基因工程考試模擬試題

1、基因工程試題一、選擇題（每題1分，共15分）1 限制性核酸內(nèi)切酶是由細(xì)菌產(chǎn)生的，其生理意義是【 】A 修復(fù)自身的遺傳缺陷B 促進(jìn)自身的基因重組C 強(qiáng)化自身的核酸代謝D 提高自身的防御能力2生物工程的上游技術(shù)是【 】A 基因工程及分離工程B 基因工程及發(fā)酵工程C 基因工程及細(xì)胞工程D 基因工程及蛋白質(zhì)工程3 基因工程操作的三大基本元件是:(I 供體 II 受體 III 載體 IV 抗體 V 配體)【 】A. I + II + III B. I + III + IV C. II + III + IV D. II + IV + V4 多聚接頭（ Polylinker ）指的是 【 】A. 含有多種限

2、制性內(nèi)切酶識(shí)別及切割順序的人工 DNA 片段B. 含有多種復(fù)制起始區(qū)的人工 DNA 片段C. 含有多種 SD 順序的人工 DNA 片段D. 含有多種啟動(dòng)基因的人工 DNA 片段5下列五個(gè) DNA 片段中含有回文結(jié)構(gòu)的是【 】A. GAAACTGCTTTGAC B. GAAACTGGAAACTGC. GAAACTGGTCAAAG D. GAAACTGCAGTTTC6 若將含有 5' 末端 4 堿基突出的外源 DNA 片段插入到含有 3' 末端 4 堿基突出的載體質(zhì)粒上，又必須保證連接區(qū)域的堿基對(duì)數(shù)目既不增加也不減少，則需用的工具酶是 【 】 I T 4 -DNA 聚合酶 II K

3、lenow III T 4 -DNA 連接酶 IV 堿性磷酸單酯酶A. III B. I + III C. II + III D. I + II + III7下列有關(guān)連接反應(yīng)的敘述，錯(cuò)誤的是【 】A. 連接反應(yīng)的最佳溫度為 37 B. 連接反應(yīng)緩沖體系的甘油濃度應(yīng)低于 10%C. 連接反應(yīng)緩沖體系的 ATP 濃度不能高于 1mMD. 連接酶通常應(yīng)過量 2-5 倍8 T 4 -DNA 連接酶是通過形成磷酸二酯鍵將兩段 DNA 片段連接在一起，其底物的關(guān)鍵基團(tuán)是【 】A. 2' -OH 和 5' PB. 2' -OH 和 3' -PC. 3' -OH 和 5

4、' PD. 5' -OH 和 3' -P9 載體的功能是(I 運(yùn)送外源基因高效進(jìn)入受體細(xì)胞 II 為外源基因提供復(fù)制能力 III 為外源基因提供整合能力) 【 】A. IB. I + IIIC. II + IIID. I + II + III10 克隆菌擴(kuò)增的目的是 (I 增殖外源基因拷貝 II 表達(dá)標(biāo)記基因 III 表達(dá)外源基因)【 】A. I + IIB. I + IIIC. II + IIID. I + II + III11 下列各組用于外源基因表達(dá)的受體細(xì)胞及其特點(diǎn)的對(duì)應(yīng)關(guān)系中，錯(cuò)誤的是 【 】A. 大腸桿菌繁殖迅速B. 枯草桿菌分泌機(jī)制健全C. 鏈霉菌遺傳穩(wěn)定

5、D. 酵母菌表達(dá)產(chǎn)物具有真核性12考斯質(zhì)粒（cosmid）是一種 【 】A. 天然質(zhì)粒載體B. 由 -DNA 的 cos 區(qū)與一質(zhì)粒重組而成的載體C. 具有溶原性質(zhì)的載體D. 能在受體細(xì)胞內(nèi)復(fù)制并包裝的載體13 某一重組 DNA （ 6.2 kb ） 的載體部分有兩個(gè) SmaI 酶切位點(diǎn)。用 SmaI 酶切后凝膠電泳上出現(xiàn)四條長(zhǎng)度不同的帶子，其長(zhǎng)度總和與已知數(shù)據(jù)吻合，該重組分子插入片段上的 SmaI 酶切位點(diǎn)共有 【 】A.4 個(gè)B. 3 個(gè)C. 2 個(gè)D. 至少 2 個(gè)14 外源基因在大腸桿菌中以融合蛋白的形式表達(dá)的優(yōu)點(diǎn)是 (I 融合基因能穩(wěn)定擴(kuò)增 II 融合蛋白能抗蛋白酶的降解 III 表

