映制造商的配方、分析靈敏度一般用于批間比較，較能反映制造商的配方、原料的一致性。原料的一致性。 第二十一章第二十一章 臨床生化檢驗方法與試劑盒評價臨床生化檢驗方法與試劑盒評價第40頁（四）線性范圍（四）線性范圍取高濃度樣品和低濃度樣品按不同比例取高濃度樣品和低濃度樣品按不同比例混合成混合成5個濃度做線性試驗。個濃度做線性試驗。 試劑（盒）的線性范圍越寬，臨床復(fù)測幾率試劑（盒）的線性范圍越寬，臨床復(fù)測幾率越小，但與樣品越小，但與樣品/試劑比例成反比試劑比例成反比 第二十一章第二十一章 臨床生化檢驗方法與試劑盒評價臨床生化

38、檢驗方法與試劑盒評價第41頁（五）重復(fù)性（五）重復(fù)性1.批內(nèi)重復(fù)性批內(nèi)重復(fù)性 在重復(fù)性條件下，用高、中、低三個水平在重復(fù)性條件下，用高、中、低三個水平濃度（高、低濃度應(yīng)超過參考區(qū)間濃度（高、低濃度應(yīng)超過參考區(qū)間20%30%，中濃度水，中濃度水平在參考區(qū)間之內(nèi)）的控制血清或新鮮人血清測試試劑，平在參考區(qū)間之內(nèi)）的控制血清或新鮮人血清測試試劑，重復(fù)測試至少重復(fù)測試至少10次。次。2.批間重復(fù)性批間重復(fù)性 用質(zhì)量控制血清測試用質(zhì)量控制血清測試33（3個批號，每個個批號，每個批號取批號取3瓶）批間差，較能反映制造商的配方、原料的一瓶）批間差，較能反映制造商的配方、原料的一致性。干粉或凍干試劑還需測定批

39、內(nèi)瓶間差，測定同一批致性。干粉或凍干試劑還需測定批內(nèi)瓶間差，測定同一批號的試劑號的試劑20瓶，用變異系數(shù)（瓶，用變異系數(shù)（CV）來表示。）來表示。 第二十一章第二十一章 臨床生化檢驗方法與試劑盒評價臨床生化檢驗方法與試劑盒評價第42頁（六）準(zhǔn)確度（六）準(zhǔn)確度1.相對偏差相對偏差 直接用試劑盒測定參考物質(zhì)（平行直接用試劑盒測定參考物質(zhì)（平行3次），評價次），評價測定均值與靶值的偏離程度。也可用由參考方法定值的高、測定均值與靶值的偏離程度。也可用由參考方法定值的高、中、低三個濃度的人混合血清，用試劑盒平行測定中、低三個濃度的人混合血清，用試劑盒平行測定3次，計次，計算均值與定值的相對偏差。算均值與定值的相對偏差。 2.比對試驗比對試驗 既無參考物質(zhì)、參考血清，也無標(biāo)準(zhǔn)品，也既無參考物質(zhì)、參考血清，也無標(biāo)準(zhǔn)品，也可用比對試驗來驗證準(zhǔn)確度。可用比對試驗來驗證準(zhǔn)確度。 第二十一章第二十一章 臨床生化檢驗方法與試劑盒評價臨床生化檢驗方法與試劑盒評價第43頁（七）穩(wěn)定性（七）穩(wěn)定性1.效期穩(wěn)定性效期穩(wěn)定性 取已到效期的試劑盒按以上評價方法對試取已到效期的試劑盒按以上評價方法對試劑盒性能指標(biāo)進(jìn)行評價?？勺鳛閷徟囊罁?jù)，但對該批次劑盒性能指標(biāo)進(jìn)行評價。可作為審批的依據(jù)，但對該批次的試劑盒的穩(wěn)定性意義不大。的試劑盒的穩(wěn)定性意義不大。2