6、達(dá)產(chǎn)物易于親和層析分離 )【 】A.IIIB. I + IIC. I + IIID. II + III15提高重組率的方法包括 (I 加大外源 DNA 與載體的分子之比 II 載體分子除磷 III 連接酶過量 IV 延長(zhǎng)連接反應(yīng)時(shí)間)【 】A. I + IIB. I + II + IIIC. I + III + IVD. II + III + IV二、名詞解釋（每題2分，共20分）1、Southern blotting:2、Cosmid vector:3、cDNA library:4、RACE:5、Probe:6、RT-PCR7、Insert inactivation:8、S-D Sequen

7、ce:9、Shuttle plasmid vector:10、MCS:三、簡(jiǎn)答題（每題5分，共25分）1、什么是包涵體？2、什么是-互補(bǔ)篩選？3、限制性核酸內(nèi)切酶的活性受哪些因素影響？4、核酸操作的基本技術(shù)有哪些？5、基因工程誕生的理論基礎(chǔ)是什么？四、問答題（每題10分，共40分）1如何有效地提高外源基因的表達(dá)效率？2細(xì)菌的限制與修飾系統(tǒng)有什么意義？大腸桿菌K12限制與修飾系統(tǒng)的遺傳分析揭示的4種表型是什么？3試述5RACE技術(shù)原理和方法4大腸桿菌作為基因工程受體菌的優(yōu)缺點(diǎn)是什么？基因工程試題標(biāo)準(zhǔn)答案及評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)一、選擇題（每題1分，共15分）1、D 2、D 3、A 4、A 5、D 6、D 7、

8、A 8、D 9、D 10、D 11、C 12、B 13、D 14、D 15、A 二、名詞解釋（每題2分，共20分）1、限制修飾系統(tǒng)：限制修飾系統(tǒng)是大多數(shù)細(xì)菌體內(nèi)存在的類似動(dòng)物免疫系統(tǒng)的同限制性內(nèi)切酶和甲基化酶組成的保護(hù)系統(tǒng)。即通限制性內(nèi)切酶破壞噬菌體的DNA而導(dǎo)致噬菌體的寄主范圍受到限制，同時(shí)通過甲基化酶的作用，將細(xì)菌自身的DNA甲基化，使DNA得以修飾，從而免遭自身限制性酶的破壞。2、質(zhì)粒不親和性：在沒有選擇壓力的情況下，兩種不同質(zhì)粒不能夠在同一宿主細(xì)胞系中穩(wěn)定地共存的現(xiàn)象。3、cDNA文庫(kù)：是指某生物某一發(fā)育時(shí)期所轉(zhuǎn)錄形成的cDNA片段與某種載體連接而成的克隆的集合。4、RACE：是一種通

9、過PCR進(jìn)行cDNA末端快速克隆的技術(shù)，是以mRNA為模板反轉(zhuǎn)錄成cDNA第一鏈后用PCR技術(shù)擴(kuò)增出某個(gè)特異位點(diǎn)到3，或5，端之間未知序列的方法。5、T-A clonging: 又名PCR克隆。TaqDNA聚合酶具末端轉(zhuǎn)移酶活性，故用TaqDNA聚合酶進(jìn)行PCR反應(yīng)，反應(yīng)產(chǎn)物在其3末端往往習(xí)慣性的帶上一個(gè)腺嘌呤粘性末端（-A）,從而難以將該產(chǎn)物以平末端連接的方式直接克隆到載體上；針對(duì)PCR產(chǎn)物的這一特點(diǎn)，將普通的質(zhì)粒載體在其多克隆位點(diǎn)上用一種限制性內(nèi)切酶處理，獲得線形的平末端載體，再在該載體的基礎(chǔ)上用末端轉(zhuǎn)移酶給其3末端加上一個(gè)胸腺嘧啶粘性末端（-T），由此獲得的新型載體稱之為T載體；用T載體

10、的3 T與含PCR產(chǎn)物的3A進(jìn)行配對(duì)，而將PCR產(chǎn)物以粘末端連接的方式直接高效的克隆到T載體上的過程稱之為T-A cloning。6、RT-PCR:先用逆轉(zhuǎn)錄酶作用于mRNA，以寡聚dT為引物合成cDNA第一鏈，然后用已知一對(duì)引物，擴(kuò)增嵌合分子，這種方法稱為逆轉(zhuǎn)錄PCR7、Insert inaction:即插入失活，基因工程載體上的某些選擇標(biāo)記基因常常含某種或某幾種限制性內(nèi)切酶的單一酶切位點(diǎn)，在該位點(diǎn)用相應(yīng)的限制性內(nèi)切酶處理，并將外源DNA片段插入該位點(diǎn)，則插入的外源DNA片段將破壞原有基因的讀碼框，往往導(dǎo)致原有的選擇標(biāo)記基因無(wú)法翻譯表達(dá)，或即使翻譯表達(dá)，形成的也是喪失了原有生物活性的蛋白質(zhì)，

11、這一現(xiàn)象稱為插入失活。8、S-D序列：在大腸桿菌mRNA的核糖體結(jié)合位點(diǎn)上，含有一個(gè)轉(zhuǎn)譯起始密碼子及同16S核糖體RNA 3，末端堿基互補(bǔ)的序列，該序列最初由Shine 、Dalgarno發(fā)現(xiàn)，故后來(lái)命名為ShineDalgarno 序列，簡(jiǎn)稱S-D序列。9、穿梭質(zhì)粒載體：指一類由人工構(gòu)建的具有兩種不同復(fù)制起點(diǎn)的選擇標(biāo)記，因而可在兩種不同宿主細(xì)胞中存活和復(fù)制的質(zhì)粒載體。10、MCS：指載體上人工合成的含有緊密排列的多種限制核酸內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)的DNA片段。三、簡(jiǎn)答題（共25分，每題5分）1、什么是包涵體？重組蛋白在胞內(nèi)表達(dá)時(shí)，常常以不溶性蛋白聚集成的晶狀物形式存在，這種晶狀體即包涵體。包涵體的

12、形成是外源蛋白的高效表達(dá)時(shí)的普遍現(xiàn)象，這是由于肽鏈折疊過程中部分折疊的中間態(tài)發(fā)生了錯(cuò)誤聚合，而不是形成成熟的天然態(tài)或完全解鏈的蛋白。2、什么是-互補(bǔ)篩選？質(zhì)粒載體具有-半乳糖苷酶基因（lacZ），當(dāng)外源DNA插入到它的lacZ，可造成表達(dá)后的-半乳糖苷酶失活，利用這一點(diǎn)就可以通過大腸桿菌轉(zhuǎn)化子菌落在添加有X-gal-IPTG培養(yǎng)基中的顏色變化鑒別出重組子和非重組子。有些大腸桿菌上帶有l(wèi)acZ基因的部分編碼序列，質(zhì)粒載體中含有別一部分編碼序列，當(dāng)質(zhì)粒轉(zhuǎn)入載體后，可形成具有酶活性的蛋白質(zhì)。這種lacZ基因上缺失了一部分編碼序列的突變體與帶有這一部分編碼序列的突變體之間實(shí)現(xiàn)互補(bǔ)的現(xiàn)象叫互補(bǔ)。3、限制

13、性核酸內(nèi)切酶的活性受哪些因素影響？酶的純度。DNA樣品的純度。DNA的甲基化程度。酶切反應(yīng)的溫度與時(shí)間。DNA分子的構(gòu)型。限制性核酸內(nèi)切酶的反應(yīng)緩沖液。4、核酸操作的基本技術(shù)有哪些？核酸提取與純化核酸的檢測(cè)與保存核酸的凝膠電泳核酸分子雜交5、基因工程誕生的理論基礎(chǔ)是什么？是現(xiàn)代分子生物學(xué)領(lǐng)域理論上的三大發(fā)現(xiàn)和技術(shù)上的三大發(fā)明。理論上的三大發(fā)現(xiàn)：證實(shí)了DNA是遺傳物質(zhì)揭示了DNA分子的雙螺旋結(jié)構(gòu)模型和半保留復(fù)制機(jī)理遺傳密碼的破譯和遺傳信息傳遞方式的確定技術(shù)上的三大發(fā)明：限制核酸內(nèi)切酶的發(fā)現(xiàn)與DNA切割DNA連接酶的發(fā)現(xiàn)與DNA片段的連接基因工程載體的研究與應(yīng)用四、問答題（每題10分，共40分）1

14、如何有效地提高外源基因的表達(dá)效率？提高啟動(dòng)子強(qiáng)度 縮短啟動(dòng)子同克隆基因間距離 高效的翻譯起始序列 高效的轉(zhuǎn)錄終止區(qū) 提高質(zhì)粒拷貝數(shù)及穩(wěn)定性 用以下方法提高翻譯水平：調(diào)整SD序列與AUG間的距離用點(diǎn)突變的方法改變某些堿基增加mRNA的穩(wěn)定性的 減輕細(xì)胞的代謝負(fù)荷：誘導(dǎo)表達(dá)表達(dá)載體的誘導(dǎo)復(fù)制 提高表達(dá)蛋白的穩(wěn)定性，防止其降解：克隆一段原核序列，表達(dá)融合蛋白采用某種突變菌株表達(dá)分泌蛋白質(zhì)2 細(xì)菌的限制與修飾系統(tǒng)有什么意義？大腸桿菌K12限制與修飾系統(tǒng)的遺傳分析揭示的4種表型是什么？ 宿主控制的限制與修飾現(xiàn)象廣泛存在于原核細(xì)菌中，它有兩方面的作用，一是保護(hù)自身DNA不受限制；二是破壞入侵外源DNA使之

15、降解。細(xì)菌正是利用限制與修飾系統(tǒng)來(lái)區(qū)分自身DNA與外源DNA的。外源DNA可以通過多種方式進(jìn)入某一生物體內(nèi)，但是它必須被修飾成受體細(xì)胞的限制內(nèi)切酶無(wú)法辯認(rèn)的結(jié)構(gòu)形式，才能在寄主細(xì)胞內(nèi)得以生存，否則會(huì)很快被破壞。因此，在基因工程中，常采用缺少限制作用的菌株作為受體，以保證基因操作的順利完成。大腸桿菌K12限制與修飾系統(tǒng)的遺傳分析揭示，它有以下4種表型：rk+mk+ 野生型rk-mk+ 限制缺陷型 rk-mk- 限制和修飾缺陷型 rk+mk- 修飾缺陷型 3 試述5RACE技術(shù)原理和方法PCR用于擴(kuò)增代表mRNA轉(zhuǎn)錄物某一單位點(diǎn)與其3或5末端之間區(qū)域的部分cDNA稱為快速擴(kuò)增cDNA末端技術(shù)（RACE）。如果已知mRNA的一片段鏈內(nèi)短序列，據(jù)此或設(shè)計(jì)基因特異引物，用原先存在的poly(A)尾（3末端）或附加的同聚尾（5末端）互補(bǔ)的序列做末端引物，就可以獲得從未知末端直到已知區(qū)域的部分cDNA序列。為獲得5末端部分cDNA克隆需用基因特異引物，產(chǎn)物第一鏈產(chǎn)物，可用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶及dATP加poly(A)尾。通過QT引物和反轉(zhuǎn)錄使用的上游基因特異引物生成第二鏈cDNA。4 大腸桿菌作為基因工程受體菌的優(yōu)缺點(diǎn)是什么？?jī)?yōu)點(diǎn)：大腸桿菌培養(yǎng)方便、操作簡(jiǎn)單、成本低廉，基礎(chǔ)生物學(xué)、分子遺傳學(xué)等方面的背景知